氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定魚(yú)金注射液中芳樟醇和甲基正壬酮含量

陳驍勇，葛玉松

（1. 江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224000； 2. 江蘇省鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心，江蘇 鹽城 224000）

魚(yú)金注射液由魚(yú)腥草和金銀花2 味藥材經(jīng)現(xiàn)代工藝提取制成，具有清熱解毒功效，臨床常用于治療熱毒內(nèi)盛所致上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱［1-4］。魚(yú)腥草為三白草科植物蕺菜Houttuynia cordataThunb. 的新鮮全草或干燥地上部分，含有生物堿、揮發(fā)油等多種成分，其中揮發(fā)性成分甲基正壬酮具有抗氧化、抗炎、抗病毒等作用［5-7］。金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb. 的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，含有機(jī)酸、揮發(fā)油、黃酮等成分，其中揮發(fā)油芳樟醇對(duì)大腸桿菌具有較強(qiáng)抑制作用［8-10］。目前，魚(yú)金注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［11］中僅甲基正壬酮的定量測(cè)定方法。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究中采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC - MS/MS）法同時(shí)測(cè)定制劑中芳樟醇和甲基正壬酮的含量［12-15］。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 8890GC - 7000D 型氣質(zhì)聯(lián)用分析儀（含Agilent 8890 型氣相色譜儀）、7000D 型三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器、7697A 型頂空進(jìn)樣器，均購(gòu)自安捷倫科技有限公司；XS05DU 型電子天平（梅特勒- 托利多儀器<上海>有限公司）。

1.2 試藥

魚(yú)金注射液（陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為19040079，20200129，190301，20200619，191208）；芳樟醇對(duì)照品（批號(hào)為111503 -202004，含量98.8%），甲基正壬酮對(duì)照品（批號(hào)為110834 - 201603，含量99.8%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件

色譜條件：色譜柱為Agilent 19091S - 431 HP -5MS 毛細(xì)管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫，初始溫度為70 ℃，保持5 min，以5 ℃/min 的速率升至140 ℃，保持5 min，以25 ℃/min 的速率升至250 ℃；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣方式為頂空進(jìn)樣，置10 mL頂空瓶中，加熱溫度為90 ℃，平衡45 min，分流比為10∶1。

質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源；電子能量為70 eV；離子源溫度為230 ℃；MSD 傳輸線溫度為280 ℃；四極桿溫度為150 ℃；淬滅氣（氦氣）流速為2.25 mL/ min；碰撞氣（氮?dú)猓┝魉贋?.50 mL/ min；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描模式，參數(shù)優(yōu)化見(jiàn)表1。總離子流圖見(jiàn)圖1。

表1 MRM參數(shù)優(yōu)化Tab.1 Optimization of MRM parameters

圖1 總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms

2.2 溶液制備

分別稱取芳樟醇對(duì)照品34.37 mg、甲基正壬酮對(duì)照品15.25 mg，精密稱定，置同一50 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解，定容，即得混合對(duì)照品貯備液；精密量取0.8 mL，置10 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。以樣品為供試品溶液。按魚(yú)金注射液處方工藝分別制成缺魚(yú)腥草、金銀花的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得系列混合對(duì)照品溶液。精密量取1 mL，按2.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X，mg/mL）為橫坐標(biāo)、離子強(qiáng)度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程及線性范圍。詳見(jiàn)表2。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=6）Tab.2 Results of the linear relation test（n=6）

精密度試驗(yàn)：精密量取混合對(duì)照品溶液1 mL，共6 份，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度。結(jié)果芳樟醇、甲基正壬酮離子強(qiáng)度的RSD分別為1.21%和0.97%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，8，16，24 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度。結(jié)果芳樟醇、甲基正壬酮離子強(qiáng)度的RSD分別為1.91%和1.39%（n= 6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為19040079）樣品，共6 份，每份1 mL，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度，并計(jì)算樣品含量。結(jié)果芳樟醇和甲基正壬酮的平均含量分別為49.28 μg/mL和31.72 μg/mL，RSD分別為1.81%和1.45%（n= 6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為19040079）樣品0.5 mL，共6 份，精密加入對(duì)照品溶液0.5 mL，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.3 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取5 批樣品各適量，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子強(qiáng)度，并計(jì)算樣品含量，平行操作3次。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果（μg/mL，n=3）Tab.4 Results of content determination of linalool and methyl -nnonylketone in the samples（μg/mL，n=3）

3 討論

3.1 供試品溶液制備

預(yù)試驗(yàn)中比較了蒸餾提取揮發(fā)油法、固相萃取小柱法及頂空進(jìn)樣法。揮發(fā)油測(cè)定法樣品用量較大，蒸餾時(shí)間長(zhǎng)，油水不易完全分離，易有水溶性雜質(zhì)干擾。固相萃取小柱法的前處理復(fù)雜，有機(jī)溶劑用量大。而頂空進(jìn)樣法可直接取樣品進(jìn)樣，操作簡(jiǎn)便。

3.2 測(cè)定方法確定

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中采用火焰離子化檢測(cè)器測(cè)定成分含量，該法靈敏度低，且對(duì)柱效要求高。而頂空進(jìn)樣法可直接取樣，具有快速、高效、環(huán)保的優(yōu)勢(shì)。質(zhì)譜法具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、雜質(zhì)不影響主成分測(cè)定等特點(diǎn)，故本試驗(yàn)中采用質(zhì)譜法測(cè)定。預(yù)試驗(yàn)中還考察了頂空溫度（85，90，95 ℃）及平衡時(shí)間（35，40，45，60 min），發(fā)現(xiàn)采用頂空溫度為90 ℃、平衡時(shí)間為45 min時(shí)，重復(fù)性較好。

3.3 質(zhì)譜條件確定

預(yù)試驗(yàn)中對(duì)混合對(duì)照品溶液進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜全掃描，綜合考慮一級(jí)掃描質(zhì)譜圖中質(zhì)荷比和響應(yīng)強(qiáng)度選取母離子。對(duì)選定母離子進(jìn)一步進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描，選取2 對(duì)離子對(duì)用于MRM 掃描，并對(duì)MRM 掃描離子對(duì)進(jìn)行碰撞能量?jī)?yōu)化。