原發性肝細胞癌患者血清血管內皮細胞生長因子、可溶性胸苷激酶-1和T淋巴細胞亞群的臨床意義

侯寶洲, 李慧平, 魏思忱, 穆宗瑋, 李麗娟, 田樹英

(河北省滄州市中心醫院, 1. 消化內二科, 2. 醫務部, 河北 滄州, 061000)

肝癌是中國主要的消化道惡性腫瘤之一，發病率居所有惡性腫瘤的第5位，病死率居第7位[1]。肝癌的具體發病機制仍不清楚，考慮與肝臟局部微環境中炎癥反應、病毒感染、氧化應激、損傷修復以及遺傳基因功能改變等有關[2]。血管新生是所有惡性腫瘤發生和發展的重要機制[3]。血管內皮細胞生長因子(VEGF)是目前最強效的促血管新生的細胞因子，與多種惡性腫瘤的發生及患者生存預后密切相關[4]。可溶性胸苷激酶-1(TK-1)是調控DNA結構和功能表達的重要活性酶，與DNA能量代謝和損傷修復有關[5]。TK-1被證實與多種惡性腫瘤如上皮性卵巢癌、結直腸癌的發生和臨床預后密切相關[6]。肝癌的發生與細胞免疫逃逸機制有關[7], T淋巴細胞亞群是機體細胞免疫的主要成分，在誘導殺傷癌細胞、促進癌細胞凋亡方面發揮重要作用[8]。本研究分析肝癌患者血清中VEGF、TK-1、T淋巴細胞亞群與腫瘤臨床病理特征及患者生存預后的相關性，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年9月—2020年9月105例在本院確診肝細胞癌患者的臨床資料，男60例，女45例，平均年齡(63.2±8.4)歲。納入標準: ① 年齡>18歲者; ② 符合原發性肝癌診斷標準者[9]; ③ 臨床資料完整者。排除標準: ① 入院前已經接受肝癌手術、放化療者; ② 合并肝轉移瘤、肝功能衰竭者; ③ 合并嚴重心、肺、腎功能障礙，自身免疫性疾病以及營養代謝性疾病者; ④ 妊娠、哺乳期女性。

1.2 研究方法

患者入院24 h內采集空腹外周靜脈血10 mL, 采用ELISA法檢測VEGF、TK-1水平，試劑購自美國Sigma公司; 流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+百分比和CD4+/CD8+), 淋巴細胞亞群分析試劑和單克隆酶聯免疫試劑盒購自美國BD公司，按試劑說明書的要求操作。

統計腫瘤臨床病理特征，主要包括性別、年齡、TNM分期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、分化級別、腫瘤直徑、淋巴結轉移和血管浸潤。出院后隨訪時間5～30個月，中位時間20.5個月，存活73例，死亡32例。分析血清VEGF、TK-1、T淋巴細胞亞群與腫瘤臨床病理特征及患者生存預后的關系。HBV感染采用血清病原學和HBV DNA定量檢測進行確診。出院后1、3、6、12個月以及此后每隔6個月門診隨訪，復查肝功能和肝臟超聲，記錄腫瘤復發情況和患者生存狀況。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0統計軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料采用均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對樣本t檢驗; 計數資料以[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗; 生存預后的危險因素分析采用多因素Cox回歸模型，采用逐步后退法計算受試者工作特征(ROC)曲線的曲線下面積(AUC)。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 VEGF、TK-1與腫瘤臨床病理特征及生存預后的關系

入院VEGF、TK-1與HBV感染、TNM分期、分化級別、淋巴結轉移、血管浸潤和生存預后相關，表現為HBV感染陽性、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴結轉移陽性、血管浸潤陽性以及死亡患者的入院血清VEGF、TK-1水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

mg/L

2.2 T淋巴細胞亞群與腫瘤臨床病理特征、生存預后的關系

入院CD4+/CD8+與HBV感染、TNM分期、分化級別、淋巴結轉移、血管浸潤和生存預后相關，表現為HBV感染陽性、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴結轉移陽性、血管浸潤陽性以及死亡患者的入院血清CD4+/CD8+降低，差異有統計學意義(P<0.05); CD3+、CD4+、CD8+百分比與腫瘤臨床病理特征、生存預后無相關性(P>0.05)。見表2。

表2 T淋巴細胞亞群與腫瘤臨床病理特征、生存預后的關系

2.3 治療前后VEGF、TK-1和T淋巴細胞亞群

的比較

與治療前比較, 105例肝癌患者治療后VEGF、TK-1水平下降, CD4+百分比、CD4+/CD8+升高，CD8+百分比下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 105例肝癌患者治療前后VEGF、TK-1及T淋巴細胞亞群比較

2.4 生存預后危險因素的Cox回歸分析

多因素Cox回歸分析顯示, TNM分期(Ⅲ～Ⅳ期)、淋巴結轉移、血管浸潤、VEGF、TK-1以及CD4+/CD8+是生存預后的影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 生存預后危險因素的Cox回歸分析

2.5 生存預后的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，入院VEGF、TK-1、CD4+/CD8+預測生存預后的AUC分別為0.824、0.869、0.756，聯合預測的AUC為0.912，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 生存預后的ROC曲線分析

3 討 論

本研究結果顯示，入院血清VEGF、TK-1、CD4+/CD8+與HBV感染、TNM分期、分化級別、淋巴結轉移、血管浸潤、生存預后顯著相關(P<0.05); HBV感染陽性、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴結轉移陽性、血管浸潤陽性以及死亡患者的入院血清VEGF、TK-1水平顯著升高, CD4+/CD8+顯著降低，提示VEGF、TK-1、CD4+/CD8+參與了肝癌的發生、發展以及臨床預后[9], 與既往研究[10-13]結論相似，但VEGF信號通路與腫瘤免疫微環境的復雜關系仍不清楚。研究[14-15]表明, VEGF信號通路與免疫細胞浸潤和66種免疫標記物的表達呈正相關，與活化的CD8+T細胞以及臨床預后呈正相關。在肝癌患者中, VEGF信號通路和腫瘤免疫微環境共同激活是抗VEGF藥物以及聯合免疫檢查點抑制劑(ICB)治療的重要機制[16]。

謝榮章等[17]研究指出，聯合血清甲胎蛋白(AFP)、TK-1和Dickkopf-1(DKK-1)蛋白檢測可提高原發性肝癌的早期診斷準確率。TK-1活性與DNA合成過程有關，是腫瘤增殖和細胞周期調控的重要功能酶, TK-1上調往往與細胞核增殖指數呈正相關，是多種惡性腫瘤的重要診斷標志物[18]。目前, ICB和嵌合抗原受體T細胞在腫瘤臨床治療中得到越來越多的應用，宿主免疫系統在腫瘤免疫治療中對腫瘤細胞的識別和靶向起著重要的作用[19-20]。利用人類免疫細胞進行免疫治療取得了許多進展，但是一種單獨的免疫療法對癌癥的治療效果不理想，有效的免疫治療組合如ICB聯合免疫細胞治療有重要的應用前景[21]。HUANG C Y等[22]指出, PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑在各種類型的實體瘤中顯示出良好的臨床效果，其進行的生存分析表明腫瘤和間質PD-L1狀態對患者的總生存率或無復發生存率無顯著影響，而高CD8+T細胞密度的患者有較好的總體生存率和無復發生存率，但其良好的預后價值因PD-L1高表達而被消除。特異性CD8+細胞毒性T細胞(CTL)通過人類白細胞抗原(HLA)的I類分子表達顯著上調腫瘤細胞系PD-L1的表達，腫瘤PD-L1過度表達以負反饋調節機制降低了CD8+CTL干擾素-γ的分泌。由此推測, PD-L1表達與肝癌CD8+T細胞免疫存在緊密相互作用[23-24]。

本研究還發現，肝癌患者治療后VEGF、TK-1水平下降, CD4+百分比和CD4+/CD8+升高, CD8+百分比下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。多因素Cox回歸分析顯示, TNM分期、淋巴結轉移、血管浸潤、VEGF、TK-1、CD4+/CD8+是生存預后的影響因素(P<0.05); 血清VEGF每升高1個標準差，患者死亡風險增加0.865倍(HR=1.865); TK-1每升高1個標準差，患者死亡風險增加0.624倍(HR=1.624); CD4+/CD8+降低1個標準差，患者死亡風險增加0.329倍(HR=1.329)。ROC曲線分析顯示，入院VEGF、TK-1、CD4+/CD8+聯合檢測預測肝癌患者死亡的AUC為0.912，高于任意單一指標，差異有統計學意義(P<0.05)。本研究仍存在樣本量不足、隨訪時間過短等局限性，而回顧性研究可能對實驗結果造成偏倚，未來將擴大樣本量，延長隨訪時間，采取多中心、前瞻性隨機對照研究予以證實。

綜上所述，肝癌患者血清VEGF和TK-1表達升高, CD4+/CD8+下降，與多個腫瘤臨床病理特征和患者生存預后密切相關，聯合VEGF、TK-1和CD4+/CD8+預測生存預后有較高的價值。