飼糧中添加牛至香酚對泰迪犬血清免疫、抗氧化及糞便菌群的影響

王 莎 唐愛民 冀少波

（華興寵物食品有限公司，河北 邢臺 054000）

抗菌素耐藥性的出現是人類和動物面臨的一個重大世界性醫學問題。據報告，這一全球性問題每年造成約70 萬人死亡，預計到2050 年將增加到1 000 萬人，代價將超過450 萬億元。長期以來，抗生素一直被用于家禽飼料中，以減少或預防孵后腹瀉等一系列疾病，提高家禽的生長和生產力，并提高家禽業的整體產量。各種不同來源的飼料添加劑，如有機酸、芳香植物精油、硅酸鹽礦物等，經常被提出作為首選劑。牛至香酚預混劑是通過蒸餾提取工藝生產的飼料添加劑，具有特殊的芳香氣味和抗菌、抗氧化、助消化功效，可以作為一種綠色、天然、高效的植物源性添加劑用于動物生產中[1]。大量試驗研究表明，植物精油在增強動物機體免疫、發揮抗氧化特性、抗菌性、提高營養物質消化并誘導有益菌的生長等方面發揮著重要作用[2]。在飼料禁抗的情況下探索綠色、安全、高效的添加劑來改善寵物的健康和生活質量。我們假設犬食用含有牛至香酚的飼糧會改善抗氧化、抗炎等的效果，類似于提高雞和羊健康的效果。因此本試驗目的是食用這種含牛至香酚的飼料是否會改善犬的健康并減少糞便細菌數量，旨在為植物精油在泰迪犬中的應用提供技術支持。

1 材料

1.1 實驗設計

1.2 試驗動物：選用40 只發育良好，平均體重為（2.5±0.2）kg 的12 月齡的健康泰迪成年犬。分為4 組，分別飼喂在基礎飼糧中添加0（對照組）、0.1（I 組）、0.2（Ⅱ組）、0.4%（Ⅲ組） 牛至香酚的試驗飼糧。牛至香酚添加劑成分≥10%，自購山東某公司，依據成犬AAFCO 營養標準需要，設計以干物質計各個營養水平分別為粗蛋白質26%，粗脂肪18%，粗灰分6%，粗纖維2.5%，鈣1.2%，總磷1%，賴氨酸1.4%；試驗期60 天。

1.2 飼養管理

試驗犬隨機分4 組，飼養于同一動物舍，由專人采取相同的飼養管理方式，單籠飼養。試驗前進行驅蟲，并按常規免疫注射疫苗，試驗預飼期7 天，正試期60 天。每天飼喂2 次，投料時間為早上8∶00，下午4∶00 定時飼喂，自由飲水，每天打掃舍內衛生，清理籠內糞便，每隔2 天用高壓水槍沖洗整個圈舍，保持舍內干凈衛生，且控制好溫度、濕度及通風良好。

1.3 血液指標的測定

正式試驗期結束時，清晨空腹用針或注射器對動物進行物理約束后進行頸靜脈穿刺采血，血液被放置在含有EDTA 的試管中，并被冷藏在裝有冰的聚苯乙烯盒子中，直到到達實驗室，并使用離心機3 000 r/min，離心5 min 或將血清分裝于1.5 mlRP 管，于-20 ℃存放，用于測定血清免疫和抗氧化指標。

采用酶聯免疫吸附測定法測定血清免疫（免疫球蛋白G，免疫球蛋白M，免疫球蛋白A）和抗氧化指標（總抗氧化能力、丙二醛含量）。上述指標測定所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 糞便菌群測定

試驗結束時，對每個動物進行采集新鮮糞便，共計40 個糞樣。裝于50 mL 無菌離心管中，放置于冰盒中，運回實驗室后立即處理，用于測定糞便菌群數量。

稱一克糞便，用9 mL 緩沖蛋白胨水稀釋糞便。然后，1 毫升105稀釋液進行接種。采用平板瓊脂菌落計數法測定糞樣的細菌總數量。其中，乳酸桿菌用改良MRS 培養基、大腸桿菌用伊紅美藍培養基、37 ℃培養48 小時后進行菌落計數。菌群數量結果表示為菌落/g (CFU/g)。

1.5 數據分析

用Mircosoft Excel 進行數據錄入，SPSS22.0軟件進行單因素方差分析，用Duncan 法進行多重比較。結果用平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 牛至香酚對泰迪血清免疫及抗氧化功能的影響

飼糧中添加牛至香酚對泰迪犬血清中免疫及抗氧化指標的影響，見表1。

表1 牛至香酚對泰迪犬血清中免疫及抗氧化指標的影響

從表3 可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組泰迪犬血清中的總抗氧化含量顯著高于對照組（P＜0.05）；Ⅰ組、Ⅱ組泰迪犬血清中的丙二醛（MDA）含量顯著低于對照組（P＜0.05）；Ⅱ組、Ⅲ組泰迪犬血清中免疫球蛋白G（IgG） 含量顯著高于對照組（P＜0.05）。

2.2 牛至香酚對泰迪犬糞便菌群數量的影響

飼糧中添加牛至香酚對泰迪犬糞便菌群數量的影響，見表2。

表2 牛至香酚對泰迪犬糞便菌群數量的影響（CFU/g）

從表4 可以看出，Ⅲ組泰迪犬糞便中的細菌菌總數顯著高于對照組（P＜0.05）；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組犬糞便中的大腸桿菌的數量顯著低于對照組（P＜0.05）；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組泰迪犬糞便中的乳酸桿菌顯著高于對照組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 飼糧中添加牛至香酚對泰迪犬血清免疫和抗氧化的影響

研究發現對其他動物物種的精油試驗中，可以明顯提高免疫細胞(主要是淋巴細胞)和改善疾病反應的球蛋白增加[3][4]。免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M 是機體內重要的非特異免疫因子，他們是由動物免疫系統淋巴細胞產生的蛋白質，經過一系列的轉化可以轉化為抗體。這三者可以代表血清中的免疫球蛋白的整體水平。植物精油內部含有能顯著提高白細胞吞噬力的酚類物質，增加了免疫球蛋白的釋放量，通過調節細胞因子的表達，提高血清中抗體的表達，增強了動物機體的免疫能力[5]。在魚飼料中添加百里香對魚的淋巴細胞增殖和免疫功能有積極的影響，釋放IgA 和IgM 免疫球蛋白進入血液循環[6]。

本實驗中增加牛至香酚后不同程度上增加了血液中的球蛋白水平，免疫球蛋白(γ 球蛋白)主要由激活的B 淋巴細胞在刺激下產生，以抗原為介導，中和并消除抗原[7][8]。然后動物機體的免疫與抗氧化系統是相輔相成的，其中AOC 是一個全面反映皮膚組織抗氧化能力的良好指標。MDA是生物體內過氧化脂質的代謝產物，其含量的高低可反映組織細胞受自由基損傷的程度。植物精油具有很強的抗氧化作用，主要分為兩種：直接機制和間接機制，直接機制是針對自由基而言，有清除或抑制作用；間接機制是針對動物體內的脂質過氧化具有抑制作用。主要功能來自物質中的酚類物質，它可以與過氧自由基結合降低自由基的活性，可以與過渡金屬離子螯合阻斷生物氧化的過程，降低了金屬離子誘導自由基的生成，從而發揮其抗氧化的能力[9]。

3.2 飼糧中添加牛至香酚對泰迪犬糞便菌群數量的影響

一般情況下，飲食、衰老、藥物、壓力或感染的變化都會導致小腸中厭氧菌和大腸桿菌數量增加，結腸中大腸桿菌數量增加，雙歧桿菌數量減少。有研究確定了植物提取精油對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌細胞膜的滲透性發生改變導致死亡[10]。本試驗看出，在犬糧中添加牛至香酚對犬有積極改善的作用，減少了糞便的致病菌，減少對環境的污染。

植物精油在體外實驗中具有抗菌、抗真菌和抗病毒的作用[11]。類似的體內研究也發現精油對產氣莢膜桿菌、大腸桿菌或艾美耳球蟲等病原體有抑制作用[12]。

植物活性化合物與宿主生物的相互作用機制可能與抗氧化保護等腸道作用有關，或者主要與腸道菌群和腸道完整性有關的腸內作用有關。腸道結構、黏膜功能和細胞增殖可能受到飼料中的營養成分相互作用的影響，牛至香酚中具有代表性的化合物是香芹酚，香芹酚的作用方式與酚環上的羥基及其疏水性有關；香芹酚與細胞質膜的脂質雙分子層相互作用，導致細胞物質（如離子、三磷酸腺苷和核酸） 的完整性喪失和泄漏，其作用于與細菌能量代謝相關的生物合成機制，絕大多數為革蘭氏陰性菌[13]，且發現含有芳香族化合物(主要是香芹酚)的混合物在與酸化劑混合對腸道乳酸桿菌有促進作用[14][15]，增加了菌種數。然而也有報道植物精油對雞或者小豬的腸道或者糞便中的微生物菌種數及組成未發生改變[16][17]。

使用安全、綠色、高效的添加劑不但改善寵物的健康，預防寵物疾病，還可降低糞便的致病菌減少環境的污染，拉近人與寵物的親密關系。

4 結論

本試驗條件下，飼糧添加牛至香酚能夠提高犬機體的免疫功能、抗氧化功能，并且能改善犬的腸道菌群組成和腸道健康。添加高劑量的0.4%的牛至香酚更有利于泰迪犬的生長，促進健康。