不同分級慢性阻塞性肺疾病患者調節性T細胞核轉錄因子叉頭狀轉錄因子3表達水平及與炎性因子相關性研究

宋貝貝 武思羽 敬增 葉麗云 曹敬 劉新秀

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是臨床常見的一種呼吸系統疾病，表現為患者的氣流阻塞為特征的支氣管氣流受限的一類慢性疾病，吸煙是最為常見的相關危險因素之一[1,2]。患者發病后表現為不同程度的胸悶、氣促、氣短、咳嗽以及咳痰等臨床表現，病情加重時可明顯影響患者的肺功能，降低患者的生活質量，甚至危及患者的生命[3]。目前，對于COPD的具體發病機制尚未完全明確，現有的研究表明COPD的發病主要與機體炎性反應、免疫系統功能紊亂等有一定的關聯。全身或呼吸系統中局部的免疫系統功能障礙介導炎性反應均會加重患者呼吸道受感染的概率，同時還可在一定程度上增加患者的疾病進程，甚至可直接誘導病情惡化，促使患者死亡，因此COPD患者的免疫應答作用以及免疫活性調節在其發病中占有重要地位[4,5]。正常情況下，機體的免疫反應主要受T細胞亞群的參與，在T細胞免疫中緊密相關的是調節性T細胞。叉頭狀轉錄因子3(Forked transcription factor 3,Foxp3)則是表達在CD4+調節性T細胞核轉錄因子上的重要標記物。當前對于COPD患者調節性T細胞及標記物Foxp3的研究鮮有報道[6,7]。為此，在本研究中嘗試對COPD患者Foxp3表達及炎性因子水平的檢測，以初步探討COPD患者的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2017年1月來院就診的120例COPD患者納入觀察組，其中男64例，女56例；年齡45～78歲，平均年齡(58.23±8.28)歲。按照病情嚴重程度分為COPD 1～2級組53例、COPD 3～4級組67例，并選擇同期在我院進行健康體檢的健康志愿者50例為對照組，受試者各項生命體征指標正常，無COPD疾病史，其中男26例，女24例；年齡43～75歲，平均年齡(56.29±9.21)歲。2組受試者間性別比、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。2組受試者對研究內容知情同意簽署知情同意書，研究方案經醫院倫理學委員會批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①患者經診斷確診為COPD，所有患者均符合中華醫學會呼吸病學會制定《慢性阻塞性肺疾病診斷指南》(2013版)中相關診斷標準[8]；②所有患者肺功能指標第1秒用力呼吸容積和用力肺活量比值≤70%；③患者入組前未服用相關治療藥物影響本研究檢測指標結果的判斷；④患者自愿加入本研究，并完成隨訪工作。

1.2.2 排除標準：①患者合并全身其他部分的炎性反應；②合并肝腎功能及凝血功能嚴重障礙者；③合并自身免疫系統疾病者、其他呼吸系統疾病患者；④精神狀態異常患者、隨訪期間脫落的患者。

1.3 檢查方法 觀察組患者和對照組受試者在入院當天采集空腹靜脈血約3 ml，加入到含有肝素的抗凝管中，以TDZ5-BP型高速離心機(長沙湘銳離心機有限公司)進行離心分離，轉速3 000 r/min、離心半徑10 cm、離心10 min得血清和血漿樣本，采用顆粒增強免疫透射比濁法測定患者血清C-反應蛋白(C-reactive protein,CRP)水平，采用酶聯免疫吸附法測定患者血清Foxp3蛋白、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平，取離心后血漿采用化學發光微粒子免疫檢測法測量患者血漿B型腦尿鈉肽(B-type Natriuretic peptide,BNP)水平。

1.4 評價方法 對觀察組患者和對照組受試者的Foxp3水平、炎性因子指標(包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP)水平進行統計對比。將觀察組患者按照COPD病情分級程度分組，分為COPD 1～2級組共53例患者、COPD 3～4級組共67例患者，對2組患者的Foxp3、CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平進行統計比較。最后，采用Pearson檢驗對COPD患者的Foxp3水平與炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平相關性進行分析 探討。

2 結果

2.1 觀察組與對照組各項指標比較 觀察組Foxp3水平低于對照組，炎性因子包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于對照組，組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對照組各項指標比較

2.2 COPD 1～2級組與COPD 3～4級組指標比較 COPD 3～4級組患者Foxp3水平低于COPD 1～2級組，而CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于COPD 1～2級組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 COPD 1～2級組與COPD 3～4級組各項指標比較

2.3 相關性分析 經Pearson相關性檢驗，Foxp3水平與CRP、IL-6、TNF-α、BNP呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 Foxp3與CRP、IL-6、TNF-α、BNP相關性分析

3 討論

在本研究中，對COPD患者和健康受試者的Foxp3蛋白和炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平進行檢測比較，結果顯示觀察組患者的Foxp3水平低于對照組，炎性因子包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于對照組，表明Foxp3蛋白、炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP等參與了COPD疾病的發生過程。這是因為Foxp3蛋白為T淋巴細胞亞群的特異性標記物，其水平的變化直接反映了患者體內免疫功能狀態的變化，當其水平降低時提示機體T淋巴細胞亞群，尤其是CD4+處于較低的水平，T細胞免疫水平低下[13,14]。CRP在機體受到感染或組織損傷時血漿中一些急劇上升的蛋白質，當其在體內水平上升時提示患者處于炎性反應過程[15]。IL-6則是活化T細胞和成纖維細胞產生的淋巴因子，其在機體內水平升高能夠激活中性粒細胞釋放大量的氧化自由基類物質，引起患者的肺部氣道組織的損傷[16]。TNF-α是由單核巨噬細胞產生的，在機體的全身炎性因子中發揮關鍵作用[17]。BNP為多個氨基酸組成的血管活性肽物質，當其水平升高時可刺激肺部血管的循環狀態的改變，收縮肺部血管和氣道平滑肌，誘發患者的氣流受限[18]。在進一步對不同病情分級患者比較中，COPD3～4級組患者Foxp3水平低于COPD1～2級組，而CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于COPD1～2級組，表明各項細胞因子隨著患者病情的變化而在數值上呈現規律性的改變。在相關性分析中，Foxp3水平與CRP、IL-6、TNF-α、BNP呈負相關性，表明Foxp3、CRP、IL-6、TNF-α、BNP均參與到COPD患者的病情發生發展過程，且免疫功能、炎性反應均在COPD病情進展中發揮重要作用，免疫功能的降低可能是COPD發病的一個重要原因，Foxp3可作為COPD發病的保護性因素。

綜上所述，在COPD患者體內調節性T細胞核轉錄因子Foxp3的表達水平有降低趨勢，并隨著患者病情分級加重而進一步降低，且Foxp3與炎性因子水平呈負相關性，通過對COPD患者Foxp3、炎性因子水平監測，對于疾病的臨床治療評估有一定的指導作用。