XRCC1 TYMS MTHFR基因多態(tài)性與結(jié)腸癌術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系

趙 帥， 陳 靜， 閆海洋， 郭 英， 孫靜娜， 耿玉蘭， 劉佳佳

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗中心， 河北 石家莊 050031)

結(jié)腸癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的惡性腫瘤疾病，嚴重威脅著患者的生命健康[1]。因此，安全有效治療方法對提高或改善結(jié)腸癌患者生存期和生活質(zhì)量至關(guān)重要。由MOSAIC所構(gòu)建的FOLFOX4方案被認為是當前用在Ⅱ、Ⅲ期結(jié)腸癌術(shù)后的有效輔助化療方案之一，且以6個周期的治療為主。然而結(jié)腸癌對化療產(chǎn)生耐藥性的風險較高，通過利用有效的預(yù)測療效的分子標記物進行相關(guān)研究具有重要意義[2]。本文通過對XRCC1、TYMS、MTHFR基因多態(tài)性進行分析，探討其與結(jié)腸癌術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系，一方面打破了單一基因多態(tài)性研究的局限性，另一方面確保了基因?qū)蛐暂^強的結(jié)腸癌個體化藥物治療更加精確，為療效評估及預(yù)后判斷提供可靠依據(jù)。現(xiàn)結(jié)果報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析我院自2018年5月至2020年1月收治的手術(shù)治療結(jié)束后接受6個周期FOLFOX4輔助化療患者104例的臨床資料，其中男54例，女50例，年齡46～71歲，平均(59.25±3.14)歲，TNM分期：Ⅱ期32例，Ⅲ期72例，病變部位：近端結(jié)腸61例，遠端結(jié)腸43例，腸壁浸潤深度：黏膜8例，肌層22例，漿膜45例，漿膜外29例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例。納入標準：全部患者均在我院行臨床癥狀、體征以及病理學(xué)檢查后確診，符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[3]中診斷標準；具有能夠測量的實體病灶；進入研究前尚未接受過姑息性治療或者距本次疾病復(fù)發(fā)時間在6個月以上；KPS評分≥60分；預(yù)計生存期≥3個月；均本次實驗知情權(quán)同意書。排除標準：仍然有生育計劃、或者正在哺乳的女性；對本次輔助化療藥物存在既往過敏史者；存在中樞或者外周神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙者；合并腸梗阻或者腸功能不全者；合并既往良惡性腫瘤性史者；合并其他重要臟器功能障礙或者損傷者；尚未完成個周期的FOLFOX4輔助化療患者；臨床資料缺失者。

1.2方法:全部患者均接受了6個周期FOLFOX4輔助化療，每個周期的化療藥物組成情況如下：葉酸鈣(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字H32022390)，靜脈滴注，2h，注射劑量200mg/m2，D1、2；氟尿嘧啶(北京紫竹藥業(yè)有限公司，國藥準字H11020069)，靜脈推注，注射劑量400mg/m2，D1、2；氟尿嘧啶，持續(xù)靜脈滴注2h，注射劑量600mg/m2；奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字H20050962)，靜脈滴注，注射劑量85mg/m2，D1與亞葉酸鈣同時滴入。以連續(xù)治療2周為1個周期，排除無法耐受的毒性反應(yīng)，或者以及出現(xiàn)疾病進展，全部患者均完成了6個周期治療。

1.3療效評價標準:治療后判斷隨訪2年無病生存率并將其作為療效評價標準。全部患者的腫瘤組織標本均提取了DNA，并對XRCC1、TYMS、MTHFR基因型進行檢測，該檢測方法所涉及的熒光染色原為雜交測序試劑由北京華夏時代基因科技發(fā)展公司提供。采用TL998A型熒光染色原位雜交測序檢驗系統(tǒng)對基因型進行檢測，在檢測時需要直接讀取血液白細胞當中的目標單核苷酸多態(tài)位點[4]。具體操作方法：抽取全部患者2mL的靜脈血，并將其放置在EDTA抗凝管當中，上下顛倒混勻之后，再取100μL之前配置好的NH4Cl預(yù)處理液，并將其放置在離心管當中，進行離心處理，離心速度為每分鐘3000轉(zhuǎn)，共離心5min。將多余液體吸出之后，向其中加入1mL的生理鹽水以此徹底的重懸白細胞，之后在室溫環(huán)境下再次進行離心處理，離心速度為每分鐘3000轉(zhuǎn)，共離心5min。將殘余下來的液體吸干凈之后，向著富集有白細胞的離心管理中加入100μL的PHARM-GENE 01 SNP 分析保存液，使用移液器對其反復(fù)吹待混勻之后，直至無團塊狀，在室內(nèi)溫度下安靜放置20至30min[5]。各自選取1μL之后，在經(jīng)過上述流程處理后的白細胞樣本，分別加入到XRCC1、TYMS、MTHFR PHARM-GENE 200 SNP 分析樣品處理，在震蕩搖勻之后，在進行短暫離心處理[6]。將待檢測的樣品放置在相應(yīng)的位置上，之后放置在實時熒光檢測儀當中，選擇不同基因型之后在進行檢測。

2 結(jié) 果

XRCC1、TYMS、MTHFR基因型分布中分別以G/A基因型、2R/3R基因型、T/C基因型為主，明顯高于其他基因類型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表1； XRCC1基因型分布為G/A者，其隨訪2年內(nèi)復(fù)發(fā)率明顯高于G/G基因型、A/A基因型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表2；行COX模型單因素分析結(jié)果顯示，TNM分期、腸壁浸潤、XRCC1與結(jié)腸癌術(shù)后FOLFOX4輔助化療具有相關(guān)性(P<0.05)，詳見表3；將COX模型單因素分析結(jié)果有明顯差異的單因素納入到多因素模型中，XRCC1基因多態(tài)性與結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療后2年內(nèi)無病生存率造成直接影響(P<0.05)，詳見表4。

表1 XRCC1 TYMS MTHFR基因型分布

表2 XRCC1 TYMS MTHFR基因突變與復(fù)發(fā)的關(guān)系

表3 結(jié)腸癌術(shù)后FOLFOX4輔助化療相關(guān)因素COX模型單因素分析

表4 結(jié)腸癌術(shù)后FOLFOX4輔助化療相關(guān)因素的COX模型多因素分析

3 討 論

結(jié)腸癌作為臨床上一類較為常見的惡性腫瘤疾病，時刻威脅著患者的生命安全。因此，采取積極有效的方法對其治療至關(guān)重要[7]。在當前臨床工作中，多主張對患者的遺傳背景進行分析，根據(jù)其基因型選擇有效的治療方案。結(jié)合既往報道發(fā)現(xiàn)，細胞膜轉(zhuǎn)運過度蛋白表達、DNA相關(guān)修復(fù)、解毒等被認為是導(dǎo)致惡性腫瘤性疾病化療耐藥的重要機制，其發(fā)生發(fā)展與抑癌基因、原癌基因的抑制以及激活過程具有密切的相關(guān)性[8]。

在近年來的研究中，也開始有越來越多的能夠預(yù)測結(jié)腸癌生存及復(fù)發(fā)的分子標記物進入到了臨床研究工作中，較為常見的包括了XRCC1、TYMS、MTHFR等，不過在實際臨床工作中，由于相關(guān)研究較為復(fù)雜，多推崇進行多個療效標志物的分析及判斷，更具有較高的臨床意義，旨在更好的幫助結(jié)腸癌患者獲得個性化的治療并獲得可靠的療效及預(yù)后[9]。MTHFR被認為是葉酸代謝的一類關(guān)鍵酶，其作用機制在于能夠促使5，10-亞甲基四氫葉酸還原成為5-甲基四氫葉酸，并由此產(chǎn)生一個甲基基團。甲基基團被認為是dMTP合成過程當中的一個必須的過程及原料，且與5-氟脲類藥物在患者體內(nèi)的代謝存在明顯的相關(guān)性[10]。由此可以認為，MTHFR與5-氟尿嘧啶化療療效具有密切的相關(guān)性，由此在本次研究中，未能顯示出MTHFR基因多態(tài)性與結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療后療效的相關(guān)性。XRCC1作為哺乳動物DNA修復(fù)系統(tǒng)當中的一個重要的基因，其作用機制在于可幫助修復(fù)單鏈DNA與堿基之間的切除途徑以達到修復(fù)損傷DNA的目的，在穩(wěn)定個體遺傳性方面存在較高的作用。有臨床資料顯示，XRCC1基因多態(tài)性與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及復(fù)發(fā)風險之間也具有著密切的相關(guān)性[11]。在本次研究中，經(jīng)過COX單因素及多因素分析可見，XRCC1基因多態(tài)性與結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療后2年內(nèi)的復(fù)發(fā)具有明確的相關(guān)性。而TYMS作為一種可在DNA合成、復(fù)制以及修復(fù)當中起到關(guān)鍵性的基因，有臨床資料顯示，TYMS基因型在人群當中表現(xiàn)出了明顯的多態(tài)性，且這種多態(tài)性多跟隨著基因的多態(tài)性及位點發(fā)生相應(yīng)的變化。另外，在研究中我們發(fā)現(xiàn)，TYMS基因多態(tài)性可對患者化療藥物敏感性、毒性反應(yīng)甚至是遠期生存率帶來直接的影響。在本次研究中，尚未發(fā)現(xiàn)TYMS基因多態(tài)性與與結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療效果的關(guān)系。綜合本次結(jié)果也從側(cè)面證實了XRCC1基因多態(tài)性在預(yù)測療效上的可靠作用優(yōu)勢。

綜上所述，XRCC1基因多態(tài)性與結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療后2年內(nèi)無病生存率造成直接影響，二者具有直接相關(guān)性，通過對XRCC1基因多態(tài)性進行檢測可作為預(yù)測Ⅱ、Ⅲ期結(jié)腸癌術(shù)后行FOLFOX4輔助化療療效的可靠指標。