復合型飼料添加劑蝦肽對南美白對蝦生長性能和免疫力的影響

許合金陳東明羅日泉

(1.湛江銀恒生物科技有限公司/廣東省生物發酵飼料工程技術研究中心，廣東 湛江 524394；2.湛江恒興珊瑚飼料有限公司，廣東 湛江 524400)

小肽一般是由2個或3個氨基酸殘基組成的寡肽，主要來源于蛋白質水解或動物體內。小肽能被直接吸收并進入血液循環，且吸收利用比相同水平的氨基酸更為高效[1-3]。近年來，小肽作為一種綠色飼料添加劑在飼料工業得到了廣泛的應用。研究發現，飼料中添加小肽可以提高凡納濱對蝦[4]、星斑川鰈[5]和草魚[6]等水產動物的生長性能。地衣芽孢桿菌是一種兼性厭氧的芽孢桿菌，可以調節動物腸道微生態平衡，抑制致病菌的生長和繁殖，促進有益菌的生長。地衣芽孢桿菌作為一種飼用益生菌在我國飼料工業得到大量應用。大量研究表明，地衣芽孢桿菌在水產飼料中添加可以提高大瀧六線魚[7]、鯉魚[8]和凡納濱對蝦[9]等水產動物的生長性能及增強其免疫力。蛋白酶是一種催化蛋白質水解的酶。近年來，隨著植物蛋白源在水產飼料配方的比例逐漸增大，蛋白酶在水產飼料中的應用備受關注。研究表明，蛋白酶在水產飼料中添加可提高水產動物的生長性能[10-12]，在植物蛋白用量比例大的水產飼料中更為明顯[10]。

小肽、地衣芽孢桿菌和蛋白酶雖然單獨作為飼料添加劑在飼料中得到了廣泛應用，但3者同時在水產飼料中的添加還沒有研究報道。南美白對蝦是我國海水養殖的主要品種之一。為了提高南美白對蝦的養殖水平，增加養殖收益，本試驗旨在研究添加富含小肽、地衣芽孢桿菌和蛋白酶的復合型飼料添加劑蝦肽對南美白對蝦生長性能和免疫指標的影響，確定其適宜的添加量，為蝦肽在對蝦飼料中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗選用的南美白對蝦幼蝦1200尾由廣東好仕達實業有限公司提供，試驗蝦來源于同批18日齡幼蝦，初體質量為(2.95±0.02)g，個體均勻，健康狀況良好。

蝦肽：湛江銀恒生物科技有限公司生產，以南極磷蝦與豆粕為主要原料，通過耐高溫地衣芽孢桿菌固態發酵法生產。其主要技術指標：蛋白質含量為50%，酸溶性蛋白含量為57%，蛋白酶酶活為7000U·g-1，地衣芽孢桿菌為1.3×109CFU·g-1。

將蝦肽與基礎飼糧，具體見表1，超微粉(過80目篩)粉碎后，然后通過V型混合機進行充分混勻，接著添加油脂和水在圓桶式攪拌機中混合均勻，通過擠條機壓制成條狀飼料，最后通過一系列烘箱熟化、干燥、冷卻、破碎機等制成顆粒試驗飼料。

表1 基礎飼料組成

1.2 試驗分組與管理

將1200尾南美白對蝦幼蝦隨機分為4個處理組，每處理組3個重復，每個重復100尾，各重復平均體質量無顯著差異。各組分別喂養添加了0%、0.05%、0.1%和0.15%蝦肽的飼料。

試驗在廣東好仕達實業有限公司內進行。每天按體質量的8%投餌，分4次定時、定量投喂，每天換水、清污，并記錄采食量，試驗期為55d。

1.3 指標測定

1.3.1 生長性能

每周統計采食量，并于試驗第55天稱取試驗蝦的重量，并計算增重率、成活率以及飼料轉化率。

增重率(%)=(終末體質量-初始體質量)/初始體質量×100%

成活率(%)=(試驗結束時蝦尾數/試驗開始時投放的蝦尾數)×100%

飼料轉化率(%)=(終末體質量-初始體質量)/飼料攝入量×100%

1.3.2 血清免疫指標

在試驗結束當天，每個重復選取50尾蝦心臟采集血液樣品，然后置于無菌的離心管中，5000r·min-14℃離心10min，分離血清并保藏在-20℃冰箱中，用于測定血清酚氧化酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶的活性。使用南京建成生物工程研究所試劑盒測定南美白對蝦血清酚氧化酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶的活性，具體測定方法參考使用說明書。

1.3.3 肝胰腺免疫指標

在試驗結束的當天，每個重復選取30尾蝦采集肝胰腺，并將采集的肝胰腺其放置于-80℃冰箱凍藏備用。分析時，稱取一定質量的肝胰腺，按照9倍體積(M∶V)加入提前在4℃冰箱中預冷的0.1 mol·L-1pH6.4的磷酸緩沖液稀釋，在冰浴中用勻漿器勻漿，將勻漿液在4℃、5000r·min-1離心10min后，取上清液，用于酚氧化酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶、堿性磷酸酶和丙二醛含量的測定。使用南京建成生物工程研究所試劑盒測定南美白對蝦肝胰腺酚氧化酶、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶和溶菌酶的活性及丙二醛的含量，具體測定方法參考使用說明書。

1.3.4 數據處理

試驗數據使用SPSS statistics 24.0軟件進行方差分析，結果表現形式為平均值±標準差，P<0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 蝦肽對南美白對蝦生長性能的影響

由表2結果可知，與對照組相比，添加蝦肽均可以提高對蝦增重率、成活率和飼料轉化率(P<0.05)，且隨著蝦肽添加量的增加，南美白對蝦的生長加快，成活率提高，飼料轉化率提升(P<0.05)。0.15%蝦肽組與0.1%蝦肽組相比，增重率與飼料轉化率增加幅度不大。考慮蝦肽在飼料中的應用成本，性價比最佳的為添加0.1%的蝦肽。與對照組相比，添加0.1%的蝦肽，增重率提高了15.15%，飼料轉化率提升了16.85%。

表2 飼料添加蝦肽對南美白對蝦生長性能的影響

2.2 蝦肽對南美白對蝦血清免疫指標的影響

由表3結果可知，與對照組相比，添加蝦肽均可以提高對蝦血清酚氧化酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶的活性(P<0.05)，且隨著蝦肽添加量的增加，酚氧化酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶的酶活性增加，但0.15%蝦肽組與0.1%蝦肽組相比，增加幅度不大。可見，飼料添加蝦肽可以增加南美白對蝦血清的免疫指標。

表3 飼料添加蝦肽對南美白對對蝦血清免疫指標的影響

2.3 蝦肽對南美白對蝦對肝胰腺免疫指標的影響

飼料中添加蝦肽對南美白對蝦肝胰腺免疫指標的影響見表4。由表4結果可知，與對照組相比，飼糧添加蝦肽可顯著降低南美白對蝦肝胰腺組織中丙二醛的含量(P<0.05)，且隨著蝦肽含量的增加，丙二醛的含量逐漸降低；飼糧添加蝦肽可顯著增加肝胰腺組織中超氧化物歧化酶的活性(P<0.05)，且隨著蝦肽含量的增加超氧化物歧化酶的活性逐漸增加；飼糧添加小肽對酚氧化酶和堿性磷酸酶活性無顯著影響(P>0.05)。

表4 飼料添加蝦肽對南美白對蝦肝胰腺免疫指標的影響

3 討論

3.1 蝦肽對南美白對蝦生長性能的影響

李日美等研究表明，飼料中添加1.0%～2.0%的小肽可以顯著提高凡納濱對蝦幼蝦的生長性能[4]。仁澤林等研究表明，飼料中添加0.5%的小肽對南美白對蝦有明顯的促生長作用[13]。鄧岳松等研究表明，飼料中添加0.05%的植物活性小肽對史氏鱘稚魚有良好的促生長作用[14]。可見，不同的小肽在飼料中的最適添加量不同，這可能與小肽的分子量大小及來源等因素有關。本試驗中，添加0.1%～0.15%的蝦肽對南美白對蝦有良好的促生長作用，其最適添加量在上述研究最佳添加量的范圍之內。另外，本試驗的蝦肽的促生長作用除了因其含有小肽外，還可能與其含有地衣芽孢桿菌與蛋白酶有關。劉強強等研究表明，飼料中添加地衣芽孢桿菌可以顯著提高凡納濱對蝦的生長性能與飼料轉化率[9]。趙覓美等研究表明，飼料中添加蛋白酶可以顯著提高吉富羅非魚的生長性能與飼料轉化率[11]。

3.2 蝦肽對南美白對蝦血清免疫指標的影響

本試驗選用酚氧化酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶這3種具有代表性的血清非特異性免疫指標，來評價富含小肽與地衣芽孢桿菌的蝦肽對南美白對蝦血清非特異性免疫性能的影響。

酚氧化酶是一種酚氧化酶原激活系統中的補體系統，其在甲殼動物免疫識別與防疫等免疫功能方面發揮重要的作用[15]。溶菌酶對革蘭氏陽性菌有明顯的抑制效果，是水產動物非特異免疫系統的重要組成部分[16]。超氧化物歧化酶是一種重要的抗氧化酶，其可以清除生物機體內有毒性作用的活性氧，防止機體生物分子的損傷，對免疫系統具有一定的保護作用[17]。

許合金等研究表明，飼料中添加0.5%小肽優蛋白可以顯著增加血清酚氧化酶的活性，添加2.0%的小肽優蛋白可以顯著增加溶菌酶的活性，但對血清超氧化物歧化酶的活性沒有顯著性的影響[18]。李日美等研究表明，飼料中添加小肽可以顯著增加酚氧化酶與超氧化物歧化酶的活性，但對溶菌酶的活性無顯著性的影響[4]。可見，不同的小肽對南美白對蝦血清中酶的活性影響不同，這可能與小肽的來源與其分子量大小有關。本研究中，添加蝦肽可以顯著增強酚氧化酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶這3種酶的活性，與上述研究略有不同，這可能與本試驗中蝦肽除了含有小肽外，還含有地衣芽孢桿菌。樊英等研究表明，地衣芽孢桿菌可以提高大瀧六線魚血清中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶等的活性[7]。可見，地衣芽孢桿菌可以影響水產動物血清免疫指標。

3.3 蝦肽對南美白對蝦肝胰腺免疫指標的影響

肝胰腺是南美白對蝦機體內集免疫調節和抗應激解毒等多種功能于一體的重要器官。丙二醛是機體內自由基作用于脂質發生過氧化反應的終產物，會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合，具有細胞毒性[19]。堿性磷酸酶可直接殺死侵入病原，并且可以將其進一步水解消化，在凡納濱對蝦機體免疫系統抵御病原的免疫反應中起重要作用[20]。

李日美等研究表明，飼料中添加小肽可以顯著降低肝胰腺丙二醛的含量，顯著增加肝胰腺溶菌酶的活性，但對超氧化物歧化酶與堿性磷酸酶活性無顯著影響[4]。許合金等研究表明，飼料中添加小肽優蛋白可以顯著降低肝胰腺丙二醛的含量，但對酚氧化酶、超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性無顯著的影響[18]。劉強強等研究表明，飼料中添加地衣芽孢桿菌可以顯著降低肝胰腺丙二醛的含量，顯著增加超氧化物歧化酶的活性，但對堿性磷酸酶和酚氧化酶無顯著的影響[9]。本研究中，飼料中添加富含小肽與地衣芽孢桿菌的蝦肽可以顯著降低肝胰腺丙二醛的含量，顯著增加超氧化物歧化酶的活性，但對酚氧化酶與堿性磷酸酶活性無顯著的影響。與上述小肽與地衣芽孢桿菌對南美白對蝦肝胰腺免疫指標的影響基本一致。

4 結論

添加富含小肽、地衣芽孢桿菌和蛋白酶的蝦肽可以提升飼料轉化率，提升對蝦的生長性能與免疫指標。蝦肽的最佳添加量為0.1%，與對照組相比，對蝦增重率提高了15.15%，飼料轉化率提升了16.85%。