穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌梗死大鼠縫隙連接蛋白43和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路基因表達(dá)的影響△

呂夢(mèng)，紀(jì)曉迪，劉珂珂，婁利霞，聶波，趙久麗，吳愛明

北京中醫(yī)藥大學(xué) 東直門醫(yī)院/中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教育部和北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100700

流行病學(xué)報(bào)告顯示，中國心血管病的患病率處于持續(xù)上升階段，心血管病死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡原因的首位[1]。冠心病在心血管疾病的臨床死亡原因中居首位，心肌梗死是冠心病中一種嚴(yán)重疾病類型，而由心肌梗死繼發(fā)的快速型室性心律失常可導(dǎo)致心源性猝死的發(fā)生[2]。縫隙連接是心肌細(xì)胞間進(jìn)行電、化學(xué)偶聯(lián)的跨膜通道，維持心肌細(xì)胞間正常的電傳導(dǎo)及節(jié)律性收縮等功能，心梗后縫隙連接蛋白的異常導(dǎo)致心臟電傳導(dǎo)障礙，最終導(dǎo)致心律失常[3]。心肌缺血缺氧壞死，可刺激內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生[4]，活化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上感應(yīng)分子肌醇需求激酶1（IRE1）和活化轉(zhuǎn)錄因子6（ATF6），進(jìn)而啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)，而X盒結(jié)合蛋白-1（XBP-1）轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)由ATF6 及IRE1 兩條途徑活化，通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶基因蛋白如葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）表達(dá)，加強(qiáng)未折疊蛋白質(zhì)的折疊及降解[5-6]，有研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的降解途徑相關(guān)[7]，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度應(yīng)激可能影響縫隙連接蛋白的代謝穩(wěn)態(tài)。

穩(wěn)心顆粒由黨參、黃精、三七、琥珀、甘松5味藥組成。《中成藥治療優(yōu)勢(shì)病種臨床應(yīng)用指南》中已明確指出，穩(wěn)心顆粒用藥4 周可改善心悸、胸悶等臨床癥狀[8]，前期研究表明穩(wěn)心顆粒可通過調(diào)控過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善心肌梗死大鼠心臟病理狀態(tài)[9]，且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑對(duì)心肌細(xì)胞縫隙連接蛋白43（CX43）表達(dá)的影響已在心肌細(xì)胞H9c2 實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證[10]，而本研究通過進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從基因的角度明確穩(wěn)心顆粒改善心律失常的內(nèi)在機(jī)制。通過建立心肌梗死大鼠模型，探索心肌梗死后心律失常的病理狀態(tài)下，穩(wěn)心顆粒對(duì)縫隙連接蛋白及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的影響。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性SD 大鼠40 只，體質(zhì)量（200±20）g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司[許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006]。通過東直門醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批后（審批號(hào)：17-12-01），飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室屏障環(huán)境動(dòng)物室。

1.2 試藥

酒石酸美托洛爾片（25 mg/片，阿斯利康制藥有限公司，批號(hào)：2006A49）；穩(wěn)心顆粒（5 g/袋，山東步長(zhǎng)制藥有限公司，批號(hào)：1909042）；鹽酸異丙腎上腺素（isoprenaline hydrochloride，ISO）注射液（2 mL，西南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：200901）；Trizol 試劑盒（Thermo Fisher Scientific，批號(hào)：50175111）；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）擴(kuò)增試劑盒（美國ABI公司，批號(hào)：2012607）；CX43 抗體（艾博抗貿(mào)易有限公司，批號(hào)：GR3271571-13）；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（Proteintech 中國公司，批號(hào)：10015666）；4%組織細(xì)胞固定液（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：20190718）；蘇木素-伊紅（HE）染色液（批號(hào)：P20200318）、快速M(fèi)asson 染液試劑盒（批號(hào)：20190706）均購于南京建成科技有限公司；二甲苯（批號(hào)：20210115）、無水乙醇（批號(hào)：20200118）均購于天津大茂化學(xué)試劑廠；戊巴比妥鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：WS20060401）。

1.3 儀器

BL-420S 型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；RM2235 型石蠟切片機(jī)、HII220 型石蠟烤片機(jī)（德國徠卡公司）；ALC-V8S 型小動(dòng)物呼吸機(jī)（上海奧爾科特生物科技有限公司）；FX-7202 型多道自動(dòng)分析心電圖機(jī)（北京福田電子醫(yī)療儀器有限公司）；Mx3000P 型Real-time PCR 儀（美國安捷倫Stratagene 公司）；5424R 型臺(tái)式低溫高速離心機(jī)（德國艾本德公司）；LF-2000 型電泳儀（北京龍方科技有限公司）。

2 方法

2.1 模型制備

采用心臟左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法制備心肌梗死大鼠模型[11]，結(jié)扎后可觀察到結(jié)扎線下左室前壁缺血變白，術(shù)后即刻心電圖檢測(cè)ST段顯著抬高。

2.2 分組及給藥

參考文獻(xiàn)[12]的心肌梗死大鼠入組標(biāo)準(zhǔn)，以心肌梗死術(shù)后24 h 前壁V3-V6、側(cè)壁Ⅰ、AVL 導(dǎo)聯(lián)，同時(shí)兼有前間壁V1 或V2 導(dǎo)聯(lián)檢測(cè)到病理性Q 波為造模成功標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)分為模型組，穩(wěn)心顆粒低、高劑量組，美托洛爾組，另設(shè)只穿線不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的假手術(shù)組作為對(duì)照，每組8 只。穩(wěn)心顆粒和美托洛爾的給藥劑量按照文獻(xiàn)[13]中等效劑量換算方法，穩(wěn)心顆粒低劑量組（1.35 g·kg-1）、美托洛爾組（2.25×10-3g·kg-1）采用等效劑量，穩(wěn)心顆粒高劑量組（2.70 g·kg-1）為低劑量組的2倍。假手術(shù)組及模型組均給予0.9%氯化鈉溶液。術(shù)后第2 天開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)治療2周后，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。

2.3 ISO誘導(dǎo)心律失常

連接BL-420S 型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，USB 連接電源，大鼠麻醉仰臥位固定，連接在體心電圖，啟動(dòng)BL-420軟件，選擇菜單“輸入信號(hào)/通路1/心電”后，出現(xiàn)心電圖波形，待波形穩(wěn)定后，按1.28 mg·kg-1腹腔注入ISO[14]，觀察并記錄5 min 內(nèi)各組出現(xiàn)心律失常的大鼠數(shù)量。

2.4 導(dǎo)管法血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)

灌胃給藥2 周后，腹腔麻醉大鼠，仰臥位固定，頸部正中備皮消毒，沿頸正中線切開，分離肌群，暴露右頸總動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，近心端打結(jié)后用動(dòng)脈夾夾住。在右頸總動(dòng)脈上作一1.5 mm 左右的切口，將導(dǎo)管用肝素鈉溶液沖灌后插入動(dòng)脈，向心臟方向推進(jìn)，直到進(jìn)入左心室。待信號(hào)穩(wěn)定5 min后檢測(cè)以下指標(biāo)：左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末壓（LVEDP）、左心室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax）、左心室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）[9]。

2.5 HE染色

藥物治療2 周后，1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠取心臟組織，放入4%組織細(xì)胞固定液中固定，經(jīng)過脫水、透明、石蠟包埋后制成石蠟切片。將制作好的石蠟組織切片置于烤片機(jī)上60 ℃烘烤1 h，先后放入3 個(gè)盛有新鮮二甲苯的缸中各15 min，依次放入盛有體積分?jǐn)?shù)為100%、95%、90%、80%、70%乙醇的缸中各2 min 脫蠟，自來水沖洗5 min，細(xì)胞核用蘇木素染色8 min，自來水沖洗5 min后，1%鹽酸乙醇（濃鹽酸1 mL+70%乙醇100 mL）分化40 s，自來水中沖洗返藍(lán)10 min，細(xì)胞質(zhì)用伊紅溶液染色8 min，自來水沖洗3 min 后，再依次放入盛有體積分?jǐn)?shù)為70%、80%、90%、95%、100%乙醇的缸中各1 min 脫水，之后分別放入3 個(gè)盛有新鮮二甲苯的缸中各10 min，中性樹膠于通風(fēng)櫥內(nèi)封片[15]。

2.6 Masson染色

石蠟切片制作及脫蠟過程同2.5 項(xiàng)下方法，染色前蒸餾水濕潤玻片，根據(jù)染色試劑盒說明書操作，使用試劑盒內(nèi)核染液染色60 s，沖洗液沖洗，漿染液染色50 s，沖洗液沖洗，分色液分色8 min 之后直接用復(fù)染液染色5 min，無水乙醇沖洗，吹干后封片。使用ImageJ v1.8.0 軟件分析膠原纖維容積分?jǐn)?shù)，按公式（1）計(jì)算。每組選取8 張切片，每張切片采集3個(gè)不重疊視野進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.7 qRT-PCR檢測(cè)

取大鼠心肌梗死邊緣區(qū)組織，Trizol法提取心肌組織總RNA[16]。測(cè)定260 nm 處和280 nm 處吸光度（A）的比值衡量蛋白質(zhì)污染程度，1.8＜A260/A280＜2.1為高質(zhì)量RNA，并按公式（2）計(jì)算各樣本RNA 終質(zhì)量濃度（ng·μL-1）。

式中n為稀釋倍數(shù)。配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，進(jìn)行qRT-PCR。擴(kuò)增條件為95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，循環(huán)40次[17]。以GAPDH 為內(nèi)參，CX43、GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量按照2-ΔΔCt法計(jì)算。引物序列見表1。

表1 引物序列

2.8 蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)

參考文獻(xiàn)[18]中的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，取各組大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織20 mg左右，RIPA裂解液冰上裂解組織20 min后，使用超聲儀勻漿，每次連續(xù)勻漿10 s，停止操作10 s，低溫操作重復(fù)5次。4 ℃離心10 min，轉(zhuǎn)速12 000 r·min-1，離心半徑為6 cm，離心后取上清液，將蛋白定量至質(zhì)量濃度為4 μg·μL-1。每組上樣10 μL進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，室溫封閉1 h后，加入稀釋后的一抗CX43（1∶8000）和GAPDH（1∶20 000），4 ℃孵育過夜，二抗室溫孵育1 h，Tris-HCl 緩沖鹽溶液（TBST）洗膜后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影，拍照并保存蛋白條帶。Image J v1.8.0 軟件分析蛋白條帶的灰度值，以GAPDH 為內(nèi)參照蛋白，按公式（3）計(jì)算CX43蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（）表示，符合正態(tài)分布的變量用單因素方差分析，方差齊時(shí)組間比較采用最小顯著性差異法（LSD），方差不齊時(shí)，組間比較采用新復(fù)極差法檢驗(yàn)（Dunnett′s T3），非正態(tài)則采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠心律失常發(fā)生率的影響

心肌梗死模型制備2 周后，模型組大鼠腹腔注射ISO后結(jié)果見圖1，假手術(shù)組大鼠心律失常率為0，模型組為87.5%，穩(wěn)心顆粒低劑量組為75%，穩(wěn)心顆粒高劑量組、美托洛爾組均為25%，5組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；組間兩兩比較可見，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心律失常發(fā)生率明顯上升（P＜0.01），最易誘發(fā)心律失常事件；與模型組相比，穩(wěn)心顆粒高劑量組、美托洛爾組大鼠心律失常發(fā)生率明顯下降（P＜0.05），結(jié)果見表2。

表2 注射ISO后各組大鼠心律失常發(fā)生率比較（n=8）

圖1 注射ISO后模型組大鼠心律失常誘發(fā)情況

3.2 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的影響

制備心肌梗死模型2 周后，模型組大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均顯著減少（P＜0.01），LVEDP顯著增高（P＜0.01）；與模型組相比，穩(wěn)心顆粒低劑量組指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，穩(wěn)心顆粒高劑量組及美托洛爾組LVSP 增加（P＜0.05），+dp/dtmax和-dp/dtmax的絕對(duì)值顯著增加（P＜0.01），LVEDP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的比較（,n=8）

表3 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的比較（,n=8）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；表5同。

3.3 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠心臟組織病理學(xué)的影響

假手術(shù)組大鼠可見心肌纖維排列致密整齊，胞核清晰，大小形態(tài)正常，細(xì)胞漿均勻紅染，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；模型組大鼠可見梗死邊緣區(qū)心肌纖維斷裂，心肌間隙增寬，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞質(zhì)染色深淺不一，細(xì)胞結(jié)構(gòu)混亂，大量炎性細(xì)胞浸潤，梗死邊緣區(qū)肉芽組織纖維化，向瘢痕組織轉(zhuǎn)變；各給藥組大鼠可見心肌纖維紊亂排列逐漸改善，炎性細(xì)胞少見，少量肉芽組織纖維化，結(jié)果見圖2。

圖2 各組大鼠心臟組織病理學(xué)變化（HE染色）

3.4 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠心肌膠原容積的影響

假手術(shù)組大鼠心肌間隙少量膠原，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌間隙內(nèi)大量膠原沉積，心肌纖維化明顯，心肌膠原容積分?jǐn)?shù)明顯增高（P＜0.01），與模型組相比，各給藥組大鼠膠原纖維沉積明顯降低（P＜0.01），結(jié)果見圖3、表4。

表4 各組大鼠心肌膠原容積比較（,n=8）

表4 各組大鼠心肌膠原容積比較（,n=8）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01。

圖3 各組大鼠膠原容積變化（Masson染色，40×）

3.5 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠CX43 和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響

心肌梗死2 周后，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織CX43 mRNA 相對(duì)表達(dá)量明顯減少（P＜0.01），IRE1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量增加（P＜0.05），GRP78、ATF6、XBP1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量明顯增加（P＜0.05，P＜0.01）；給藥治療后，與模型組相比，穩(wěn)心顆粒低劑量組XBP1、GRP78 mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組相比，穩(wěn)心顆粒高劑量組CX43 mRNA 表達(dá)量上調(diào)（P＜0.05），IRE1、ATF6、GRP78、XBP1 mRNA 表達(dá)量顯著減少（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組相比，美托洛爾組CX43 mRNA表達(dá)量上調(diào)（P＜0.05），IRE1、GRP78、XBP1 mRNA 表達(dá)量顯著減少（P＜0.05，P＜0.01），結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠心肌組織CX43和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)比較（,n=8）

表5 各組大鼠心肌組織CX43和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)比較（,n=8）

3.6 穩(wěn)心顆粒對(duì)各組大鼠CX43蛋白表達(dá)的影響

心肌梗死2 周后，CX43 蛋白條帶表達(dá)灰度見圖4。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠CX43 蛋白表達(dá)量明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，穩(wěn)心顆粒劑量組CX43 蛋白表達(dá)量升高（P＜0.05），美托洛爾組CX43蛋白表達(dá)量明顯升高（P＜0.01），結(jié)果見表6。

表6 各組大鼠CX43蛋白表達(dá)比較（,n=6）

表6 各組大鼠CX43蛋白表達(dá)比較（,n=6）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

圖4 各組大鼠CX43蛋白表達(dá)

4 討論

穩(wěn)心顆粒遵循古方炙甘草湯的立意組方，黨參為君，補(bǔ)中氣、養(yǎng)津血，改善冠狀動(dòng)脈供血，增加心排血量；黃精為臣，滋心陰、養(yǎng)心血，具有強(qiáng)心、調(diào)脂、增加冠狀動(dòng)脈血流的作用；三七化瘀活血定痛，并助黃精補(bǔ)養(yǎng)心血，增加冠脈血流，降低心肌耗氧量，調(diào)節(jié)心肌缺血缺氧狀態(tài)；琥珀活血化瘀、定悸安神，可抑制心臟異常起搏點(diǎn)消除折返；甘松芳香行氣、調(diào)暢氣血，抗心肌缺血、提高心肌耐缺氧能力，諸藥配伍，共奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、定悸復(fù)脈的功效[19]。臨床研究表明穩(wěn)心顆粒對(duì)于多種病因引起的心律失常有明顯的療效，可以快速緩解癥狀，改善患者的生活質(zhì)量[20]。穩(wěn)心顆粒的藥理機(jī)制值得深入研究。

心肌梗死后，心臟結(jié)構(gòu)和功能受損，心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)會(huì)發(fā)生改變，這與李影雄等[21]的研究一致，本研究結(jié)果顯示，心肌梗死大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)明顯障礙，心肌組織病理缺血損傷明顯，心肌組織纖維化程度加重，心肌順應(yīng)性降低，這些變化為心肌梗死后心律失常的發(fā)生提供了必要條件。因此，本研究中模型組大鼠的心律失常誘發(fā)率明顯增加。而穩(wěn)心顆粒治療后，大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)和組織病理損傷得到改善，心律失常誘發(fā)率降低。為探討穩(wěn)心顆粒上述心臟保護(hù)作用的藥理機(jī)制，本研究進(jìn)一步從基因水平觀察了縫隙連接蛋白和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路基因表達(dá)的變化。

研究結(jié)果顯示，心肌梗死模型大鼠心肌組織CX43 基因及蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.01）。在心臟中，縫隙連接介導(dǎo)了心肌細(xì)胞間的電耦聯(lián)，形成細(xì)胞間通路，使同步收縮的電刺激波有序傳導(dǎo)，是維持正常心律的基礎(chǔ)[22]。縫隙連接蛋白以六聚體形式組成半通道，相鄰心肌細(xì)胞的2 個(gè)半通道對(duì)接形成縫隙連接通道[23]。其中CX43 發(fā)揮重要作用[24]，CX43的異常會(huì)導(dǎo)致心臟電傳導(dǎo)障礙，最終導(dǎo)致心律失常的發(fā)生[3]。本研究中穩(wěn)心顆粒高劑量可明顯提高CX43 mRNA 及蛋白的表達(dá)水平，說明穩(wěn)心顆粒具有一定縫隙連接保護(hù)作用，這是其能夠降低心律失常發(fā)生率的重要機(jī)制之一。

CX43生命周期短暫、周轉(zhuǎn)率高，其合成與降解的動(dòng)態(tài)平衡需要嚴(yán)格控制[25]。生理狀態(tài)下，心肌縫隙連接蛋白的代謝過程有賴于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的生理功能，連接蛋白在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上合成[26]，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)多種伴侶蛋白輔助折疊，并經(jīng)過翻譯后修飾，寡聚成六聚體組裝子[27]；而如果新合成的連接蛋白不能正確折疊和寡聚化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白則會(huì)識(shí)別錯(cuò)誤折疊蛋白，進(jìn)而啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的蛋白質(zhì)降解機(jī)制，進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)量控制[28]。因此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂可能是導(dǎo)致CX43 異常的關(guān)鍵因素之一。本研究結(jié)果顯示，心肌梗死模型大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA 表達(dá)顯著上調(diào)，說明心肌梗死后心肌組織缺血缺氧，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)理化環(huán)境發(fā)生改變，其對(duì)蛋白的處理能力受損，誘發(fā)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[29]。最初內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是對(duì)抗損傷的代償機(jī)制，通過啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)，抑制蛋白質(zhì)合成，加強(qiáng)未折疊蛋白折疊及降解，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)負(fù)荷[28]。若存在持續(xù)而強(qiáng)烈的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，則導(dǎo)致未折疊蛋白反應(yīng)不能完全代償損傷，蛋白合成及降解障礙，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[30]，又成為了加重組織損傷的病理因素。本研究表明，模型大鼠心梗2 周后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處于過度應(yīng)激狀態(tài)，這是心臟CX43 受損的不容忽視的機(jī)制之一[31]。而穩(wěn)心顆粒可以不同程度地下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路基因的表達(dá)水平，說明其減輕了心肌梗死后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的過度應(yīng)激，是其發(fā)揮心臟保護(hù)作用的重要機(jī)制。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，心肌梗死病理狀態(tài)下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度應(yīng)激，CX43基因表達(dá)下調(diào)，是心肌梗死大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)障礙和心律失常易感性增加重要影響因素，而穩(wěn)心顆粒可調(diào)節(jié)CX43 和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路基因表達(dá)，是其保護(hù)心臟減少心律失常發(fā)生的分子機(jī)制。