基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接的痰熱清干預(yù)耐藥銅綠假單胞菌致呼吸系統(tǒng)感染作用機(jī)制研究△

吳婭麗，王曉艷，2，張輝，陳毓龍，張明亮，張書琦，陳小菲，李偉霞，2*，唐進(jìn)法，2*

1.河南中醫(yī)藥大學(xué) 第一附屬醫(yī)院 河南省中藥臨床應(yīng)用、評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化工程研究中心/河南省中藥臨床藥學(xué)中醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450000；2.河南中醫(yī)藥大學(xué) 呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450000；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046

中國(guó)細(xì)菌耐藥檢測(cè)網(wǎng)（CHINET）發(fā)布的《2020年細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果（全年）》[1]顯示，來自全國(guó)54 家醫(yī)院的251 135 株臨床分離菌株中，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）位于主要菌種分布第4 位（占8.42%）；且在90 955 株呼吸道標(biāo)本分離菌株中位于第3 位（占14.30%），故PA 為引起呼吸道感染的重要致病菌之一。PA 自身多種適應(yīng)機(jī)制及抗菌藥物不合理使用誘使PA 通過不同的機(jī)制產(chǎn)生耐藥[2-3]，使臨床抗感染治療難度驟增。本課題組前期采用回顧性分析方法對(duì)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院2018－2021 年分離鑒定的來自187 名患者的608 例耐碳青霉烯銅綠假單胞菌（carbapenem resistant PA，CRPA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，顯示CRPA患者的中醫(yī)臨床辨證以痰熱壅肺證（27.03%）及風(fēng)溫肺熱證（16.22%）為主；治療過程基本用藥中，聯(lián)合使用中藥注射劑以醒腦靜、痰熱清、血必凈等為主。其中痰熱清具有清熱、化痰、解毒等作用，主要用于肺炎早期、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、呼吸道感染等疾病，具有廣譜抗菌殺毒作用，在臨床大量使用[4]。且已有臨床數(shù)據(jù)證實(shí)其能夠有效治療下呼吸道耐藥PA 感染[5]，且能夠下調(diào)細(xì)菌外排泵基因表達(dá)，使細(xì)菌耐藥性減弱，降低抗生素臨床使用劑量，起到抑菌作用[6]。但痰熱清治療耐藥PA感染的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制均尚不明確。

鑒于中藥復(fù)方成分的多樣性及其與機(jī)體作用的多靶點(diǎn)、多通路等復(fù)雜性，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探究痰熱清干預(yù)耐藥PA 感染的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，并采用分子對(duì)接方法初步驗(yàn)證，為臨床應(yīng)用提供參考，并為進(jìn)一步研究提供方向。

1 材料與方法

1.1 痰熱清相關(guān)靶點(diǎn)篩選

痰熱清由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花、連翹提取而成，以5 味藥為關(guān)鍵詞，分別在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http://tcmspw.com/tcmsp.php）[7]中查找所收錄化學(xué)成分，根據(jù)口服生物利用度（OB）≥30%且類藥性（DL）≥0.18 進(jìn)行活性成分初步篩選。基于SwissADME[8]平臺(tái)（http://www.swissadme.ch/），設(shè)定腸胃吸收（GIabsorption）為“High”，并根據(jù)Lipinski類藥性五原則選擇滿足其中2項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的化合物，即為各味中藥潛在活性成分，并根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道予以補(bǔ)充[9-19]。通過化源網(wǎng)（https://www.chemsrc.com/）及PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)獲取各活性成分的結(jié)構(gòu)式，導(dǎo)入SwissTargetPrediction平臺(tái)（http://www.swisstargetprediction.ch/）[20]，以“homo sapiens”為選擇物種，預(yù)測(cè)各活性成分的潛在作用靶點(diǎn)。

1.2 PA 相關(guān)呼吸系統(tǒng)疾病及臨床一線用藥靶點(diǎn)篩選

以“chronic obstructive pulmonary disease”“acute/chronic bronchitis”“acute/chronic pneumonia”“l(fā)ower respiratory tract infection”“pulmonary infection”等與PA 相關(guān)的呼吸系統(tǒng)疾病為關(guān)鍵詞，挖掘OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.omim.org）中的潛在靶點(diǎn)；參考《廣泛耐藥革蘭陰性菌感染的實(shí)驗(yàn)診斷、抗菌治療及醫(yī)院感染控制：中國(guó)專家共識(shí)》[21]和美國(guó)《醫(yī)院獲得性肺炎治療指南（2005）》[22]，選取頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢哌酮-舒巴坦、美羅培南、氨曲南、阿洛西林6 種抗生素，通過PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取結(jié)構(gòu)式，導(dǎo)入SwissTargetPrediction 平臺(tái)預(yù)測(cè)潛在靶點(diǎn)，并查閱文獻(xiàn)予以補(bǔ)充。合并兩者靶點(diǎn)，為PA 相關(guān)呼吸系統(tǒng)疾病及臨床一線用藥相關(guān)靶點(diǎn)（以下簡(jiǎn)稱疾病靶點(diǎn)）。

1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

為明確痰熱清相關(guān)靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)間的相互作用，將1.1 及1.2 項(xiàng)下所獲取相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入Venny 2.1.0 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取兩者交集靶點(diǎn)，將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.0 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/）構(gòu) 建PPI 網(wǎng)絡(luò)，以“homo sapiens”為選擇物種，最小互作閾值設(shè)定為“highest confidence（＞0.9）”，其余為默認(rèn)設(shè)置；并通過Cytoscape 3.8.0 軟件中的MCODE插件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)一步分析。

1.4 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及共同靶點(diǎn)的功能與通路富集分析

將痰熱清成分與疾病的共有靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 軟件，建立化合物-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，利用軟件內(nèi)置工具分析有效成分及靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括度（degree）、介度（betweennesss centrality）及緊密度（closenessss centrality）等；并將共有靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape 平臺(tái)[23]，設(shè)置P＜0.01，進(jìn)行基因本體（GO）富集分析及京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路分析，然后使用OmicShare Tools（https://www.omicshare.com/tools）制作通路高級(jí)氣泡圖；采用Cytoscape 3.8.0 軟件構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。

1.5 分子對(duì)接驗(yàn)證痰熱清潛在活性成分與靶標(biāo)的結(jié)合作用

基于1.3 項(xiàng)下PPI 網(wǎng)絡(luò)及1.4 項(xiàng)下所構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)選取核心靶點(diǎn)及主要活性成分，登錄PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)下載主要活性成分結(jié)構(gòu)并保存為.sdf 格式，利用ChemDraw 3D 軟件轉(zhuǎn)換為.mol2 格式，AutoDock Tools 1.5.6 軟件打開配體小分子并進(jìn)行加氫及電荷等操作，保存為.pdbqt 格式文件；登錄PDB 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)[24]，參照目標(biāo)蛋白的篩選標(biāo)準(zhǔn)（來源物種：homo sapiens；細(xì)化分辨率≤3.0；發(fā)布日期：近10年；優(yōu)先考慮含有與活性成分相似的配體）分別下載核心靶點(diǎn)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)，在AutoDockTools

1.5.6中打開，加上氫原子等操作使其處于合理的構(gòu)象，將其定義為受體并保存成.pdbqt 文件；根據(jù)配體位置確定Vina 分子對(duì)接的坐標(biāo)和盒子大小，參數(shù)exhaustiveness設(shè)置為20以增加計(jì)算準(zhǔn)確度；采用AutoDock vina 1.1.2 進(jìn)行半柔性對(duì)接，選取affinity最佳的構(gòu)象作為最終對(duì)接構(gòu)象；最后選取對(duì)接結(jié)合能量最低的構(gòu)象分析對(duì)接結(jié)合模式，采用Discovery studio 4.5.0對(duì)對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 痰熱清活性成分及靶點(diǎn)篩選

通過TCMSP初步提取黃芩、金銀花、連翹、山羊角和熊膽粉化學(xué)成分分別為36、23、23、13、3個(gè)，經(jīng)檢索文獻(xiàn)補(bǔ)充及SwissADME平臺(tái)篩選后共獲得黃芩、金銀花、連翹、山羊角、熊膽粉的化學(xué)成分分別為32、31、28、13、3 個(gè)。SwissTargetPrediction平臺(tái)預(yù)測(cè)5 味中藥活性成分的作用靶點(diǎn)分別為362、377、502、81、57 個(gè)，合并靶點(diǎn)并刪除重復(fù)值得到痰熱清活性成分作用靶點(diǎn)共746個(gè)。

2.2 疾病靶點(diǎn)篩選

通過OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得慢性阻塞性肺疾病（COPD）靶點(diǎn)200 個(gè)、急性支氣管炎及急性肺炎靶點(diǎn)各167 個(gè)、慢性支氣管炎靶點(diǎn)及慢性肺炎靶點(diǎn)各80個(gè)、下呼吸道感染靶點(diǎn)188個(gè)、肺部感染靶點(diǎn)301個(gè)，通過SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)共預(yù)測(cè)臨床一線用藥靶點(diǎn)258 個(gè)，合并各疾病相關(guān)靶點(diǎn)及臨床一線用藥靶點(diǎn)并刪除重復(fù)值，共得到疾病靶點(diǎn)959個(gè)。

2.3 痰熱清成分-疾病靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將篩選所得痰熱清活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，采用Venny 2.1.0 平臺(tái)獲取兩者的共有靶點(diǎn)213個(gè)（圖1）。采用STRING 11.0平臺(tái)分析共有靶點(diǎn)，選取度值較高的前30 個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)（圖2A）；結(jié)合Cytoscape 3.8.0 軟件中的MCODE 插件得到其內(nèi)在模塊（module，圖2B），度值越高表明該靶點(diǎn)作用越關(guān)鍵。度值較高的核心靶點(diǎn)有磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶亞基（PIK3CA，度值為20）、信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3（STAT3，度值為18）、原癌基因酪氨酸受體激酶（SRC，度值為18)、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR，度值為17）、酪氨酸蛋白激酶（JAK2，度值為16）等；MCODE 插件分析可知得分（Score）較高的靶點(diǎn)包括SRC（6.53）、STAT3（5.50）、EGFR（4.00）、PIK3CA（3.24）等。

圖1 痰熱清成分-銅綠假單胞菌相關(guān)呼吸系統(tǒng)疾病及一線用藥相關(guān)靶點(diǎn)的韋恩圖

圖2 痰熱清成分-疾病主要靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)及網(wǎng)絡(luò)中的模塊

2.4 痰熱清成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將痰熱清成分與疾病靶點(diǎn)的213 個(gè)共有靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 軟件構(gòu)建痰熱清成分-疾病-靶點(diǎn)的核心網(wǎng)絡(luò)（圖3），并通過內(nèi)置工具分析拓?fù)鋮?shù)（表1）。

表1 痰熱清成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)特征參數(shù)

圖3 痰熱清成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

由結(jié)果可知，痰熱清活性成分的介度、緊密度、度均值分別為0.006、0.427、21，PA 相關(guān)疾病及臨床一線用藥的介度、緊密度、度均值分別為0.005、0.377、11，靶標(biāo)的介度、緊密度、度均值分別為0.013、0.434、31。痰熱清中黃芩活性成分度值最高（平均度值為34），其次為金銀花和連翹中的活性成分（平均度值分別為18 和12）。活性成分中度值較高的包括粘毛黃芩素Ⅲ、欖核蓮黃酮、木犀草素、漢黃芩素、山柰酚、槲皮苷、金圣草黃素、異鼠李素、黃芩新素、水楊苷、黃芩黃酮、rivularin等。關(guān)鍵靶標(biāo)主要包括碳酸酐酶（CA2、CA1、CA9、CA7、CA4 等）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP13、MMP2、MMP12、MMP9 等）、EGFR、糖原合成酶激酶-3β（GSK3B）、磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亞基γ亞型（PIK3CG）等。

2.5 生物功能富集及通路分析

應(yīng)用Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)痰熱清干預(yù)銅綠假單胞菌感染的相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行生物功能富集，并對(duì)相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行信號(hào)通路分析。由結(jié)果可見，多個(gè)靶點(diǎn)的功能與痰熱清干預(yù)PA感染密不可分（圖4）。痰熱清主要參與的生物學(xué)過程（BP）包括對(duì)MAPK通路的調(diào)節(jié)（regulation of MAPK cascade）、對(duì)氮化合物的應(yīng)答（cellular response to nitrogen compound）、對(duì)無(wú)機(jī)物的應(yīng)答（response to inorganic substance）、化學(xué)突觸傳遞的調(diào)節(jié)（modulation of chemical synaptic transmission）等（圖4A）；在分子功能（MF）層面上，主要與碳酸脫水酶活性、磷酸轉(zhuǎn)移酶活性、G 蛋白偶聯(lián)受體、金屬內(nèi)肽酶活力、熱休克蛋白等有關(guān)（圖4B）；在細(xì)胞組分（CC）方面，主要作用于樹突、膜筏、囊腔、核周質(zhì)等（圖4C）。

圖4 痰熱清成分-疾病共有靶點(diǎn)GO富集分析

通過Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)KEGG通路進(jìn)行富集分析，發(fā)現(xiàn)具有顯著相關(guān)的通路有135條（P＜0.05），通過檢索篩選出23 條與痰熱清干預(yù)PA 感染相關(guān)的核心通路（圖5），主要涉及缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）信號(hào)通路、磷脂腺肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3KAkt）信號(hào)通路、黏著斑、Ras 信號(hào)通路、EGFR 酪氨酸激酶抑制劑耐藥性信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、JAK-STAT信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路等。

圖5 痰熱清成分-疾病共有靶點(diǎn)KEGG通路富集分析

運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建痰熱清成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)（圖6），并對(duì)核心成分及核心作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)分析，預(yù)測(cè)ADORA1、MMP13、GSK3B、MMP2、EGFR、SRC、PIK3CG、PIK3CA、MAPK1、TNF等為痰熱清干預(yù)PA 感染的重要靶點(diǎn)；黃芩中的表小檗堿、欖核蓮黃酮、水楊苷、黃烷酮、漢黃芩素、黃芩新素、黃芩素、金合歡素、黃芩黃酮、去甲漢黃芩素、粘毛黃芩素Ⅲ等，金銀花中的山柰酚、木犀草素、槲皮苷、金圣草黃素、異鼠李素、異綠原酸C、異綠原酸B 等，連翹中的表桉葉明、安五脂素、連翹脂素、遠(yuǎn)志酮等為痰熱清干預(yù)PA 感染的主要成分。

2.6 分子對(duì)接驗(yàn)證

基于2.3 項(xiàng)下核心PPI 網(wǎng)絡(luò)及2.4 項(xiàng)下成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，篩選出既與多種主要活性成分相連，又在PPI 網(wǎng)絡(luò)中具較高M(jìn)CODE Score 和連接度的靶點(diǎn)，包括EGFR（與26 個(gè)成分相連，Score=4）、SRC（與21 個(gè)成分相連，Score=6.53）、黏著斑激酶2（PTK2，與8 個(gè)成分相連，Score=3）、PIK3CA（與7 個(gè)成分相連，Score=3.24）、MAPK1（與6 個(gè)成分相連，Score=5.2）、蛋白酪氨酸激酶2（JAK2，與4 個(gè)成分相連，Score=4）。采用分子對(duì)接法考察6個(gè)靶標(biāo)蛋白與潛在活性成分間的結(jié)合能力，結(jié)果顯示，潛在活性成分與靶標(biāo)蛋白的結(jié)合能均小于-17 kJ·mol-1，說明受體與配體間具潛在的結(jié)合活性及低結(jié)合能量的穩(wěn)定性。因此，推測(cè)所選取化合物為痰熱清治療銅綠假單胞菌感染相關(guān)呼吸系統(tǒng)疾病的主要活性成分，其中，其他5 種靶標(biāo)蛋白較MAPK1 與活性成分的結(jié)合活性較佳（圖7）。最后，選取對(duì)接結(jié)合能量最低的構(gòu)象用于分析對(duì)接結(jié)合模型，并通過Discovery Studio 4.5.0 軟件對(duì)其2D 和3D模型進(jìn)行可視化處理（圖8）。

圖7 痰熱清活性成分與6個(gè)核心靶標(biāo)蛋白的分子對(duì)接結(jié)合能熱圖

圖8 痰熱清活性成分與6個(gè)核心靶標(biāo)蛋白的分子對(duì)接作用方式

3 討論

PA 具有易定植、易變異、多耐藥等特點(diǎn)，多致肺部感染，是臨床最常見的醫(yī)院獲得性感染重要的條件致病菌，且為多重耐藥和廣泛耐藥致病菌之一，故臨床可選擇的敏感性藥物非常有限、治療難度較大[25]。中醫(yī)學(xué)中雖并無(wú)重癥肺炎的具體病名，但可歸于“風(fēng)溫犯肺”范疇；臨床上重癥肺炎常見痰熱壅肺證、痰濕阻肺證、熱陷心包證、邪陷正脫證4種證型，單存相兼并見[26-27]。對(duì)于感染，中醫(yī)從細(xì)菌與患者2 方面認(rèn)識(shí)，認(rèn)為“正氣存內(nèi)則邪不可干”，內(nèi)因是根本，不是單純的抗菌；中藥復(fù)方的抗菌作用也不是單一的抑制或殺滅細(xì)菌，而是抗菌、免疫調(diào)節(jié)、消除細(xì)菌耐藥性等途徑的多方位組合作用，且已有案例表明中醫(yī)藥對(duì)大型爆發(fā)性呼吸道感染性疾病[如重癥急性呼吸綜合征（SARS）、獲得性肺炎等]有重要的預(yù)防和治療作用[28]。

本課題組前期回顧性分析河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院3年間CRPA患者的基本信息及臨床治療過程用藥，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)CRPA 患者的中醫(yī)臨床辨證以痰熱壅肺證及風(fēng)溫肺熱證為主，故臨床診治過程中可佐以清熱解毒類中藥。痰熱清具有清熱、化痰、解毒等作用，主疾熱阻肺證，逐漸成為治療感染性疾病的新方向[29]。

痰熱清注射液中黃芩為君藥，熊膽粉、山羊角為臣藥，金銀花為佐藥，連翹為使藥[30]。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步篩選出痰熱清干預(yù)耐藥銅綠假單胞菌所致肺部感染的活性成分為漢黃芩素、山柰酚、槲皮素、木犀草素、黃烷酮、黃芩素、黃芩苷、異鼠李素、異綠原酸C、連翹脂素、安五脂素等；5 味中藥中黃芩活性成分平均度值最高，且主要活性成分多來自于黃芩，體現(xiàn)其君藥合理性；但熊膽粉和山羊角活性成分平均度值較低，或因山羊角的氨基酸類成分主要為內(nèi)源性成分，熊膽粉主要成分為膽酸類[31]，其作用靶點(diǎn)研究相對(duì)較少。

PA 所致肺部感染過程復(fù)雜，首先大量PA 通過鞭毛、菌絲、細(xì)胞膜表面脂多糖（LPS）聚集黏附于呼吸道上皮細(xì)胞，繼而通過分泌蛋白、群體感應(yīng)系統(tǒng)、綠膿菌素和LPS 等因子侵襲激活宿主免疫應(yīng)答，產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子等炎性介質(zhì)，募集并激活巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T 細(xì)胞，最終導(dǎo)致嚴(yán)重肺損傷[28,32]。根據(jù)PPI核心網(wǎng)絡(luò)及痰熱清成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)分析，發(fā)現(xiàn)痰熱清干預(yù)耐藥PA 感染的靶點(diǎn)主要為EGFR、SRC、PIK3CA、MAPK1、PIK3CB、PTK2、MAPK8、MAPK14、JAK2、STAT1等，主要涉及HIF-1、PI3K-Akt、黏著斑、Ras、EGFR 酪氨酸激酶抑制劑耐藥性、MAPK、JAKSTAT、趨化因子等信號(hào)通路。其中PI3K-Akt和Ras/MAPK 是細(xì)胞膜表面受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路，涉及炎癥和免疫應(yīng)答過程[28]。炎性因子或其他生長(zhǎng)因子可通過與膜上受體結(jié)合或激活JAK 進(jìn)一步激活PI3K 和MAPK 以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、表達(dá)促炎因子[33]。細(xì)菌可通過EGFR-MAPK 信號(hào)通路增加低聚黏液/凝膠的產(chǎn)生，EGFR 抑制劑可通過抑制MAPK3、MAPK1 和MAPK14 磷酸化而抑制病原菌所致呼吸道粘液的過度產(chǎn)生[34]。通過分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)，所選20個(gè)活性成分與EGFR、SRC、PTK2、PIK3CA、MAPK1、JAK2 間均具較好直接作用，故推測(cè)痰熱清主要通過作用于以上6 種靶蛋白抑制PI3K-Akt 和EGFR-MAPK 信號(hào)通路，進(jìn)而抑制耐藥PA 在呼吸道過度黏附、產(chǎn)生黏液并分泌炎性因子和內(nèi)毒素，從而緩解呼吸系統(tǒng)疾病。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析和分子對(duì)接驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)痰熱清注射液干預(yù)耐藥PA 感染是多成分、多靶點(diǎn)、多通路的綜合作用，提示網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可全面、系統(tǒng)研究中藥復(fù)方，體現(xiàn)中醫(yī)整體性；該研究也為痰熱清臨床干預(yù)耐藥PA 感染提供依據(jù)，并為進(jìn)一步機(jī)制研究提供參考。