葵肽清風對高尿酸血癥動物模型的降尿酸作用

邊學峰，劉 玲，蘭 夢，吳 楠*，張 輝*

（1.長春中醫藥大學，長春 130117；2.吉林省東北亞生物科技有限公司，長春 130117）

高尿酸血癥的特征是血液中尿酸水平異常升高，一般來說，女性的正常范圍上限為360 mol/L（6 mg/dL），男性為416 mol/L（7.0 mg/dL）[1]。高尿酸血癥已成為威脅人類健康的代謝性疾病[2-3]，可能與代謝綜合征、中風發病率、慢性腎臟疾病和心血管疾病有關，被認為是引發痛風的重要因素之一。目前使用的抗高尿酸血癥的藥物主要包括：秋水仙堿、苯溴馬隆、別嘌呤醇、黃嘌呤氧化酶（XOD）抑制劑等[4]。但具有不良反應，如秋水仙堿可導致腹瀉、嘔吐，別嘌呤醇可導致胃腸刺激，骨髓抑制，過敏綜合征，肝炎和惡化的腎功能[5]。尿酸氧化酶僅用于治療高尿酸血癥，未被廣泛應用[6]。抗高尿酸血癥藥物由于其嚴重的不良反應而限制了其臨床應用[7]。因此，尋找具有更安全的毒理學特征的替代抗高尿酸血癥藥物，特別是從傳統中醫藥尋找開發新型抗高尿酸血癥藥物具有重要的意義。葵肽清風是由葵花盤、薏苡仁、白茅根、淡竹葉、杜仲雄花、山楂為主要原料制成的代茶飲，具有增強免疫力、提高腎功能尿酸代謝的能力。

1 實驗材料

8 周齡雄性Wistar 大鼠，體質量（180±10）g，實驗動物生產許可號：SCXK（吉）20180007，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。葵肽清風（吉林敖東健康科技有限公司），秋水仙堿片（云南望子隆藥業有限公司），苯溴馬隆膠囊（德國赫曼大藥廠），尿酸鈉晶體（sigma），腺嘌呤（浙江天瑞藥業有限公司），高酵母飼料（長春市億斯實驗動物技術有限責任公司），尿酸檢測試劑盒（磷鎢酸法）、黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒（比色法）（南京程健生物技術公司）。所有檢測都是根據制造商的說明進行的。葵肽清風是一種由6 種成分組成的中藥混合物：葵花盤提取物、薏苡仁粉、白茅根粉、淡竹葉粉、杜仲雄花粉、山楂粉。每日最大食用量不超過30 g（每袋5 g）。在大鼠中，等效劑量分別約為人類劑量的6 倍[8]。根據對藥物安全性的臨床觀察，我們分別選擇了人體劑量的3倍、6 倍和9 倍作為低劑量、中劑量和高劑量。在本研究中，三劑葵肽清風以1.5、3、4.5 g 懸浮在蒸餾水中并通過灌胃法給藥7 d。秋水仙堿和苯溴馬隆用作陽性對照，并在蒸餾水中相似地制備。

2 實驗方法

2.1 動物模型的建立 通過注射尿酸鈉晶體（MSU）建立大鼠急性痛風性關節炎模型。于之前的研究類似，采用尿酸鈉晶體誘導的痛風性關節炎大鼠評估葵肽清風對痛風性關節炎的作用。第1～14 天給予高酵母飼料飼養，并給予腺嘌呤100 mg/（kg·d）灌胃，第15～21 天停止高酵母飼養及腺嘌呤灌胃，第18 天于造模組關節腔內注射尿酸鈉晶體溶液[9]，選擇右踝關節外側后方作為穿刺點，針口斜面與脛骨成45°角向上前方穿入踝關節腔內[10]，以關節囊對側鼓起為注入標準，制備急性痛風性關節炎，繼續藥物干預72 h（3 d）后，于第21 天大鼠眼眶靜脈叢取血，留取標本。

2.2 動物分組 Wistar大鼠共77只，分7組，每組11只。分別為正常對照組、模型組、秋水仙堿（0.48 g/kg）陽性對照組、苯溴馬隆（50 g/kg）陽性對照組及葵花盤低（1.5 g/kg）、中（3 g/kg）、高（4.5 g/kg）劑量組。正常對照組和模型組給予生理鹽水10 mL/kg。藥物劑量按照《中藥藥理研究方法學》中實驗動物和人體劑量的換算方法換算[11]。

2.3 腫脹度測量 通過游標卡尺測量尿酸鈉晶體（MSU）注射后0、12、24、48 h 所有大鼠的右膝關節周長。腫脹度（%）=（Ct -C0）/C0。其中，Ct 表示不同時間的周長，C0 表示0 h 的周長。觀測大鼠血液和肝臟的尿酸（SUA）水平、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）水平。

2.4 樣品收集 最后一次給藥后1 h，各組大鼠眼眶靜脈叢取血，血漿靜置30 min 后，以3 000 r/min 的速度離心，取上清。置于-80 ℃保存[12]。

2.5 數據處理及統計 采用SPSS 19.0 處理數據，用.E.M.表示結果，利用雙t-t 實驗檢驗顯著性[13]。

3 結果

3.1 葵肽清風對大鼠肝臟中尿酸濃度的影響 按照尿酸試劑盒的檢測方法，對大鼠肝臟尿酸（SUA）含量進行測定。如圖1 所示，與空白組相比，模型組肝臟尿酸含量顯著上升（P＜0.05），這表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能夠使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血癥模型[14]。結果顯示，與模型組相比，秋水仙堿（COL）組和苯溴馬隆（Ben）組與葵肽清風（KTQF）各組均能夠不同程度地使血尿酸含量下降。秋水仙堿組和苯溴馬隆組與模型組比較差異具有統計學意義（P＜0.05），結果證明葵肽清風有降低肝臟尿酸含量的效果能夠治療高尿酸血癥；并且在葵肽清風各組中，葵肽清風高劑量（KTQFG）組對于降低肝臟尿酸水平最有效[15]。

圖1 葵肽清風對大鼠肝臟中尿酸含量的影響

3.2 葵肽清風對大鼠血清中尿酸濃度的影響 按照尿酸試劑盒的檢測方法，對大鼠血尿酸（SUA）含量進行測定。如圖2 所示，與空白組相比，模型組血清尿酸含量顯著上升（P＜0.05），這表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能夠使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血癥模型。結果顯示，與模型組相比，秋水仙堿和苯溴馬隆組與葵肽清風各組均能夠不同程度地使血尿酸含量下降[16]。秋水仙堿組和苯溴馬隆組與模型組相比差異具有統計學意義（P＜0.05）。結果證明葵肽清風有降低血尿酸含量的效果能夠治療高尿酸血癥；并且在葵肽清風各組中，葵肽清風高劑量組對于降低血尿酸最有效[17]。

圖2 葵肽清風對大鼠血尿酸含量的影響

3.3 葵肽清風對大鼠肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）活性的影響 根據血尿酸含量測定結果，分別對空白組、模型組、秋水仙堿、苯溴馬隆組以及葵肽清風組的肝臟組織進行測定。取大鼠肝臟，制備成勻漿[18]。按照肝臟黃嘌呤氧化酶試劑盒的測定方法進行操作。如圖3 所示，與空白組相比，模型組大鼠肝臟勻漿中黃嘌呤氧化酶活性顯著上升（P＜0.05）；與模型組相比，秋水仙堿組、苯溴馬隆組使得黃嘌呤氧化酶活性顯著下降（P＜0.05），葵肽清風高劑量組、葵肽清風中劑量組（KTQFZ）、葵肽清風低劑量組（KTQFD）使得肝臟黃嘌呤氧化酶活性顯著下降（P＜0.01）。結果表明，葵肽清風組對于大鼠肝臟中肝臟黃嘌呤氧化酶活性有顯著抑制作用。

圖3 葵肽清風對大鼠肝臟中黃嘌呤氧化酶活性的影響

3.4 葵肽清風對大鼠關節腫脹度的影響 如圖4 所示，在注射尿酸鈉晶體（MSU）的12、24、48 h 后，與空白對照組相比，模型組大鼠右膝關節腫脹度均顯著增加（P＜0.05），由此可見，注射尿酸鈉結晶能成功建立急性痛風性關節炎大鼠模型，且所建立的動物模型相對穩定[19]。秋水仙堿組在0.48 mg/kg 劑量時，未能調節由尿酸鈉晶體（MSU）引起的腫脹（P＞0.05）。注射尿酸鈉晶體12 h 后，葵肽清風高劑量組、葵肽清風中劑量組、葵肽清風低劑量組顯著抑制了右膝的腫脹（P＜0.05）；而在48 h，葵肽清風高劑量組顯著抑制腫脹（P＜0.01）。各組中，葵肽清風高劑量組在尿酸鈉晶體注射誘導的急性痛風性關節炎大鼠中，顯示出對右膝腫脹的最佳抑制作用。

圖4 葵肽清風對大鼠關節腫脹度的影響

4 討論

痛風是一種以體內尿酸過量為基礎的臨床和病理特征表現的疾病，部分表現為高尿酸血癥，其定義為血清尿酸水平大于6.8 或7.0 mg/dL。關節及其他部位細胞外液中尿酸鈉結晶的沉積，介導痛風的大部分臨床和病理特征[20]。

在治療方面，現代醫學主要以非甾體抗炎藥、糖皮質激素、抑制尿酸生成藥、促進尿酸排泄藥等為主要治療手段，其或多或少存在毒副作用[21]。本實驗研究發現[22]，葵肽清風干預高尿酸血癥模型大鼠及急性痛風性關節炎模型大鼠過程中，血尿酸水平較模型組明顯下降[23]，同時中藥干預各組大鼠的患病關節腫脹程度較模型組輕微，表現為中藥組患病關節直徑增大的幅度小，且恢復時間快，表明葵肽清風可控制血尿酸水平、痛風局部癥狀[24]。進一步統計學分析數據發現，在高、中、低3 個濃度梯度上，高濃度組葵肽清風無論是對于大鼠病足關節腫脹程度的改善，還是對于血尿酸水平的降低，均優于其余2 個濃度梯度[25]。

綜上所述，葵肽清風能顯著改善痛風癥狀，改善關節腫脹程度，降低血尿酸水平[26]。