降血壓肽動物實驗效果Meta分析

伍善廣 黃　菲 蒙華琳 裴世成　

降血壓肽動物實驗效果Meta分析

伍善廣 黃菲 蒙華琳 裴世成

（廣西科技大學醫學部，廣西 柳州 545000）

目的：采用系統評價的方法分析降血壓肽（ACEI）對自發性高血壓大鼠（SHR）血壓值的影響。方法：利用計算機檢索中國知網（CNKI）、維普數據庫（VIP）、萬方數庫（WF）、PubMed、Elsevier ScienceDirect等數據庫中降血壓肽對自發性高血壓大鼠（SHR）血壓值影響的相關實驗。并通過提取文獻資料進行質量分析，采用Cochrane提供的統計軟件Review Manage5.4對所收集的數據進行統計分析。結果：納入13篇文獻，樣本170例，Meta分析結果顯示：使用降血壓肽來治療SHR的效果與卡托普利大致相同（MD=5.24，95%CI=[3.03,7.46]，＜0.001），但是與陰性對照（生理鹽水或蒸餾水）相比治療效果更佳（MD=-22.88，95%CI=[-25.03,-20.69]，＜0.01），并且均具有統計學意義。對于預后心率情況固定效應模型統計：使用降血壓肽之后SHR心率顯著降低（MD=28.05，95%CI=[14.60，41.51]，Z=4.09，＜0.01），差異具有統計學意義。結論：降血壓肽能夠有效地緩解SHR的血壓狀況。

降血壓肽；SHR；Meta分析；動物實驗

引言

目前高血壓（hypertension）是一個廣泛存在的健康問題，據預計世界上有20%的成年人患有不同程度的高血壓。同時高血壓的病因十分復雜，往往會受遺傳、環境、年齡、不良生活方式等因素的影響。近年來，高血壓的患病率和死亡率呈增長趨勢，2015年全球患者數已經達到11.3億例，是全球疾病負擔的首要因素，此病還會引發腦卒中、冠心病及心力衰竭等心腦血管疾病[1-4]。由于高血壓是一種慢性疾病，其潛伏期比較長，而且在患病早期很難察覺到，無疑是人們健康的“無形殺手”，嚴重影響著全世界人類的健康[5]。

目前預防和治療高血壓疾病的任務迫在眉睫，研究開發低副作用且降血壓效果明顯的藥物有著重大意義。在臨床研究中常常利用血管緊張素轉換酶抑制劑（如卡托普利）來對高血壓患者進行針對性治療。雖然該類藥物治療效果明顯，但是這種藥物會對患者造成一定程度的副作用（比如咳嗽、味覺異常、腎功能降低等），因此這類藥物不適合患者治療期間長期服用。為了解決血管緊張素轉換酶抑制劑對高血壓患者帶來的副作用問題，越來越多的科研人員把目光轉向了血管緊張素轉化酶抑制肽（ACEIP），又被稱為降血壓肽。這是一類具有顯著降血壓作用的多肽，它與化學合成的降血壓藥物相比，具有無副作用、吸收好、并且僅對病理性高血壓患者有降壓效果等優點[6]。

在通過閱讀大量的參考文獻后了解到自發性高血壓大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat，SHR）的發病機制與人類原發性高血壓發病機制類似，因此針對高血壓藥物測試的實驗適用對象采用的是SHR。在動物實驗中，降血壓肽對自發性高血壓大鼠進行灌胃或者靜脈注射后，都能有效降低SHR的血壓。

本文主要通過查找不同數據庫中符合標準的文獻來對降血壓肽在動物實驗中的效果進行Meta分析，并且采用了陽性對照（卡托普利）和陰性對照（生理鹽水或者蒸餾水）對比SHR的降血壓效果，以此為食源性降血壓肽的臨床應用提供更多的實驗依據。

1 資料與方法

1.1 檢索方法

本文利用計算機檢索不同的中英文數據庫，檢索時間為該數據庫建庫到2021年5月。這些數據庫有維普期刊數據庫（VIP）、萬方數據庫（WanFang）、中國期刊全文數據庫（CNKI）、PubMed、Elsevier ScienceDirect。為了盡量不遺漏相關文獻，在檢索時采用主題詞和自由詞相結合的方法進行查找。其中中文檢索詞主題詞為降血壓肽、動物實驗，自由詞為自發性高血壓大鼠、高血壓等，在英文文獻中檢索的主題詞是ACE inhibitory peptide，自由詞為SHR、animal experiment等。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準

（1）文獻來源：原始文獻是血管緊張素轉化酶抑制肽干預SHR動物模型的實驗，并且文獻中包含降血壓肽干預前后SHR血壓值變化的對比數據；為了避免不同動物的實驗效果差異性，在選擇文獻時固定了實驗對象都是自發性高血壓大鼠（SHR）。

（2）干預措施：實驗組使用食源性降血壓肽，陽性對照組使用卡托普利，陰性對照組使用蒸餾水或者生理鹽水。

（3）結局指標：SHR血壓變化數據以及相應的心率變化差異。

1.2.2 排除標準

（1）重復發表的文獻；（2）實驗組不是采用降血壓肽；（3）實驗對象不是自發性高血壓大鼠；（4）結局指標不全；（5）不能獲取全文的文獻；（6）綜述或系統評價文獻。

1.3 文獻篩選與數據提取

在選擇文獻的時候先由兩個人獨立檢索篩選，在不同的數據庫檢索出來的文獻可能出現重復文獻，因此對于檢索的文獻首先要去重：把從不同數據庫中的初步檢索文獻導入EndNote軟件中進行自動去重，然后再初步閱讀引用信息再次去重，只有這樣才能夠更加精準地篩選出不重復的文獻，從而達到去重的目的。

然后對去過重的文獻進行二次篩選：第一步是看文章的題目和摘要，根據制定的納入和排除標準進行篩選，并且記錄下排除的原因及對應數量。第二步是閱讀全文，這個時候就需要下載全文詳細閱讀，關注實驗對象是否為SHR，文章中是否涉及血壓和心率這兩個結局變量等。以此來篩選出第一步無法確定的文獻，同時根據納入和排除標準記錄下排除文獻的原因及數量。在文獻的篩選過程，當兩個人對某些文獻出現不同的意見時，就需要第三個人來仔細傾聽并且分析兩人的想法然后通過專業判斷做出最后的取舍。在三個人的共同合作下，把所有符合標準的文獻整理成一個表格，如表1所示。

表1 納入文獻的基本特征

注：①為血壓；②為心率。

表格中包含的數據資料有納入文獻作者及年份、實驗組和對照組對應的樣本量、在對應療程后實驗組和對照組血壓均值及對應標準差、動物實驗中實驗組所采用的降血壓肽和包含的結局指標。本文所進行的Meta分析全部基于表1的數據及對應文獻的結局指標。

1.4 文獻質量評估

納入的文獻往往要先對其進行質量評估，而關于動物實驗文獻的質量評估常用到的工具有：STAIR清單、CAMARADES清單和ARRIV指南。本文選擇CAMARADES清單來對動物實驗偏倚風險進行評估，對所納入的文獻進行質量評估。

1.5 統計學方法

本文首先將對應結局變量的數據整理成表格，然后采用Cochrane提供的統計軟件Review Manage5.4對整理后的數據進行錄入以及分析。第一步針對文獻數據進行異質性分析，這一步很重要，就是為了驗證不同實驗中的是否存在非抽樣誤差。當異質性檢驗的結果為I＜50%或者＞0.10時，表示所選文獻具有同質性，一般選用固定效應模型。反之則采用隨機效應模型。在必要的時候根據文獻數據的某些特征進行亞組分析和敏感性處理，以此來得出文獻偏倚來源，進而能夠得到更加準確的結論。

本文進行Meta分析所關注的血壓值數據屬于計量數據，因此采用加權均數差來表示，同時通過森林圖得出其對應的95%置信區間。文獻的發表偏倚是分析文獻質量的一個關鍵因素，經過查閱資料可以知道，判定文獻發表偏倚的方法很多，有線性回歸法、漏斗圖回歸法、秩相關法、剪補法和Richy法，其中以漏斗圖的對稱與否來判斷發表偏倚的方法最為常用[20]。本文研究中文獻的發表偏倚也選用漏斗圖來進行分析。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

在進行Meta分析之前，首先需要下載相關文獻，本文在維普期刊數據庫（VIP）、萬方數據庫（WanFang）、中國期刊全文數據庫（CNKI）、PubMed、Elsevier ScienceDirect等數據庫初步檢索時間段為建庫到2021年5月所有關于降血壓肽干涉自發性高血壓大鼠實驗的相關文獻，然后通過文獻管理軟件EndNote對所有重復文獻進行去重。再通過閱讀題目和摘要來進行篩選，以此剔除不符合納入標準的文獻。在這個步驟中可能存在一些無法確定是否納入的文獻，這個時候就進行全文篩選。將不確定的文獻通篇詳細閱讀，根據納入和排除標準來進行保留和剔除。通過以上三個步驟將本次檢索的文獻進行層層篩選，并且記錄每個步驟排除的原因及對應文獻數量，最終從1048篇文獻中納入了13篇符合標準的研究[7-19]。繪制文獻的篩選流程如圖1所示。

圖1 文獻篩選流程圖

2.2 納入研究的質量評價

對于最終納入的文獻，首先要進行質量評估。本文中采用CAMARADES清單來對降血壓肽影響SHR血壓值的文獻進行風險評估，以此來確定所納入文獻的質量高低。利用統計軟件Review Manage5.4分別繪制13篇文獻的納入文獻偏倚風險圖和風險總結圖如圖2、圖3所示。

圖3 納入文獻偏倚風險總結圖

2.3 Meta分析結果

2.3.1 降血壓肽與陽性對照研究

最終納入的13篇文獻中一共包含170例自發性高血壓大鼠（SHR），并且所有文獻中的陽性對照均為卡托普利，干預措施都是食源性降血壓肽。通過異質性檢驗結果（圖4）可以看到2=46%＜50%，因此選擇采用固定效應模型。由圖4的森林圖可以看到MD=5.24，95%的置信區間為[3.03,7.46]，并且＜0.001，因此可以在降血壓肽與陽性對照研究中得知降血壓肽對自發性高血壓大鼠的血壓緩解效果與陽性對照（卡托普利）大致相同。將13篇文獻的數據來進行發表偏倚研究，繪制出漏斗圖如圖5所示。從圖5中可以看出大致均勻分布在兩側，因此可以知道13篇文獻無發表偏倚。

圖4 降血壓肽與陽性性對照對SHR血壓影響的森林圖

圖5 降血壓肽對SHR血壓影響的漏斗圖

2.3.2 降血壓肽與陰性對照研究

在最終納入的13篇文獻中，陰性對照均是使用生理鹽水或者蒸餾水來進行干預。將陰性對照和降血壓肽干預后的血壓數據錄入進行研究。繪制相應的對SHR血壓值影響的森林圖如圖6所示，從森林圖中可以得到數據信息MD=-22.88，95%CI=[-25.03,-20.69]，＜0.001，因此可以判定降血壓肽對高血壓改善效果優于陰性對照效果。在圖6中可以看到2=86%>50%，即存在異質性，這表示納入文獻的不同實驗間的差異不僅僅是有抽樣誤差導致的，這個時候就需要進行敏感性分析。通過逐篇剔除的方法來進行敏感性分析并且觀察2的變化。最終發現當去掉王茵[13]和翟愛華[16]這兩篇文獻后繪制的森林圖（圖7）中2=43%＜50%，即不存在異質性。此時針對不存在異質性的11篇文獻進行發表偏倚分析，繪制漏斗圖如圖8所示，發現所選文獻均勻分布在兩側，即不存在發表偏倚。

圖6 降血壓肽與陰性對照對SHR血壓影響的森林圖

圖7 敏感性分析后降血壓肽與陰性對照對SHR血壓影響的森林圖

圖8 敏感性分析后降血壓肽對SHR血壓影響的漏斗圖

通過觀察發現不同文獻中降血壓實驗的實驗對象大鼠的周齡都不太相同，因此可以從大鼠周齡這個角度來進行亞組分析。將自發性高血壓大鼠按照周齡分為三組（＜=6周、6～8周和＞8周）進行亞組分析繪制的森林圖如圖9所示。在整個亞組分析中不存在異質性（＜0.001，2＜50%）。但是在三亞組中亞組3的2=54%＜50%且＜0.001，即亞組3存在異質性。通過固定效應模型統計可知：降血壓肽與陰性對照組的實驗結果相比，前者降低SHR的高血壓效果更好。

圖9 基于SHR周齡的亞組分析

2.3.3 對心率的影響

心率是直接反映心臟功能狀態和交感神經活性的指標，高血壓通常會導致心律失常，因此心率的變化與心血管疾病發生率緊密相關[17]。所以實驗前后SHR大鼠的心率變化可以評估降血壓肽對大鼠降血壓效果。

在最終納入的13篇文獻中，有3篇文獻給出了對自發性高血壓大鼠在降血壓肽干預前后的心率變化。使用統計軟件Review Manage5.4對整理后的心率數據進行分析繪制森林圖如圖10所示，從圖中可以看出2＜50%，不存在異質性。故采用固定效應模型，并且由圖10可知在SHR的實驗中使用降血壓肽能夠顯著的降低大鼠的心率。對包含心率數據的3篇文獻進行發表偏倚研究，繪制出相應的漏斗圖如圖11所示。經檢驗研究中無發表偏倚。

圖10 使用降血壓肽前后對SHR心率影響的森林圖

圖11 使用降血壓肽前后對SHR心率影響的漏斗圖

3 討論

如今高血壓的患病群體越來越大，而且高血壓會引發身體的其他器官功能性和器質性的改變，危險因素種類很多，從而引發很多綜合征，因此高血壓的治療必須要受到廣泛的關注。這就更加要求能夠研發出無副作用的降血壓藥物。

本文通過文獻篩選最終納入了13篇文獻來進行Meta分析，主要想了解降血壓肽對自發性高血壓大鼠的降壓效果以及SHR試驗前后心率的變化。本研究選取的文獻均進行了陽性、陰性對照，以此來對比降血壓肽的實驗效果，所得到的結論如下：

（1）與陽性對照組（卡托普利）相比較：降血壓肽的降壓效果大致相同。并且相比于卡托普利類降壓藥物，降血壓肽具有來源廣、無副作用等優點，因此安全性更高。并且通過一些研究可以發現降血壓肽僅僅對SHR有降壓作用，而對于正常大鼠不會降低其血壓。

（2）與陰性對照組（生理鹽水或者蒸餾水）相比較：降血壓肽對SHR的降壓效果明顯優于陰性對照組，因此從另一個角度說明降血壓肽投入醫療實驗是有一定的依據的。

（3）13篇文獻中有3篇文獻中涉及到使用降血壓肽前后的SHR心率數據，本文將心率數據也作為一個結局指標進行研究，在對使用降血壓肽前后SHR心率測量數據中可以看出，降血壓肽能夠顯著降低SHR的心率。這也說明了降血壓肽能夠有效地降低自發性高血壓大鼠的血壓。

近年來越來越多的臨床結果表明，使用的血管緊張素轉化酶抑制劑卡托普利等產品屬于化學合成品，它能夠有效緩解患者的高血壓癥狀，但是此類產品對于患者的副作用也不可忽視。因此研究者通過動物實驗來找出安全性更高的降血壓藥物。食源性降血壓肽具有來源廣、無副作用等優點，尤其是只對高血壓患者起到降壓效果，而對血壓正常者無降壓作用，這就為降血壓藥物開辟了一條新路。

本文選取的研究都是通過不同食品制成的降血壓肽在自發性高血壓大鼠身上進行實驗，研究其在SHR體內的降血壓效果。本研究將對抗高血壓新藥物和保健食品添加成分的開發提供了更加充分的科學依據。在許多的報道中也可以看到醫療界對生物活性肽的生理功效給予了充分的肯定，所以降血壓肽在高血壓患者藥物中的開發是有一定前景的。本篇文章所做的Meta分析中也給予了相應的佐證。

4 結論

本文雖然綜合不同研究實驗結果總結出了降血壓肽的醫療效果，但是本文依然存在許多不足：

（1）納入研究的文獻質量及樣本數量仍有限，檢索不同數據庫從建庫到2021年5月的所有相關文獻，最后符合標準的只有13篇。在后續研究中爭取找到更多數據庫的相關研究，使得本文的Meta分析更具說服力。

（2）納入的研究中中對SHR進行實驗的時長不同，這一點可能是Meta分析具有異質性的來源之一。進而影響分析結果的可信度。并且在做此類研究時要嚴格遵守動物倫理標準，規范循證醫學方法，因此后面需要納入更多高質量的文獻進一步的驗證。

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Meta Analysis on the Effect of Antihypertensive Peptide in Animal Experiment

Objective: To analyze the effect of antihypertensive peptide (ACEI) on blood pressure in spontaneously hypertensive rats (SHR) by systematic evaluation. Methods: The effects of antihypertensive peptides on blood pressure in spontaneously hypertensive rats (SHR) were searched by computer in CNKI, VIP, WF, PubMed, Elsevier Science direct and other databases. And through the extraction of literature for quality analysis, and the statistical software Review Manage 5.4 provided by Cochrane was used for statistical analysis of the collected data. Results: 13 literatures and 170 samples were included. The results of Meta-analysis showed that the effect of antihypertensive peptide in the treatment of SHR was roughly the same as that of captopril (MD=5.24, 95%CI= [3.03, 7.46],<0.001), but it was better than the negative control (normal saline or distilled water) (MD= -22.88, 95%CI= [-25.03, -20.69],<0.01), and all had statistical significance. For the fixed effect model statistics of prognostic heart rate: after the use of antihypertensive peptides, SHR heart rate decreased significantly (MD=28.05, 95%CI= [14.60, 41.51], Z=4.09,<0.01). Conclusion: Antihypertensive peptide can effectively alleviate the blood pressure condition of SHR.

antihypertensive peptide; SHR; Meta analysis; animal experiment

R961

A

1008-1151(2022)03-0054-05

2022-01-10

國家自然科學基金（21766003）。

伍善廣（1974－），男，廣西科技大學醫學部教授，博士，研究方向為天然產物。

裴世成（1966－），男，廣西科技大學醫學部副主任藥師，研究方向為臨床藥學。