基于血清藥物化學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的厚樸“下氣除滿”藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究△

荊文光，趙小亮，常潞，程顯隆，馬雙成*，魏鋒*

1.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050；2.中國中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗中心，北京 100700；3.中國藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198

厚樸Magnoliae Officinalis Cortex 為臨床常見理氣藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，來源于木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸M.offcinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，厚樸具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等作用；其中促進(jìn)胃腸動力與其傳統(tǒng)燥濕消痰、下氣除滿的功效相符合，臨床上用于慢性腹瀉、便秘、腸梗阻、急慢性胃炎、胃輕癱、胃十二指腸潰瘍等疾病[2]?，F(xiàn)代化學(xué)成分研究表明，厚樸酚、和厚樸酚是厚樸的主要藥效物質(zhì)[3-4]，具有抗氧化、神經(jīng)營養(yǎng)及保護(hù)、抗腫瘤等活性[5-9]。厚樸傳統(tǒng)入藥多為水煎劑，對其水溶性成分的研究陸續(xù)興起，諸多苯乙醇苷類、生物堿類化合物被發(fā)現(xiàn)[10-13]，這些成分是否也為藥效成分，或者是否與脂溶性的厚樸酚、和厚樸酚起到協(xié)同增效作用都值得深入研究。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是建立在疾病-基因-藥物的多層次網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)上，運(yùn)用系統(tǒng)生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)及網(wǎng)絡(luò)平衡的整體觀等理解藥物和機(jī)體相互作用，闡述疾病發(fā)展的過程，其多基因、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)與中醫(yī)藥系統(tǒng)觀、整體觀的治療理念相一致，在中藥研究中已得到廣泛應(yīng)用[14]。血清藥物化學(xué)研究認(rèn)為藥物口服吸收后只有移行入血的成分才可能是發(fā)揮藥效的成分，通過高分辨質(zhì)譜等技術(shù)對含藥血清中的原型成分及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，快速、準(zhǔn)確地闡明中藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，并采用生物活性高通量篩選、疾病動物模型、計算機(jī)輔助藥物設(shè)計和虛擬篩選等技術(shù)對移行成分進(jìn)行驗證[15-16]。多數(shù)文獻(xiàn)中網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究指標(biāo)均以各數(shù)據(jù)庫中收集的化學(xué)成分及其口服生物利用度為篩選條件，然而傳統(tǒng)中藥多為復(fù)方水煎劑，部分藥材中的化學(xué)成分未能轉(zhuǎn)移到湯劑中，或者在多種成分的協(xié)同作用下，部分化學(xué)成分的生物利用度發(fā)生改變，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測結(jié)果可能存在偏差。血清藥物化學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的緊密結(jié)合不僅可以通過分析藥物入血成分，尋找體內(nèi)直接作用物質(zhì)，同時利用入血成分構(gòu)建相關(guān)藥理網(wǎng)絡(luò)，更能直接反映其藥理作用機(jī)制。

胃輕癱綜合征（gastroparesis syndrome）是指以胃排空延緩為特征的臨床癥狀群，中醫(yī)辨證屬痞滿范疇，而厚樸具有“下氣除滿”的功效，故本研究選取胃輕癱作為候選疾病，篩選疾病靶點(diǎn)。通過液相色譜-質(zhì)譜法對厚樸水煎液和入血成分等進(jìn)行分析，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討入血成分發(fā)揮功效的作用機(jī)制，為進(jìn)一步闡明厚樸湯劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及深入研究厚樸的質(zhì)量標(biāo)志物提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Forma 88000型-86 ℃超低溫冰箱（美國Thermo Scientific 公司）；Rotanta 460R 型高速冷凍離心機(jī)（德國Hetich公司）；ABS2TM 型自動采血儀及ABS2軟件（美國Instech Laboratories 公司）；小動物自由活動裝置（醫(yī)學(xué)實(shí)驗中心自制）；CBAS-C30 型肝素化采血管（美國Solomon Scientific 公司）；1200-6320 Ion Trap XCT 型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）。

1.2 試藥

厚樸藥材采自湖北恩施市華中藥用植物園，經(jīng)中國食品藥品檢定研究院魏鋒研究員鑒定為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.的干燥干皮。

肝素鈉（批號：20120612）、水合氯醛（批號：20130201）均購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉注射液（批號：A17022005，河北天成藥業(yè)股份有限公司）；對照品紫丁香酚苷（批號：Y28M9H57297）、木蘭箭毒堿（批號：M29J8S40878）、咖啡酸（批號：W16O10B100366）、巴婆堿（批號：J21）、咖啡酸甲酯（批號：D30N10G104165）、木蘭花堿（批號：R21M9F61834）、番荔枝堿（批號：O24）、木蘭苷A（批號：X16S8L44141）、厚樸酚（批號：KS0912CB14）、和厚樸酚（批號：T28O6B5149）、β-桉葉醇（批號：P24O8F46474）均購自上海源葉生物科技有限公司，經(jīng)超高效液相色譜法（UPLC）峰面積歸一化法測定，純度均大于98.0%；對照品木蘭苷B、木蘭苷D、辣薄荷基厚樸酚為實(shí)驗室自制，經(jīng)UPLC 峰面積歸一化法測定，純度均大于98.0%。

1.3 實(shí)驗動物

雄性SD 大鼠12 只，SPF 級，7～8 周齡，購自北京維通利華實(shí)驗動物技術(shù)有限公司，實(shí)驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2016-0006。大鼠飼養(yǎng)于IVC 籠具（獨(dú)立通氣籠，461 mm×274 mm×229 mm，意大利Tecniplast公司），每籠3只，保持實(shí)驗室環(huán)境溫度為22 ℃，相對濕度為50%左右。

2 方法

2.1 厚樸水煎液入血成分分析

2.1.1色譜和質(zhì)譜條件 Agilent Extend-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～5 min，5%B；5～20 min，5%～20%B；20～30 min，20%～28%B；30～42 min，28%～74%B；42～55 min，74%～80%B；55～60 min，80%～90%B；60～70 min，90%B）；流速1.0 mL·min-1，柱后4∶1 分流，進(jìn)質(zhì)譜的流速為0.2 mL·min-1；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣體積為10 μL。使用電噴霧離子源（ESI）進(jìn)行負(fù)離子模式全掃描；碰撞氣為氦氣；霧化氣壓力為50 psi（1 psi≈6895 Pa）；干燥氣體流速為10.0 L·min-1；干燥氣溫度為350 ℃；毛細(xì)管電壓為4000 V；掃描范圍為m/z50～1000。

2.1.2厚樸水煎液樣品制備 取厚樸藥材100 g，粉碎至粗粉，加水800 mL，煎煮2 次，每次2 h，合并水煎液，減壓濃縮至1 g·mL-1（以生藥量計）。

2.1.3動物分組與給藥 SD 大鼠6 只，隨機(jī)分為2 組，對照組、厚樸給藥組各3 只。實(shí)驗前禁食12 h，全程自由飲水，給藥組按3.3 g·kg-1（以生藥量計，相當(dāng)于人體給藥劑量20 倍）給藥3 d，每天2次。

2.1.4血漿采集與制備 大鼠稱體質(zhì)量后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉（按大鼠體質(zhì)量350 mg·kg-1給藥），頸部和背部剃毛（2 cm×2 cm）。仰臥位固定，右側(cè)頸部近鎖骨位置碘酒消毒，75%乙醇脫碘，然后切開長約1.5 cm 小口，鈍性分離結(jié)締組織和肌肉，使頸總靜脈暴露于視野下，然后剪一小口，小心插入肝素化的采血管，結(jié)扎。將采血管從大鼠背部引出，并與大鼠采血馬甲連接，IVC 籠具單籠飼養(yǎng)，過夜。大鼠實(shí)驗前禁食12～16 h，自由飲水。給藥后4 h正常飲食。選取能順利抽血，無過敏、發(fā)炎等不良反應(yīng)的大鼠進(jìn)行藥動學(xué)的采血實(shí)驗。在末次給藥后不同的時間點(diǎn)（0、10、20、30、45 min 及1.0、1.5、2.0、2.5、4.0 h）采集血液樣品，采血體積為350 μL，采血速度為375 μL·min-1，補(bǔ)液速度為375 μL·min-1，保持“低漏失”模式，補(bǔ)肝素化0.9%氯化鈉溶液速度：100 μL·h-1，樣品收集室溫度為4～6 ℃。實(shí)驗組同一時間點(diǎn)每只大鼠取血漿100 μL，混合為300 μL，加入3 倍甲醇沉淀，渦旋3 min，12 000 r·min-1離心10 min（離心半徑為8 cm），氮?dú)獯蹈桑?0%甲醇100 μL復(fù)溶，重復(fù)離心10 min，取上清液進(jìn)樣。對照組大鼠取血漿300 μL，步驟同上，取上清液進(jìn)樣。

2.1.5尿液、糞便采集與制備 SD 大鼠6 只，分組與給藥同2.1.3項下。第4天置于代謝籠中，禁食12 h，自由飲水，于6、12、24 h 收集尿液和糞便。記錄各時間點(diǎn)收集到的尿液體積和糞便質(zhì)量，分別置于離心管中，-80 ℃保存。實(shí)驗組同一時間點(diǎn)取每只大鼠尿液收集量的1%，混合，3 倍甲醇沉淀，渦旋3 min，12 000 r·min-1離心10 min（離心半徑為8 cm），取上清液進(jìn)樣。對照組大鼠取樣100 μL，步驟同上，取上清液進(jìn)樣。實(shí)驗組大鼠同一時間點(diǎn)取每只大鼠糞便收集量的10%，混合，用20 倍70%甲醇提取（渦旋3 min，超聲30 min），按上述同樣離心條件離心10 min，取上清液進(jìn)樣。對照組大鼠取樣50 mg，步驟同上，取上清液進(jìn)樣。

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

2.2.1厚樸潛在靶點(diǎn)預(yù)測 將分析得到的厚樸水煎劑入血成分通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP）2.3、STITCH 5.0、SwissTargetPrediction、SuperPred 數(shù)據(jù)庫獲取相關(guān)靶蛋白，利用UniProt 數(shù)據(jù)庫對入血成分靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行匹配分析，并轉(zhuǎn)化成gene symbol。

2.2.2構(gòu)建胃輕癱疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫 利用TTD、DiGSeE 2.01、OMIM、DrugBank 5.1.0、HPO 數(shù)據(jù)庫，以“gastroparesis”為關(guān)鍵詞，檢索與胃輕癱相關(guān)的基因，構(gòu)建胃輕癱疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫。

2.2.3蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將藥物和疾病靶點(diǎn)輸入STRING 10.5 數(shù)據(jù)庫，限定物種為人類（Homo sapiens），構(gòu)建藥物、胃輕癱靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)。通過Cytoscape 3.5.1 對藥物、胃輕癱靶點(diǎn)數(shù)據(jù)取交集，尋找核心靶點(diǎn)，并繪制出藥物-入血成分-靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)。

2.2.4基因本體（GO）功能富集和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析 利用DAVID 6.7 數(shù)據(jù)庫對入血成分、疾病交集靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行GO 富集分析和KEGG 通路富集分析，其中Select Identifier 設(shè)置為Official Gene Symbol，List Type 設(shè)置為Gene List，限定物種為人，列出-lgP排名前20的通路。

3 結(jié)果

3.1 厚樸水煎劑化學(xué)成分分析

厚樸水煎劑化學(xué)成分總離子流圖（TIC）見圖1，根據(jù)部分對照品保留時間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，結(jié)合質(zhì)譜裂解規(guī)律，從厚樸水煎劑中共鑒定出54 個化合物（表1），主要為苯乙醇苷、生物堿和木脂素類成分。

圖1 厚樸水煎劑負(fù)、正離子模式下的TIC圖

表1 厚樸水煎劑中化學(xué)成分

續(xù)表1

續(xù)表1

3.2 大鼠血清中成分分析與鑒定

對不同采血時間點(diǎn)大鼠血清中成分進(jìn)行分析，結(jié)果表明，給藥后1 h 的血清樣品中移行成分最多，且各成分色譜峰響應(yīng)值較高，因此選定1 h為最佳采血時間。通過各成分的保留時間、質(zhì)譜裂解規(guī)律及文獻(xiàn)參考，推測厚樸水煎劑入血成分。對比空白血清，含藥血清中發(fā)現(xiàn)14 個移行成分，包括厚樸酚、和厚樸酚等木脂素類脂溶性成分，木蘭花堿、木蘭箭毒堿等生物堿類成分和其他如谷甾醇、桉葉醇類成分等（表2）。

表2 大鼠血清中成分鑒定

3.3 尿液和糞便成分的分析

分析大鼠尿液和糞便，結(jié)果顯示，尿液中大部分為入血的原型成分，糞便中多為苯乙醇苷類、酚苷類等成分（表3），推測該類未被腸道吸收的原型成分主要通過糞便排出體外。

表3 大鼠尿液和糞便中成分鑒定

3.4 厚樸入血成分靶點(diǎn)篩選

將入血成分輸入到TCMSP 2.3、STITCH 5.0、SwissTargetPrediction 和SuperPred 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，結(jié)果共有7 個入血成分篩選到靶點(diǎn)，收集得到的靶點(diǎn)并刪除重復(fù)靶點(diǎn)，整理共得到118 個靶點(diǎn)，見表4。同時利用Cytoscape 3.5.1 構(gòu)建厚樸藥材、入血成分和相關(guān)靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖（圖2）。

圖2 厚樸的藥物-入血成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

表4 厚樸主要入血成分靶點(diǎn)

3.5 胃輕癱靶點(diǎn)篩選

利用TTD、DiGSeE 2.01、OMIM、DrugBank、HPO 數(shù)據(jù)庫并結(jié)合文獻(xiàn)[27-33]，檢索胃輕癱疾病靶點(diǎn)，經(jīng)整理合并后共得到55個靶點(diǎn)（表5）。

表5 胃輕癱疾病靶點(diǎn)

3.6 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過STRING 10.5 對藥物、胃輕癱靶點(diǎn)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)。藥物靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)得到607 個節(jié)點(diǎn)和7252條邊；胃輕癱靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)得到547 個節(jié)點(diǎn)和9171條邊，平均節(jié)點(diǎn)度值為6.23。通過Cytoscape 3.5.1對藥物、胃輕癱PPI數(shù)據(jù)取交集，結(jié)果得到124個節(jié)點(diǎn)（圖3），可以看出人激肽原1（KNG1）、磷脂酰肌醇3-激酶催化亞基α（PIK3CA）、表皮生長因子（EGF）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶3（NOS3）、血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）等為PPI核心靶點(diǎn)。

圖3 厚樸治療胃輕癱靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

3.7 GO功能富集分析和KEGG通路分析

利用DAVID 6.7 平臺對藥物疾病交集的核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO 富集分析及KEGG 通路富集分析。GO 富集分析包括分子功能、細(xì)胞組分、生物學(xué)過程分析，分子功能主要涉及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、血小板脫顆粒及RNA 聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等方面；細(xì)胞組分主要涉及血小板α顆粒腔體、細(xì)胞質(zhì)膜、胞外區(qū)等方面；生物學(xué)過程主要涉及血小板脫顆粒、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1（ERK1）和ERK2 的正向調(diào)節(jié)、對藥物的反應(yīng)等方面。以-lgP值進(jìn)行排名并列出排名前15 的途徑，見圖4。對富集得到的通路結(jié)果，以-lgP及各通路連接的基因數(shù)從大到小進(jìn)行排序，見圖5。結(jié)果表明，厚樸中有效成分可能通過催乳素信號通路、雌激素信號通路、RAS 信號通路及神經(jīng)營養(yǎng)因子信號通路等發(fā)揮胃腸推動作用。

圖4 厚樸入血成分與胃輕癱疾病交集核心靶點(diǎn)GO富集分析

圖5 厚樸入血成分與胃輕癱疾病交集核心靶點(diǎn)KEGG通路富集分析

4 討論

化學(xué)成分研究表明，厚樸中除含有厚樸酚類成分外，還含有多種苯乙醇苷類化學(xué)成分，從本實(shí)驗中大鼠的尿液和糞便中均能檢出，推測這些化合物很難被吸收。李玲等[34]通過研究苯乙醇苷類化合物木蘭苷A 在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)發(fā)現(xiàn)，此類化合物具有吸收快、消除迅速且生物利用度低的特點(diǎn)，口服給藥后在大鼠尿液和糞便中檢測到的苯乙醇苷類化合物多丟失1 個咖啡酰基得到m/z461 [M-HC9H6O3]-，或者失去1 個脫氧六碳糖基得到只連1 個葡萄糖基的苯乙醇苷部分m/z315[M-H-C9H6O3-C6H10O4]-，此后該部分裂解為丟失葡萄糖基的苷元和1 分子水后形成的脫氫離子m/z135 [M-HC9H6O3-C6H10O4-C6H12O6]-，與苯乙醇苷類化合物的裂解方式一致，下一步將根據(jù)每種化學(xué)成分的裂解規(guī)律開展代謝產(chǎn)物研究。

厚樸具有燥濕消痰、下氣除滿的功效，為消除脹滿的要藥。而胃輕癱綜合征是指以胃排空延緩為特征的臨床癥狀群，主要表現(xiàn)為早飽、餐后上腹飽脹、惡心、發(fā)作性干嘔、嘔吐、體質(zhì)量減輕等，又稱胃麻痹、胃無力等。胃輕癱綜合征不僅發(fā)生在胃手術(shù)后，還可見于其他腹部手術(shù)后和代謝疾病中，是一種影響胃功能的潛在嚴(yán)重疾病，如糖尿病胃輕癱（DGP）是糖尿病患者最常見的消化道并發(fā)癥，以非機(jī)械性梗阻所致的胃排空延遲為主要特點(diǎn)[35]。胃排空過程受神經(jīng)、激素、血糖等多系統(tǒng)、多因素調(diào)節(jié)，這些組織學(xué)變化及相關(guān)調(diào)控因素的改變與DGP 的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。核心靶點(diǎn)KNG1 是硫醇蛋白酶的抑制劑，高分子量激肽原（HMWK）釋放的活性肽緩激肽能影響平滑肌收縮，降低血液中葡萄糖水平[36]；PI3K 的激活在質(zhì)膜上產(chǎn)生第二信使3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3），PIP3 通過將含有PH 結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)[包括絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1（Akt1）和磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1（PDPK1）]募集到膜上而發(fā)揮關(guān)鍵作用，激活參與細(xì)胞生長、存活、增殖、運(yùn)動和形態(tài)的信號級聯(lián)通路，并在受體酪氨酸激酶配體如EGF、胰島素樣生長因子1（IGF1）、VEGFA 和血小板衍生生長因子（PDGF）的刺激下參與Akt1 的激活，通過胰島素受體底物（IRS）蛋白參與信號傳導(dǎo)[37]。VEGFA 是在血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞生長中具有活性的生長因子，能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞遷移，抑制細(xì)胞凋亡并誘導(dǎo)血管通透化[38]。NOS3 能夠產(chǎn)生一氧化氮（NO），NO作為一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可引起胃底容受性和幽門松弛，在DGP 的發(fā)病中起到重要作用[39]。黃穎秋等[40]證實(shí)NO 作為一種新型的非腎上腺非膽堿能（NANC）神經(jīng)遞質(zhì)，可能參與胃排空的調(diào)節(jié)，NO增多引起括約肌松弛，反之，括約肌收縮。DGP 患者神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)NO 水平顯著增高，且隨DGP 病程的延長和血糖的升高而進(jìn)行性增加[27-28]，而核心靶點(diǎn)NOS3能參與調(diào)節(jié)一氧化氮合酶的活性。

Thomas 等[29]認(rèn)為p38MAPK 通路的激活可以加快雌激素受體（ER）的轉(zhuǎn)運(yùn)速度及其與雌激素反應(yīng)元件（EREs）的結(jié)合，從而證明雌激素對胃排空有重要的作用。這與研究發(fā)現(xiàn)胃輕癱患者以女性居多，男女比例約為1∶4，且女性患者的癥狀會隨雌激素水平的變化而變化相符合，由此推測雌激素會影響DGP 患者胃排空進(jìn)程[30-31]。此 外，Gonenne 等[32]研究表明，雌激素可使胃排空時間延長，但胃腸傳輸時間不受影響。有研究表明，雌二醇可刺激胃腸道非腎上腺素非膽堿能神經(jīng)釋放NO，從而減慢胃排空[33]。雌激素信號通路上有厚樸與胃輕癱疾病的共同靶點(diǎn)NOS3，因此推測厚樸可能通過調(diào)節(jié)雌激素信號通路改善胃排空。有研究表明，厚樸提取物及厚樸酚可提高小鼠胃排空率及小腸推進(jìn)率，其對胃腸動力的促進(jìn)作用可能與興奮M 膽堿受體和調(diào)節(jié)5-羥色胺3（5-HT3）有關(guān)[41]。而張衛(wèi)衛(wèi)[42]研究結(jié)果顯示，厚樸酚與和厚樸酚可以抑制乙酰膽堿（ACH）、5-HT 所致的大鼠離體胃底條的收縮，使胃腸平滑肌松弛。此外，厚樸酚與和厚樸酚作為非競爭性毒蕈堿拮抗劑，兩者均能抑制ACH 誘導(dǎo)的平滑肌收縮和ACH 誘導(dǎo)的細(xì)胞外Ca2+依賴性收縮[41,43-46]，其改善胃排空和腸推進(jìn)功能的作用可能與胃腸平滑肌松弛功能有關(guān)。

綜上所述，本研究基于血清藥物化學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，在體內(nèi)化學(xué)成分分析辨識的基礎(chǔ)上通過關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析，初步闡釋了厚樸“下氣除滿”的作用機(jī)制，可為厚樸質(zhì)量標(biāo)志物的研究和相關(guān)藥效物質(zhì)的作用機(jī)制探究提供一定參考。