四種嬰幼兒濕疹外用方劑對小鼠急性濕疹的影響

吳白芬 尚 李 尚 怡 彭海燕 劉 錄 何芳雁 周志宏 浦仕彪*

1.云南省高校中藥飲片工程研究中心 云南中醫藥大學，云南 昆明 650500；2.云南經濟管理學院，云南 昆明 650032

嬰幼兒濕疹又稱為特應性皮炎，是常見病、多發病，有研究[1]表明新生兒期至3歲是嬰幼兒濕疹的高發期。嬰兒濕疹確切病因尚不清楚，一般認為是由內、外因素共同作用而引發的變態反應性皮膚疾病，主要與遺傳、感染、環境、飲食、皮膚屏障功能破壞及機體免疫功能失調等因素相關，嬰兒期免疫系統發育不成熟也是重要的發病因素[2]。中醫對濕疹的外治法是根據皮損的性質和發病部位的不同，選擇適當的藥物和劑型，進行外洗、濕敷、涂抹、噴霧、熏洗或坐浴的方法，具有療效好、作用直接、療程短、副反應小的優勢[3]，可緩解臨床癥狀，有效改善皮損，避免了外用激素的不良反應，并在一定程度上可控制疾病復發，故越來越受到重視。本文采用DNFB誘導小鼠遲發性超敏反應及特異性皮炎模型，考察4種云南某中醫館處方、民族民間驗方及自擬外用方劑對嬰幼兒濕疹的影響，以期為臨床應用及進一步開發提供科學依據。

1 材料

1.1 實驗動物 雄性ICR小鼠，5～8周齡，體重18～26 g，成都達碩實驗動物有限公司，SCXK(川)2015-030。

1.2 試劑 2,4-二硝基氟苯(DNFB，批號：F20120726，中國醫藥集團上海化學試劑公司)；橄欖油(批號：20160912，國藥集團化學試劑有限公司)；丙酮(批號：20160626，天津市富宇精細化工有限公司)。

1.3 受試藥品 皮炎平(復方醋酸地塞米松乳膏，批號：1706004H，華潤三九醫藥股份有限公司)；兒膚康搽劑(批號：170807，成都森科制藥有限公司)。方劑1(1#)由顯齒蛇葡萄、桑白皮及三七組成。方劑2(2#)由顯齒蛇葡萄、桑白皮及全蝎組成。方劑3(3#)由白鮮皮、紫草及全蝎組成。方劑4(4#)由顯齒蛇葡萄、白鮮皮、紫草、桑白皮、三七及全蝎組成。取各處方藥材，分別加水煎煮三次，合并濾液濃縮至含生藥濃度依次為0.84、0.80、0.80、1.04 g/mL，于4～8 ℃冷藏備用。

1.4 儀器 HX602Z電子天平(慈溪市大東衡器廠)；ADVENURERTM電子天平(奧豪斯儀器(上海)有限公司)；10～100 μL移液器(Eppendorf)；8 mm打孔器、剪刀、眼科彎鑷、止血鉗等。

2 方法

2.1 DNFB致小鼠遲發型超敏反應[4]選18～20 g雄性小鼠，試驗前背部脫毛。除隨機抽取10只為正常對照外，其余造模動物均于腹部涂抹2% DNFB致敏，次日再加強1次。將模型動物隨機分為11組，于2次致敏后4 h開始于背部脫毛區及雙耳內外涂布給藥。正常和模型對照組給予純水(背0.5 mL、每耳50 μL)，化藥對照組給予皮炎平(背10 mg、每耳5 mg)，中藥對照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑(背0.5 mL、每耳50 μL)，各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液(背0.5 mL、每耳50 μL)；每日2次，連續7 d。致敏第7 d，末次給藥后30 min，各小鼠用0.5% DNFB丙酮橄欖油溶液30 μL涂抹右耳內外兩側進行激發，左耳涂等量混合基質為對照。激發后24 h脫頸椎處死動物，剪下雙耳，以直徑8 mm打孔器取雙耳片稱重，計算腫脹度即遲發性超敏反應值，并摘取胸腺、脾臟稱重，計算脾臟和胸腺系數。結果見表1。

2.2 DNFB致小鼠特異性皮炎模型[5]選用23～26 g雄性小鼠，實驗前日腹部剪毛、背部脫毛約2×3 cm2。除隨機抽取 11只為空白對照組外，其余動物致敏及分組情況同上。各模型組動物于致敏后第 5、8 天在背部脫毛區涂抹0.5% DNFB混合液50 μL誘發皮炎，并于首次激發后4 h開始于背部脫毛區涂藥：空白和模型對照組給予純水0.5 mL/只，化藥對照組給予皮炎平背10 mg、每耳5 mg，中藥對照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑背0.5mL，每耳50 μL，各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液背0.5mL，每耳50 μL；每天給藥2次，連續7 d。第8天于脫毛部位及雙耳進行第8次給藥，1 h后用0.5%DNFB溶液30 μL涂抹右耳激發，左耳涂抹等量溶媒為對照，6 h后右耳再涂藥1次。激發后24 h，脫頸椎處死小鼠，取雙耳稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度指標；剖取胸腺和脾臟稱重，計算臟器系數；并取各組動物的背部皮膚進行組織病理學檢查。結果見表2及圖1。

3 結果

3.1 對DNFB致小鼠遲發型超敏反應的影響 與模型組相比，各給藥組連續局部涂藥7 d，均可明顯抑制DNFB誘導小鼠的耳腫脹(P<0.05，P<0.01)，明顯降低脾臟系數(P<0.05,P<0.01)，但對胸腺系數僅有降低趨勢而無統計學意義。詳見表1。

3.2 對DNFB致特異性皮炎小鼠的影響 與模型組相比，各給藥組連續局部涂藥8 d，均可顯著抑制DNFB誘導小鼠的耳腫脹(P<0.05，P<0.01)，明顯降低脾臟系數(P<0.05，P<0.01)，不同程度降低胸腺系數。詳見表2。

表1 對DNFB致小鼠遲發性超敏反應的影響

表2 對模型小鼠耳腫脹及免疫器官的影響

圖1 皮膚組織病理檢查結果圖

由圖1可見，對照組皮膚各層次正常，真皮層結締組織疏松，各附屬器及脂肪組織正常；模型組表皮明顯增厚，表皮突明顯延長，角化過度和角化不全，結締組織變致密，皮下組織見炎細胞浸潤；各給藥組表皮增厚程度及炎細胞浸潤有所減輕。

4 討論

濕疹病因復雜，現代醫學對于本病的具體病因并不明確，認為遲發型變態反應與此病的發病機制密切相關[6]。嬰兒濕疹是特應性皮炎在嬰兒期的表現，西醫至今尚無理想根治手段，臨床一般以抗組胺、糖皮質激素、非特異性脫敏等治療為主，但療效并不理想，且長期使用不良反應較多[7]。基于對西醫治療的安全性考慮，多數家長更傾向于采用中藥外用制劑治療嬰幼兒濕疹，而目前臨床應用的方劑大多缺乏科學評價依據和規范的臨床總結，一定程度上限制了中醫藥優勢的發揮。本文采用DNFB誘導小鼠遲發性超敏反應及特異性皮炎模型，驗證了4種外用嬰幼兒濕疹方劑的藥效學基礎，為臨床推廣應用提供了試驗依據。