畢節市HPV E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變中的臨床分流應用

毛艷豐

[摘要]目的分析畢節市人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變中的臨床應用效果，為宮頸病變患者臨床分流及診斷提供參考依據。方法選取畢節市中醫院2016年1月至2021年6月收治的200例宮頸病變患者作為研究對象，所有患者均接受HPV E6/E7 mRNA檢測和薄層液基細胞學檢測（TCT），以組織病理檢測結果作為金標準，比較不同宮頸病變患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量，并比較HPV E6/E7 mRNA、TCT在宮頸病變中的診斷效能。結果宮頸癌、CIN III級患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量均明顯高于CIN II級和CIN I級，CIN II級明顯高于CIN I級，宮頸癌HPV E6/E7 mRNA相對表達量明顯高于CIN III級（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA檢查共檢出陽性113例，其中誤診34例，漏診15例。TCT檢查共檢出陽性66例，其中誤診20例，漏診48例。HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，而特異度明顯低于TCT檢查（P<0.05）。結論HPV E6/E7 mRNA檢測對畢節市宮頸病變患者篩查分流、輔助診斷具有重要臨床指導價值。

[關鍵詞]人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA;液基薄層細胞檢測;宮頸病變;宮頸上皮內瘤變;宮頸癌

[中圖分類號]R737.33??? [文獻標識碼]A??? [文章編號]2095-0616（2022）02-0159-04

The application of HPV E6/E7 mRNA test in clinical triage of cervical lesions in Bijie

MAO Yanfeng

Department of Pathology，Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine in Guizhou Province，Guizhou，Bijie 551700，China

[Abstract]Objective To analyze the clinical application effect of human papillomavirus （HPV）E6/E7 mRNA test in cervical lesions in Bijie，so as to provide a reference basis for clinical triage and diagnosis of patients with cervical lesions. Methods A total of 200 patients with cervical lesions admitted to Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2016 to June 2021 were selected as study subjects，and all patients underwent HPV E6/E7 mRNA test and thin-prep cytology test （TCT）.Taking the histopathological test results as the gold standard，the HPV E6/E7 mRNA positivity rate and relative expression in patients with different cervical lesions were compared，and the diagnostic efficacy of HPV E6/E7 mRNA and TCT in cervical lesions was compared. Results The positivity rate and relative expression of HPV E6/E7 mRNA expression in patients with cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia （CIN）grade III were significantly higher than those in patients with CIN grade II and CIN grade I，CIN II was significantly higher than that in CIN I. The relative expression of HPV E6/E7 mRNA in patients with cervical cancer was significantly higher than that in patients with CIN grade III（P<0.05）. 113 positive cases were detected by HPV E6/E7 mRNA test，in which 34 cases were misdiagnosed and 15 cases were miss-diagnosed.66 positive cases were detected by TCT test，in which 20 cases were misdiagnosed and 48 cases were miss-diagnosed. The sensitivity of HPV E6/E7 mRNA test was significantly higher than that of TCT test，while the specificity was significantly lower than that of TCT test （P<0.05）. Conclusion HPV E6/E7 mRNA test is of great significance in clinically guiding the screening and triage and auxiliary diagnosis of patients with cervical lesions in Bijie.

[Key words]Human papillomavirus E6/E7 mRNA;Thin-prep cytology test;Cervical lesions;Cervical intraepithelial neoplasia;Cervical cancer

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，研究指出，宮頸癌發生前存在一個長期癌前病變期，一般由宮頸上皮內瘤變（CIN I級）發展至宮頸癌需要至少10年甚至更長時間[1-2]。因此，對于宮頸癌患者而言，及早發現癌前病變并及時給予規范干預，可降低宮頸癌發生風險。研究證實，人乳頭瘤病毒（HPV）感染與宮頸癌的發生密切相關，HPV感染細胞之后，E6、E7等病毒致癌基因將產生E6、E7癌蛋白，E6、E7癌蛋白可與機體的抑癌蛋白等細胞周期調節蛋白相結合，造成細胞周期控制出現異常，進而引起癌變[3-4]。基于此，本研究重點探討HPV E6/E7與宮頸病變的關系，以此完善畢節市（本市）臨床宮頸病變資料，為明確本市宮頸病變診斷臨床治療及預防提供重要科學依據。現報道如下。

1??? 資料與方法

1.1??? 一般資料

選取畢節市中醫院2016年1月至2021年6月收治的200例宮頸病變患者作為研究對象，納入標準：①年齡18歲以上;②人組前1周內未進行陰道用藥;③臨床資料齊全;④既往均無宮頸上皮內瘤變史或宮頸癌史;⑤語言溝通能力、理解能力以及認知功能均正常。排除標準：①處于妊娠期;②人組前已經明確診斷;③正在參與臨床其他研究;④存在其他部位惡性腫瘤。200例患者，年齡24～67歲，平均（47.21±4.93）歲;病程1～4個月，平均（2.38±0.29）個月;病情分布：CIN I級106例，CIN II級35例，CIN III級31例，宮頸癌28例。

1.2??? 方法

1.2.1??? 薄層液基細胞學檢測（TCT）??? 采集患者宮頸分泌物，通過膜式液基超薄細胞學以及離心沉淀技術，對收集的脫落細胞進行固定及染色，參照國際癌癥協會推薦的分類標準[5]，由3位細胞學醫師獨立進行判讀，結果分為鱗癌、高度鱗狀上皮病變、低度鱗狀上皮內病變、不能排除高級別非典型鱗狀細胞上皮內病變、無明確診斷意義非典型鱗狀細胞以及未見上皮內病變，其中鱗癌、高度鱗狀上皮病變、低度鱗狀上皮內病變、不能排除高級別非典型鱗狀細胞上皮內病變、不典型鱗狀上皮細胞為陽性，余為陰性。

1.2.2??? 宮頸組織病理學檢測??? 根據陰道鏡的檢查結果，選取患者宮頸病變的較重部位取活檢，參照《病理學》中的標準[6]，由3名主治醫師及以上職稱的病理醫師進行雙盲法會診分級，包括正常及炎癥、CIN I級、CIN II級、CIN III級、宮頸癌，其中CIN I級、CIN II級、CIN III級、宮頸癌為陽性，正常及炎癥為陰性。

1.2.3??? HPV E6/E7 mRNA檢測??? 標本來自TCT后剩余宮頸脫落細胞，通過b-DNA技術檢測HPV E6/E7 mRNA的表達水平，試劑盒購自鄭州科蒂亞生物技術有限公司（批號：2107A2），嚴格按照試劑盒說明書進行操作;通過Quanti-Virus Tm冷光儀[河南科蒂亞（新鄉）生物技術有限公司]讀取數值，通過軟件轉換為基因拷貝數，HPV E6/E7 mRNA相對發光強度比≥1為陽性。

1.3??? 觀察指標

①觀察不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量;②觀察HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度、特異度以及準確度;③觀察TCT檢查的敏感度、特異度以及準確度;④比較HPV E6/E7 mRNA檢查和TCT檢查的敏感度、特異度以及準確度，按四格表法進行計算，敏感度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%，特異度=真陰性例數/（真陰性例數+ 假陽性例數）×100%，準確度=（真陽性例數+ 真陰性例數）/總例數×100%。

1.4??? 統計學處理

2??? 結果

2.1??? 不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量觀察

宮頸癌、CIN III級患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量均明顯高于CIN II級和CIN I級，CIN II級明顯高于CIN I級，宮頸癌HPV E6/E7 mRNA相對表達量明顯高于CIN III級，差異有統計學意義（P<0.05）;宮頸癌與CIN III級HPV E6/E7 mRNA表達陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2??? HPV E6/E7 mRNA檢查結果與病理結果對照

HPV E6/E7 mRNA檢查共檢出陽性113例，其中誤診34例，漏診15例。見表2。

2.3??? TCT檢查結果與病理結果對照

TCT檢查共檢出陽性66例，其中誤診20例，漏診48例。見表3。

2.4??? HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的敏感度、特異度以及準確度比較

HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，而特異度明顯低于TCT檢查，差異有統計學意義（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的準確度比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表4。

3??? 討論

宮頸癌是女性發病率及病死率均較高的一種惡性腫瘤，近年來其發病呈年輕化趨勢。宮頸癌發生和發展是漸進演變的過程，包括數個階段，分別為增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤以及浸潤癌宮頸癌病變早期并無典型癥狀，部分患者可出現白帶增多等一般炎癥性表現，因而單獨通過臨床表現難以確診[7]。不過由癌前病變發展至宮頸癌，往往需要較長時間，及早發現及早干預可阻斷宮頸癌發展進程。

盡管TCT廣泛應用于臨床婦科宮頸篩查，但由于操作和個人讀片等主觀因素，很容易導致假陰性或假陽性結果，尤其是在意義不明或更嚴重的非典型鱗狀上皮細胞病例中，極易出現漏誤診[8]。研究指出，雖然TCT對宮頸疾病的診斷具有較高的特異度，但其敏感度較差[9]。因此，還需要敏感度更高的篩查方式，進一步提高惡性病變的篩查效果。CIN是一種由持續的高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染引起的癌前宮頸疾病，大量醫學實驗及理論文獻證實，HPV基因E6/E7是導致女性宮頸癌的重要因素，高危亞型HPV感染宮頸上皮細胞，產生E6和E7兩種癌蛋白，E6和E7蛋白最初通過其在宿主細胞中靶向p53和視網膜母細胞瘤蛋白（pRb）腫瘤抑制通路的能力而被鑒定，從而干擾細胞周期調節[10-12]o E7通過其結合和滅活細胞pRb的能力刺激細胞周期，而E6通過蛋白酶體途徑與p53結合，導致p53降解，造成細胞周期控制失常。因此，HPV感染是宮頸癌發生的重要危險因素。

受地區、經濟、社會發展等多種因素的綜合影響，宮頸癌的發生率和病死率在不同地區存在著明顯的差異。本研究基于本市女性宮頸病變地方特點，重點研究探討HPV E6/E7與宮頸病變的關系，更好地幫助本市臨床診斷治療宮頸病變。本研究中，不同病情宮頸病變患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量存在顯著差異，隨著病理分級逐漸增加，患者HPV E6/E7 mRNA表達陽性率及相對表達量均明顯升高，這與臨床相關研究結果相近[13]，說明宮頸癌前病變與HPV E6/E7 mRNA轉錄水平有關，即HPV E6/E7 mRNA的轉錄與病變進展程度密切相關。E6和E7是所有HPV中最重要的癌基因，E6和E7蛋白可以通過降解眾所周知的腫瘤抑制因子p53和pRb，延長感染細胞的壽命并誘發癌癥。

本研究中，通過對HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的敏感度、特異度以及準確度分析發現，HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，但是特異度明顯低于TCT檢查。這與臨床相關研究類似，如許生花等[14]的HPV E6/E7 mRNA檢查結果與病理結果相近，且診斷宮頸癌的敏感度為92.3%，明顯高于TCT檢查的43.6%，但特異度為70.0%，明顯低于TCT檢查的90.0%。提示TCT檢查易出現漏診，主要原因為TCT為細胞形態學檢測模式，當發現細胞形態出現異常改變時，宮頸病變往往進展為中晚期[15-16]。HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度較高，可減少漏診的發生。不過也存在一定誤診的情況，因而可聯合其他檢查方式，降低漏、誤診率，以有助于患者進一步治療。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA檢測對畢節市宮頸病變患者篩查分流、輔助診斷具有重要臨床指導價值。

[參考文獻]

[1]祁美霞，靳榮，盧慧，等.宮頸癌合并HPV感染患者HPV不同亞型分布及脆性組氨酸三聯體蛋白表達[J]. 中華醫院感染學雜志，2020，30（5）：734-737.

[2]方莉，韓瑜，許媛，等.高危型HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌的相關性研究[J].中國實驗診斷學，2019，23（4）：602-605.

[3] Hu Z，Ma D.The precision prevention and therapy of HPV- related cervical cancer：new concepts and clinical implications[J]. Cancer Med，2018，7（10）：5217-5236.

[4]郭慧敏，朱鐳，高景波，等.流式細胞術檢測人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA對宮頸病變的診斷價值[J].中國綜合臨床，2019，35（6）：490-494.

[5] Solomon D，Davey D，Kurman R，et al.The 2001 Bethesda System：terminology for reporting results of cervical cytology[J].JAMA，2002 ，287（16）：2114-2119.

[6] Rosai&Ackerman.外科病理學[M].10版.北京：北京大學醫學出版社，2014：1442-1449.

[7]袁贊，康琳棣，侯英.宮頸上皮內瘤變3級患者行宮頸錐切術后病理升級為宮頸浸潤癌的危險因素分析[J]. 癌癥進展，2019，17（20）：2455-2458.

[8]李常虹，張林靜，聶明朝，等.早期宮頸上皮內瘤變患者HPV、TCT檢查的臨床價值分析[J].中國性科學，2019，28（5）：56-59.

[9]趙健，郭雯雯，杜億杉，等.宮頸脫落細胞學檢查高級別異常在陰道鏡擬診中的價值研究[J].中國實用婦科與產科雜志，2020，36（9）：63-67.

[10]李秀娟，鄭雪絨，趙欣媛，等.PATZ1通過激活p53 依賴，性途徑抑制宮頸癌細胞增殖和遷移的機制研究[J]. 山西醫科大學學報，2020，51（6）：499-505.

[11] Wong JPH，Vahabi M，Miholjcic J，et al.Knowledge of HPV/cervical cancer and acceptability of HPV selfsampling among women living with HIV：A scoping review[J].Curr Oncol，2018，25（1）：e73-e82.

[12]王芳，李衛民，劉艷麗，等.高危型HPV亞型及病毒載量檢測對宮頸癌篩查的價值探究[J].實用癌癥雜志，2020，35（4）：647-650.

[13]秦艷，朱怡.HPVE6/E7mRNA聯合TCT檢測在宮頸癌篩查的臨床應用價值[J].中國婦幼健康研究，2020，31（5）：665-670.

[14]許生花，李明，史美云.HPV E6/E7mRNA聯合TCT 在老年婦女宮頸疾病診斷中的臨床應用價值[J].實用老年醫學，2020，34（2）：130-132，148.

[15]孫斯媛，羅飛，胡義忠，等.HPV、TCT及活檢在宮頸病變篩查中的應用研究[J].河北醫藥，2019，41（11）：1645-1649.

[16] Khan MJ，Castle PE，Lorincz AT.The elevated 10- year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus （HPV）type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice[J].J Natl Cancer Inst，2005，97：1072-1079.