牛白藤飲片質量標準研究

吉林芳 楊德泉▲ 佘永紅 丁 野

1.湖南省湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗所中藥室，湖南吉首 416000；2.湖南省藥品檢驗檢測研究院標準研究所，湖南長沙 410001

牛白藤，又名膿見消、百藤草、金不換、廣花耳草[1]，為茜草科植物牛白藤Hedyotis hedyotidea（DC.）Meer.的干燥藤莖。分布于廣東、廣西、云南、福建、臺灣等地。味微甘，性涼，歸脾、肝經(jīng)。具有清熱解暑、祛風活絡、消腫止痛的功效，主治感冒發(fā)熱、風濕痹痛、跌打損傷[2]。本品又是瑤族常用藥，瑤藥名為結崗崩，功能為清熱解毒、祛風消腫，治療中暑高熱、肺炎、感冒咳嗽、乳腺炎、濕熱泄瀉、痔瘡出血、癰瘡腫毒、皮膚濕疹、帶狀皰疹等[3]。藥理研究表明，牛白藤具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛活性[4]其所含成分白樺醇、烏蘇酸、7β-羥基谷甾醇均有較強的免疫抑制活性[5]，白樺醇和熊果酸可有效減輕ConA 誘導的急性肝損傷，具有抗炎和護肝作用[6]，牛白藤與白花蛇舌草兩種水煎液具有等效體外抗白血病效應[7]。臨床方面，牛白藤作為抗炎鎮(zhèn)痛和傷科用藥，用量較大，使用頻率較高，臨床療效顯著，特別在傷科中的應用效果更佳，是臨床不可或缺的一味中藥。牛白藤飲片收載于《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》2010年版[8]，飲片標準包括性狀、薄層色譜鑒別、浸出物（醇溶性浸出測定法）等項目。為完善牛白藤飲片標準，本研究對牛白藤飲片的質量標準進行了研究，新增了水分、總灰分檢查項目，修訂了完善了性狀、薄層鑒別和浸出物項目，使飲片標準能更加全面控制質量。

1 實驗材料

1.1 儀器與試劑

KM5200DE 型超聲波清洗器（昆山美美超聲儀器有限公司）；AUW220D 電子天平（日本島津公司）。Good-See-10 型薄層色譜成像儀（上海科哲生化科技有限公司）。硅膠G 薄層板（青島海浪干燥劑有限公司，批號：2017年3月2日，10 cm×20 cm）；硅膠G 薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號：2018年5月15日，10 cm×20 cm）；硅膠G 高效薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號：2021年5月28日，10 cm×20 cm）。試劑均為分析純，水為純化水。

1.2 對照品與樣品

1.2.1 對照品 牛白藤對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號121217-200502）。

1.2.2 實驗樣品及來源 12 批牛白藤飲片來源見表1。

表1 牛白藤飲片來源表

2 方法與結果

2.1 成品性狀

成品為厚片。表面粗糙，灰白色或灰黃色，有突起較細的縱直筋脈紋，老莖可見灰白色縱長突起相互連接的皮孔斑，刮去表層栓皮現(xiàn)灰綠色。質堅韌。切面皮部淺灰褐色，木部占大部分，黃白色或淡黃色，髓多中空。老莖呈菊花紋理（異型維管束），纖維性，髓小。氣微，味微甘（圖1，封三）。

圖1 牛白藤飲片圖

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 方法：取本品粉末1 g，加乙醇10 ml，超聲處理15 分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml 使溶解，作為供試品溶液。另取牛白藤對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。參照《中華人民共和國藥典》[9]（簡稱《中國藥典》）通則0502 試驗，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

實驗用硅膠G 高效薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號：2021年5月28日），溫度：24.8℃，濕度：52%。結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點（圖2，封三）。

圖2 青島海洋化工廠分廠薄層硅膠G 高效板展開結果

2.2.2 耐用性考察 采用兩個不同生產(chǎn)廠家的薄層硅膠G 板，分別在不同的溫度條件下，按2.2.1 方法實驗，實驗條件見表2。實驗結果見圖3～4（封三）。耐用性實驗結果表明，本方法色譜斑點清晰，分離度較好。

表2 耐用性考察條件表

圖3 青島海浪干燥劑有限公司的的薄層硅膠G 板展開結果

圖4 青島海洋化工廠分廠薄層硅膠G 板展開結果

2.3 檢查

2.3.1 水分按照《中國藥典》[9]2020年四部通則0832第二法，測定12 批牛白藤樣品的水分（表3）。水分最低值為11.43%，最高值為13.48%，平均值為12.67%。按平均值的120%計算為15.20%，建議牛白藤的水分限度定為“不得過15.0%”。

2.3.2 總灰分按照《中國藥典》[9]2020年版四部通則2302，測定12 批牛白藤飲片樣品的總灰分（表3）。總灰分最低值為6.88%，最高值為10.35%，平均值為8.71%；按平均值8.71%的120%計算為10.45%，建議牛白藤的總灰分限度定為“不得過11.0%”。

2.4 浸出物

按照《中國藥典》[9]2020年版四部通則2201 水溶性浸出物測定法項下的熱浸法，測定12 批牛白藤飲片的浸出物（表3）。12 批牛白藤浸出物中最低值為13.07%，最高值為18.76%，平均值為16.04%。按12 批樣品浸出物的平均的80%計算為12.83%，建議牛白藤的浸出物限度定為“不得少于13.0%”。

表3 牛白藤飲片水分、總灰分、浸出物（%）

3 討論

3.1 牛白藤飲片標準檢驗項目的完善

本研究在牛白藤現(xiàn)標準基礎上，新增加了牛白藤片的水分、總灰分控制項目，使牛白藤飲片質量控制項目更完善。

3.2 薄層色譜供試液和對照藥材溶液制備方法的完善

牛白藤為《中藥大辭典》[10]、《全國中草藥匯編》[11]均收載的品種，主要含[12-13]熊果酸、齊墩果酸、咖啡酸、樺木酮酸、白樺脂酸、表白樺脂酸、β-谷甾醇、吐葉醇、白樺醇、羽扇豆醇、Δ5，22 豆甾醇、巴戟醚萜、莨菪亭等成分。《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》2010年版收載牛白藤飲片薄層色譜鑒別方法，供試品溶液制備采用樣品加乙醇回流30 min 方法，展開劑為石油醚（30～60℃）-甲酸甲酯-甲醇（10∶4∶1）。本研究參考文獻資料[14]方法，供試品溶液制備采用超聲波處理15 min，用牛白藤對照藥材作為對照，展開劑為正己烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5），經(jīng)用三種不同品牌的硅膠G薄層板，在不同的溫度、濕度條件下的展開，結果顯示，本方法具有供試品和對照藥材提取制備簡便，色譜斑點清晰，分離度較好而且穩(wěn)定的優(yōu)點，可以作為牛白藤飲片的鑒別方法。

3.3 浸出物檢測方法的完善

黃健軍等[15]以齊墩果酸含量、熊果酸含量和干膏率的綜合評分為評價指標，對牛白藤煎煮法、浸漬法（70%乙醇）、回流提取法（70%乙醇）進行篩選，其中煎煮法得干膏中齊墩果酸含量0.0323 mg/g、熊果酸含量0.6114 mg/g，干膏率5.27%；浸漬法得干浸膏中含齊墩果酸0.0263 mg/g、熊果酸0.3218 mg/g，干浸膏率3.11%，表明煎煮法提取所得成分和干浸膏量均高于浸漬法。在中醫(yī)臨床上，牛白藤飲片多入湯劑治病，如韋人鑒[16]報道，用復方牛白藤湯治療急性傳染性肝炎取得滿意效果；赫軍等[17]報道，牛白藤合四妙湯用于急性痛風性關節(jié)炎獲得顯著效果。因此，本研究按照《中國藥典》[9]2020年版四部通則2201 水溶性浸出物測定法項下的熱浸法，測定牛白藤飲片的浸出物，結果12 批樣品的浸出物平均為16.0%。相對于牛白藤飲片浸出物采用70%乙醇作溶劑測定浸出物的方法，水溶性浸出物法更能表現(xiàn)牛白藤飲片成分在湯劑中的綜合煎出率情況，檢驗溶劑成本更低，故以水溶性浸出物作為牛白藤飲片質量控制指標，更符合牛白藤飲片的質量控制。

綜上所述，本研究在原標準的基礎上，新增了水分、

總灰分檢查項目；將原標準薄層鑒別方法中的供試品溶液制備方法由回流30 min 修訂為超聲提取15 mi n，提高了檢驗效率；將原標準采用測定醇溶性浸出物修訂為測定水溶性浸出物，使牛白藤飲片的標準指標更加符合臨床應用實際。本研究使牛白藤飲片質量標準更加完善，能夠達到全面地控制牛白藤飲片質量的目的，為牛白藤飲片的質量控制提供了可靠有效的手段。