某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析儀A型的分析性能驗(yàn)證

李良敏，熊茂程，雷艷梅，畢冬明，王 淵，楊 雪

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川成都 610072

根據(jù)ISO 15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的規(guī)定，要求實(shí)驗(yàn)室必須按照標(biāo)準(zhǔn)建立規(guī)范化的質(zhì)量管理體系，當(dāng)開展新的檢測項(xiàng)目，更換檢測系統(tǒng)或改變檢測試劑盒廠商時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需對其相關(guān)方法學(xué)分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，對廠商提供的評(píng)價(jià)資料主要性能進(jìn)行確認(rèn),并每年定期對儀器進(jìn)行性能驗(yàn)證[1]。本文根據(jù)文獻(xiàn)[2-6]相關(guān)文件，對某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析儀A型精密度、準(zhǔn)確度和分析測量范圍等進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本收集及處理 收集2020年7-12月本院住院部、門診及健康體檢中心體檢標(biāo)本40例，排除脂血、溶血、黃疸的血清樣品。以4 000 r/min離心5 min，分離血清后于-70 ℃冷凍保存，5 d內(nèi)復(fù)融后完成各項(xiàng)指標(biāo)的驗(yàn)證。

1.2儀器與試劑 某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析儀A型試劑及校準(zhǔn)品批號(hào)見表1。

表1 某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析儀A型試劑及校準(zhǔn)品批號(hào)

1.3質(zhì)控品及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 此品牌通用激素質(zhì)控品：PCU1(批號(hào)381162)、PCU2(批號(hào)381165)；標(biāo)準(zhǔn)品物質(zhì)為原衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2020年第1次內(nèi)分泌室間質(zhì)量評(píng)價(jià)質(zhì)控品(批號(hào)為202011、202012、202013、202014、202015)。

1.4方法 按照ISO 15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的規(guī)定，參照文獻(xiàn)[2-6]相關(guān)文件。嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程進(jìn)行校準(zhǔn)，質(zhì)控在控后，對其分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。

1.4.1正確度驗(yàn)證 依據(jù)文獻(xiàn)[6]，比對2020年原衛(wèi)生部室間質(zhì)質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果回執(zhí)。參加原衛(wèi)生部臨檢中心組織的2020年第1次室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，對其發(fā)放的5份室間質(zhì)控品進(jìn)行檢測，以室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果的靶值為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算檢測結(jié)果與靶值的偏倚(%)，以允許總誤差(TEa)的1/2為判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。

1.4.3線性范圍驗(yàn)證 依據(jù)文獻(xiàn)[2]對線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證。使用低值、高值血清按一定比例關(guān)系配制形成系列濃度的稀釋血清樣本(每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品在檢測系統(tǒng)上重復(fù)測定3次，記錄結(jié)果計(jì)算均值，做回歸統(tǒng)計(jì)分析將實(shí)測值與預(yù)期值作比較分析)，需注意的是在配制系列稀釋血清樣本時(shí)使用的加樣器需經(jīng)過校準(zhǔn)認(rèn)可，保證稀釋血清樣本的準(zhǔn)確度。各取份數(shù)按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H(L表示低值,H表示高值)的比例配置混合，形成系列驗(yàn)證樣品。計(jì)算出以上6個(gè)樣品的理論濃度，并對配制的6個(gè)樣品進(jìn)行重復(fù)測定，每份樣品重復(fù)測定3次，將實(shí)測值與理論值作比較。做線性回歸分析，得出實(shí)測值與理論值的線性關(guān)系Y=aX+b，計(jì)算相關(guān)系數(shù)(r2)，得到的線性范圍與廠家聲稱的進(jìn)行比較。

1.4.4臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證 參照文獻(xiàn)[7-10]標(biāo)準(zhǔn)，選取已知濃度在分析測量范圍內(nèi)的高值樣本1份(接近測量范圍上限)，由臨床可報(bào)告范圍的上限值及廠家推薦稀釋比例決定稀釋倍數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算預(yù)期值(理論值)；每份稀釋樣本重復(fù)測定2次，計(jì)算測定均值。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：測定均值與預(yù)期值的偏差≤1/2TEa的最大稀釋倍數(shù)乘以稀釋前的濃度即為臨床可報(bào)告范圍。

1.4.5參考區(qū)間驗(yàn)證 按照文獻(xiàn)[3]要求，從本院隨機(jī)選擇體檢中心樣本40例，男女各20例，年齡20～50歲。對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并與試劑說明書提供的參考區(qū)間進(jìn)行比較。R2≥90%以上的檢測結(jié)果在參考區(qū)間范圍內(nèi)(判定標(biāo)準(zhǔn)R2=測定結(jié)果在參考范圍的例數(shù)/總測定例數(shù)×100%，結(jié)果R2≥90%為合格)說明該參考區(qū)間符合對健康人群的篩選，即參考區(qū)間驗(yàn)證通過。

1.4.6方法學(xué)對比驗(yàn)證 根據(jù)文獻(xiàn)[11]文件要求，收集每個(gè)項(xiàng)目濃度覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平，并盡可能在線性范圍內(nèi)均勻分布的樣本各20個(gè)，分別在某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析A型和E601電化學(xué)發(fā)光分析B型檢測系統(tǒng)進(jìn)行平行測定。每例樣本在兩個(gè)檢測系統(tǒng)中的測試間隔不超過2 h，記錄兩個(gè)檢測系統(tǒng)的值并做線性回歸分析，得出此品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析A型系統(tǒng)檢測值與此品牌E601電化學(xué)發(fā)光分析B型系統(tǒng)檢測值的線性關(guān)系Y=aX+b，計(jì)算相關(guān)系數(shù)(r2)，r2≥0.90即驗(yàn)證通過。

1.4.7攜帶污染驗(yàn)證 參照蘇維等[12]對糖抗原攜帶污染率的參考，先取1份高濃度標(biāo)本連續(xù)測定3次，測定結(jié)果為H1、H2、H3；再取1份低濃度標(biāo)本連續(xù)測定3次，測定結(jié)果為Ll、L2、L3。按公式計(jì)算攜帶污染率。攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。攜帶污染率<1%即通過。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel 2016和SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和回歸方程。

2 結(jié) 果

2.1正確度驗(yàn)證結(jié)果 根據(jù)原衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2020年室間質(zhì)評(píng)結(jié)果，從表2可見5份室間質(zhì)控品的檢測結(jié)果與靶值的偏倚在-1.91%～1.93%，均在允許范圍之內(nèi)，驗(yàn)證通過。

表2 正確度實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

2.2精密度驗(yàn)證結(jié)果 由表3、4顯示可見，質(zhì)控品和血清樣本的實(shí)測批內(nèi)CV%均<6%，批間CV%均<7%，均在廠家說明書給定的允許范圍內(nèi)，驗(yàn)證通過。

表3 2個(gè)質(zhì)控水平批內(nèi)和批間精密度

續(xù)表3 2個(gè)質(zhì)控水平批內(nèi)和批間精密度

表4 3個(gè)血清水平批內(nèi)和批間精密度

2.3線性范圍驗(yàn)證結(jié)果 由表5可知，性激素6項(xiàng)和HCG-β測量范圍與廠家提供的測量范圍相近，說明廠家提供的線性范圍為實(shí)驗(yàn)室的可報(bào)告范圍是可靠的。

表5 線性范圍和臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果

2.4臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果 廠商認(rèn)為FSH、LH、Test的檢測范圍較寬未給稀釋倍數(shù)建議，本科室還是參考其他幾個(gè)激素項(xiàng)目用此品牌稀釋液進(jìn)行1∶10的手工稀釋，其余項(xiàng)目均用說明書推薦稀釋液和稀釋倍數(shù)直接上機(jī)稀釋檢測，由表5可以看出所有項(xiàng)目稀釋后偏差均≤1/2 TEa，驗(yàn)證通過。

2.5參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果 由表6可見在20～50歲的女性和男性中，性激素6項(xiàng)和HCG-β的符合率均為100%，驗(yàn)證通過。

表6 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

續(xù)表6 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

2.6方法學(xué)對比驗(yàn)證結(jié)果 某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析A型和E601電化學(xué)發(fā)光分析B型兩個(gè)系統(tǒng)對比試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果可見其每項(xiàng)激素對比驗(yàn)證結(jié)果的r2均大于0.99，可見其系統(tǒng)差異性小，故改變測試系統(tǒng)后對臨床結(jié)果影響小。

2.7攜帶污染驗(yàn)證結(jié)果 通過測定可知HCG-β的H1、H2、H3測定值分別為8 141.00、8 188.00、8 158.00 mIU/mL有；L1、L2、L3測定值分別為5.56、5.65、5.56 mIU/mL。攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%，計(jì)算得為0%，驗(yàn)證通過。

3 討 論

對某品牌E601電化學(xué)發(fā)光分析B型和E602電化學(xué)發(fā)光分析C型進(jìn)行性能評(píng)價(jià)已有相關(guān)報(bào)道[12-13]，而作為某品牌公司2019年生產(chǎn)的新一代E801電化學(xué)發(fā)光分析儀 A型，未見有研究對其進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。作為新一代檢測系統(tǒng)應(yīng)對其進(jìn)行主要性能評(píng)價(jià)，是檢驗(yàn)質(zhì)量的重要保證，其分析性能滿足臨床要求是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的根本保證[14]。檢驗(yàn)人員也應(yīng)對所使用儀器的性能全面了解，才能更好地完成臨床檢驗(yàn)工作。本科室通過對即將在此檢測系統(tǒng)上進(jìn)行測試的性激素6項(xiàng)及HCG-β做了正確度、精密度、線性范圍、臨床可報(bào)告范圍、參考范圍、方法學(xué)對比性能指標(biāo)驗(yàn)證。同時(shí)還對HCG-β做了攜帶污染驗(yàn)證。

為了更好的驗(yàn)證其系統(tǒng)的精密度本科用了兩種方案驗(yàn)證其批內(nèi)、批間重復(fù)性，分別收集了每個(gè)項(xiàng)目高、中、低3個(gè)水平濃度的血清樣本進(jìn)行批內(nèi)和批間精密度驗(yàn)證，驗(yàn)證CV%均不超過臨床要求的1/4TEa和1/3TEa。對于正確度的驗(yàn)證，選取參加原衛(wèi)生部臨床檢測中心的室間質(zhì)評(píng)來進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示偏倚范圍為-1.91%～1.93%，測定結(jié)果均在允許范圍內(nèi)，說明此品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析儀A型檢測性激素6項(xiàng)和HCG-β的正確度高，結(jié)果可靠。

線性范圍指測定值與稀釋倍數(shù)呈線性關(guān)系的范圍，以保證樣本的檢測結(jié)果在線性范圍內(nèi)準(zhǔn)確可靠。EP6-A采用多項(xiàng)式回歸分析，是目前公認(rèn)的分析測量范圍評(píng)價(jià)中最好的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。驗(yàn)證結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)室測定的線性范圍與廠家提供的線性范圍相近，且都在廠家提供的范圍內(nèi)，各檢測項(xiàng)目的a值和r2均符合要求，說明實(shí)測值與理論值具有良好的相關(guān)性，結(jié)果符合要求。

參考區(qū)間指某項(xiàng)檢查結(jié)果在健康人群中的分布范圍，是解釋檢驗(yàn)結(jié)果分析檢驗(yàn)信息的一個(gè)基本尺度和依據(jù)[15]。幾乎所有的試劑說明書都會(huì)建議各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)為其相應(yīng)患者人群建立參考區(qū)間，而實(shí)際情況是實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證廠家提供的參考區(qū)間居多。本研究驗(yàn)證結(jié)果顯示7種激素r2均在0.99以上，在推薦的參考區(qū)間內(nèi)，符合要求，可直接引用廠家提供的參考區(qū)間。通過對某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析A型和E601電化學(xué)發(fā)光分析B型的試劑說明書進(jìn)行對比，也看出廠商所提供的參考范圍沒有變化，通過比對兩個(gè)系統(tǒng)做方法學(xué)對比試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果可見其每項(xiàng)激素對比驗(yàn)證結(jié)果的r2均大于0.99，可見其系統(tǒng)差異性小，故改變測試系統(tǒng)后對臨床結(jié)果影響小。

攜帶污染是評(píng)價(jià)檢測結(jié)果可能受到該標(biāo)本之前或之后標(biāo)本的攜帶污染影響。由于某品牌E801電化學(xué)發(fā)光分析A型在加入樣本和試劑前，會(huì)自動(dòng)沖洗加樣針，且在測試過程使用了一次性的吸頭和反應(yīng)杯，極大降低了發(fā)生攜帶污染的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證結(jié)果表明，攜帶污染率極低，檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

綜上所述，此品牌E801電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀A型檢性激素6項(xiàng)和HCG-β的正確度、精密度、線性范圍、臨床可報(bào)告范圍、參考范圍、方法學(xué)對比及攜帶污染能指標(biāo)均驗(yàn)證合格，達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，可以用于臨床檢測。