β2-MG miR-182 BUN在老年慢性腎功能衰竭中的表達及相關性研究

孫 瑤， 孫 琨

(山東省淄博市中心醫院, 山東 淄博 255000)

慢性腎功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是一種慢性腎臟系統疾病，早期發病較為隱匿，隨時間延長，腎功能進行性增加損害，引起一系列并發癥，對患者生命健康安全產生嚴重威脅[1,2]。如果CRF患者病情未能得到有效控制，會發展為終末期腎病，因此需要尋找有效的指標，早期進行正確診斷預測[3]。血清β2-微量球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是反映腎功能早期損傷的蛋白，當腎臟發生損傷時，血清β2-MG水平升高，是反映腎臟損傷中的靈敏指標。微小RNAs(microRNAs，miRNAs)可以調控基因的表達，miR-182是近年來發現的一種微小RNA，已有報道表明miR-182在多種惡性腫瘤組織中存在異常表達[4]。目前尚未有研究報道miR-182在CRF中的表達情況。血尿素氮(Blood ureanitrogen，BUN)常用于檢查排尿功能是否正常[5]。臨床作為反映腎功能的常用指標，在反映腎衰竭方面更為敏感臨床上尚未有研究探討β2-MG、miR-182、BUN聯合檢測在CRF中的應用及其三者間的相關性[6]。鑒于此，本研究檢測β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性腎衰竭患者中的表達，分析三者相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取在我院接受治療的43例慢性腎功能衰竭患者于2019年3月至2020年12月，作為研究組，年齡60-78歲，男25例，女18例，病程3-12年；選取同時期于我院進行健康體檢的正常人43例，作為對照組，其中男24例，女19例，年齡61-78歲，兩組受試者年齡、性別等一般資料比較無統計學差異(P>0.05)，研究組胱抑素C(Cystatin C,CYSC)、血清肌酐(serum creatinine，Scr)、視黃醇結合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)表達均高于對照組(P<0.05)。納入標準：所有患者均符合CRF診斷標準，腎小球濾過率(Glomerularfiltration rate，eGFR)32～92mL/min；腎小球濾過率大于70mL/min/1.73m2為早期，小于70mL/min/1.73m2為非早期，所有受試者均知情，簽署知情同意書，經我院倫理會批準通過。排除標準：患有嚴重的心腦血管、肝、腎等疾病的患者；精神異常者；患有感染性疾病者；接受過透析治療者。見表1。

表1 臨床基線資料

1.2檢測指標

1.2.1標本采集:采集5mL肘靜脈血液于所有受試者入組后次日清晨空腹抽取，3000r/min離心10min，離心半徑10cm，分離血清，置于-80℃冰箱保存待檢。

1.2.2β2-MG、BUN檢測:應用免疫比濁法測定血清β2-MG、BUN水平，檢測儀器為Roche 8000全自動生化分析儀(德國Roche公司)，嚴格按照試劑盒說明書進行具體步驟操作。

1.2.3miR-182表達:miR-182表達情況應用熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)技術檢測。提取血漿總RNA，測定RNA濃度，進行qRT-PCR反應。合成cDNA，稀釋10倍。分別使用目的基因miR-182及內參基因U6的特異性引物，引物序列：miR-182引物上游:5'-ACTACTTCGACTGAGACACG-3'，下游:5'-GTCTGCATGCTGTCCTTG-3'。采用386孔板20μL體系。50℃ 2min，1個循環；95℃ 10min，1個循環；95℃ 15s、60℃ 30s、72℃ 30s，40個循環；72℃ 10min，1個循環。以U6為內參，采用2-ΔΔCt法進行miR-182的相對定量。

1.2.4CYSC、Scr、RBP 檢測:應用酶聯免疫吸附測定法測定CYSC、Scr、RBP水平，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，嚴格按照說明書操作。

2 結 果

2.1β2-MG、miR-182、BUN表達在各組中比較:研究組血清β2-MG、miR-182、BUN表達水平均高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 β2-MG miR-182 BUN表達在各組中比較

2.2β2-MG、miR-182、BUN三者相關性：研究組患者血清β2-MG與miR-182之間呈正相關(r=0.695，P=0.001)；血清β2-MG與BUN之間呈正相關(r=0.733，P=0.001)；血清miR-182與BUN之間呈正相關(r=0.778，P=0.001)(P<0.05)。見圖1。

圖1 β2-MG、miR-182、BUN三者相關性

2.3研究組疾病不同病理分期β2-MG、miR-182、BUN水平變化：研究組早期患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平高于非早期患者(P<0.05)。見表3。

表3 研究組疾病不同病理分期β2-MG miR-182 BUN水平變化

2.4β2-MG、miR-182、BUN表達與老年慢性腎功能衰竭病理特征關系：患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平與性別無關(P>0.05)，與年齡、少尿、水腫、大量尿蛋白有關(P<0.05)。年齡≥65歲、少尿、水腫、大量尿蛋白患者β2-MG、miR-182、BUN表達水平較高(P<0.05)。見表4。

表4 β2-MG miR-182 BUN表達與老年慢性腎功能衰竭病理特征關系

2.5β2-MG、miR-182、BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價值:ROC分析β2-MG、miR-182、BUN診斷老年慢性腎功能衰竭靈敏度低于三項聯合，具有統計學差異(P<0.05)。三項聯合檢測對老年慢性腎功能衰竭患者診斷效能較高(P<0.05)。見表5、圖2。

表5 β2-MG miR-182 BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價值

圖2 β2-MG、miR-182、BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價值

3 討 論

CRF的特點是為尿液中肌酐和含氮廢物的濃度出現可逆性增加，并且不能通過腎臟合理調節體液和電解質平衡，病理機制比較多變，因此，對于早期診斷CRF并預防并發癥具有深遠意義[7]。

β2-MG為單鏈多肽，屬于組織相容性白細胞抗原的輕鏈或β鏈，可以自由通過腎小球濾過膜，腎小管被幾乎全部重吸收并降解在近端。目前，臨床上β2-MG在腎功能減退、自身免疫疾病、惡性腫瘤等中廣泛應用于診斷，且診斷價值較好[8]。徐月霞等[9]的研究發現，β2-MG水平在CRF的病情發展中有一定的變化規律。miR-182屬于miR-183/96/182簇的一員，對生物體的生長、分化、發育有著重要調控作用，可通過調節不同的靶mRNA，在腫瘤的形成和發展中發揮重要作用。近年研究[10]顯示，miR-182在糖、脂代謝方面發揮著重要調控作用，若miR-182表達的紊亂，可能會導致代謝相關疾病的發生。BUN在臨床中作為評估腎臟功能指標，其在反應腎功能衰竭方面十分敏感。其升高多見于高蛋白飲食、高分解代謝狀態、缺水、腎缺血、血容量不足及各種腎功能衰竭的情況，特別是伴有血肌酐升高的時候。腎功能不全時，循環和組織中所潴留的具有毒性作用的物質為尿毒素，與腎臟疾病的進展和腎功能的衰退均密切相關。正常人體內，BUN表達水平較低，當患者腎功能發生損害時，BUN表達水平升高明顯，加劇疾病的發生進展[11]。

基于此，本研究對β2-MG、miR-182和BUN在CRF患者血清中的表達意義展開研究。研究結果發現，在老年慢性腎功能衰竭患者血清中β2-MG、miR-182和BUN的表達均顯著升高，且隨著疾病的加重，其相對水平也逐漸升高。相比一般患者，當患者年齡≥65歲或具有少尿、水腫、大量尿蛋白等癥狀時，血清β2-MG、miR-182和BUN的增高會更加顯著。相關性分析的結果進一步說明，三者的表達水平之間呈正相關，說明其在CRF中具有一定的關聯性，可能進行聯合檢測來對CRF進行早期診斷篩查。

因此，本研究進一步探索不同時期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN的表達，以及三者聯合相較于單一檢測的靈敏度。結果發現，早期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN水平顯著高于非早期患者，該結果說明β2-MG、miR-182和BUN的高表達能及早反映腎功能的損害，對CRF的早期預測、診斷和治療有著重要意義，與現有研究結果[12]一致。ROC分析結果顯示，三者聯合檢測診斷對老年慢性腎功能衰竭的靈敏度和準確度均顯著高于單一檢測，而特異度降低，說明β2-MG、miR-182和BUN可以進行組合，來更好的在早期對CRF患者進行診斷。

綜上所述，β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性腎功能衰竭中呈現高表達，三者之間具有正相關性，β2-MG、miR-182、BUN聯合檢測對于老年慢性腎功能衰竭的診斷價值較高，對預后較為重要，可為臨床診斷和治療CRF提供新的思路和理論依據。本文不足之處在于病例數較少，結果存在一定的局限性，今后仍需要進一步研究證實研究結論。