血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合 Hs-cTnI在急性心肌梗死患者中的表達(dá)及其臨床意義

麥壯艷 林應(yīng)源 萬樹莉 王婷婷

急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是一種由心肌缺血性壞死造成的急性致命性疾病，盡管過去10年預(yù)后有了顯著改善，但其死亡率仍居高不下[1]。對AMI進(jìn)行早期診斷，并及時采取有效的救治措施，是降低死亡率并改善預(yù)后的關(guān)鍵。高敏心肌肌鈣蛋白I（high sensitivity cardiac troponin I,Hs-cT－nI）檢測能早期提示微小心肌損傷，是當(dāng)前診斷AMI的首選實驗室指標(biāo)[2]。越來越多的研究表明，環(huán)狀RNA（circular RNA,CircRNA）是一種內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄物，具有較高的穩(wěn)定性和組織特異性，其異常表達(dá)與心血管疾病的發(fā)病機(jī)制高度關(guān)聯(lián)[3-4]。近期研究發(fā)現(xiàn)，CircRNA_0050908及CircRNA_0001879在心血管疾病患者中存在異常表達(dá)，對心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展具有重要的調(diào)控作用，有望成為心血管疾病診斷和治療干預(yù)的理想候選指標(biāo)[5-6]。目前，關(guān)于CircRNA_0050908及CircRNA_0001879對AMI的診斷價值少有文獻(xiàn)報道。本研究通過檢測AMI患者血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平，分析其聯(lián)合傳統(tǒng)心肌標(biāo)志物Hs-cTnI對 AMI診斷及預(yù)測心血管不良事件的價值，以期為AMI的診治提供幫助。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2018年1月至2021年6月海南西部中心醫(yī)院收治的AMI患者108例作為研究對象（AMI組），其中男 73例，女 35例；年齡 35～81（57.30±11.82）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《歐洲心臟病學(xué)會急性心肌梗死管理指南（2017）》[7]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡≥18歲，發(fā)病至入院時間＜8 h。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）已接受過冠狀動脈旁路移植術(shù)、靜脈溶栓治療；（2）存在惡性腫瘤、血液病及腦血管疾病。隨訪所有患者在確診30 d內(nèi)再次發(fā)生心血管不良事件的情況，AMI患者再次發(fā)生心血管不良事件18例（心源性死亡4例，再次心肌梗死4例，心絞痛7例，心力衰竭3例）。另選取健康體檢者50名作為對照組，其中男32例，女性18例；年齡36～80（58.10±9.62）歲。兩組研究對象性別、年齡、基礎(chǔ)疾病史、血壓、TC、TG、LDL-C及 HDL-C比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意。

表1 兩組研究對象臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平檢測 采集所有患者入院即刻和健康體檢者體檢時的靜脈血各3 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清。取血清400 μl采用Trizol試劑盒提取血清總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲取反轉(zhuǎn)錄DNA（PCR相關(guān)試劑盒均購自上海生物工程有限公司）。采用RT-qPCR法檢測血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879 水平，PCR 總反應(yīng)體系為 20 μl：1 μl引物及探針 Mix（20×），10 μl TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μl反轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67 μl雙蒸水。擴(kuò)增反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5 min 1個循環(huán)，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸60 s。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參基因，采用 2-ΔΔCt法計算結(jié)果。

1.2.2 血清Hs-cTnI水平檢測 另取上述血清200 μl，使用DXI 800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）及配套試劑檢測Hs-cTnI水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計量資料以 表示，方差齊時，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；方差不齊時，組間比較采用非參數(shù)檢驗。ROC曲線評估CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合HscTnI診斷AMI及預(yù)測心血管不良事件的效能。采用Pearson相關(guān)分析 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比較 AMI組患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），見表2。

表2 兩組研究對象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比較

2.2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI診斷AMI的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI診斷AMI的最佳截斷值分別為1.83、1.50、0.91 μg/L，3項聯(lián)合診斷AMI的AUC明顯高于單項CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI檢測，其靈敏度為0.982，特異度為0.913，見表3和圖1（插頁）。

表3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI診斷AMI的效能

圖1 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合 Hs-cTnI診斷AMI的ROC曲線

2.3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預(yù)測心血管不良事件的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI預(yù)測心血管不良事件的最佳截斷值分別為 1.95、1.61、0.86 μg/L，3 項聯(lián)合預(yù)測心血管不良事件的AUC明顯高于單項CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI檢測，其靈敏度為0.943，特異度為0.875，見表4和圖2（插頁）。

表4 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預(yù)測心血管不良事件的效能

圖2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預(yù)測心血管不良事件的ROC曲線

2.4 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平均呈正相關(guān)（r=0.830和0.751，均 P＜0.01），見圖 3。

圖3 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的散點圖

3 討論

AMI是一種心肌急性缺血性壞死的常見急危重癥，在過去的幾十年中，AMI已成為一個重要的死亡原因，在全球范圍內(nèi)AMI的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康[8]。早發(fā)現(xiàn)、早治療是當(dāng)前AMI防治的重中之重。生物標(biāo)志物在AMI早期診斷和治療中起著重要的作用。因而，尋找一種更加有效的AMI診療標(biāo)志物組合對患者的早期救治具有極大的幫助。CircRNA是一類呈封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)的特殊非編碼RNA，參與調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡及心肌損傷，在心血管疾病的診斷及治療中起到很大的指導(dǎo)作用，被認(rèn)為是臨床治療AMI的新靶點[9]。國內(nèi)外研究證實，CircRNA在心血管疾病患者血液樣本中異常表達(dá)，其參與多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展，可能是一種潛在的心血管疾病診斷和治療的理想候選基因生物標(biāo)志物[10-11]。Hs-cTnI作為AMI診斷的金指標(biāo)，已在臨床上得到廣泛認(rèn)可和共識，其對心肌損傷的診斷具有重大的幫助[12]。

本研究 AMI組患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明顯高于對照組，提示血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及HscTnI水平高表達(dá)可能參與AMI的發(fā)病過程。這可能是CircRNA_0050908和CircRNA_0001879作為重要的炎癥調(diào)控因子，其過度表達(dá)促進(jìn)了冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生，使心肌缺血、缺氧從而引起心肌梗死，在AMI的發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。Lau等[13]研究指出，與對照組相比，AMI患者血清Hs-cTnI水平明顯升高，對AMI診斷具有一定價值。Gong等[14]研究認(rèn)為，CircRNA在AMI的發(fā)生、調(diào)控和病理生理作用中發(fā)揮了重要的作用，對AMI的診斷和預(yù)后具有重要的生物學(xué)意義，是AMI治療的潛在靶點。由此推測CircRNA_0050908、CircRNA_0001879 在 AMI發(fā)病中發(fā)揮了巨大的潛力。

本研究ROC曲線顯示，CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI對 AMI診斷及預(yù)測心血管不良事件的AUC均較高，3項聯(lián)合的AUC最大，均＞0.925。相關(guān)分析也顯示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平均呈正相關(guān)。說明 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879診斷 AMI及預(yù)測心血管不良事件有很大的潛力，兩者聯(lián)合HscTnI診斷AMI及預(yù)測心血管不良事件的效能最高。研究表明，Hs-cTnI診斷AMI的準(zhǔn)確性較高，在早期排查AMI中也有較高的靈敏度，具有較好的臨床實用性[15]。另有研究認(rèn)為，CircRNA在AMI中起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用，是AMI的潛在診斷標(biāo)志物和預(yù)后標(biāo)志物，為AMI的靶向治療提供了很好的指導(dǎo)作用[16]。由此可見，早期檢測CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平對早期發(fā)現(xiàn)AMI有很大的幫助。

綜上所述，AMI患者血清 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879表達(dá)水平明顯升高，聯(lián)合Hs-cTnI檢測有助于提高 AMI診斷及心血管不良事件預(yù)測的準(zhǔn)確性。通過 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879與Hs-cTnI的相互結(jié)合，很好地彌補(bǔ)了Hs-cTnI單一指標(biāo)對AMI診斷存在的局限性，為AMI的早診斷、早救治提供重要的依據(jù)。