化妝品中金黃色葡萄球菌能力驗證結果分析與討論

胡同靜 嚴婷 劉敏 易云蕾

【摘要】目的：通過參加外部組織的能力驗證達到考核內部技術人員微生物檢測能力，增強實驗室綜合競爭力。方法：2021年，本實驗室參加了由大連中食國實檢測技術有限公司組織和負責實施的《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定驗證計劃》。檢測依據為《化妝品安全技術規范》（2015年版）。結果：樣品169的鑒定結果為金黃色葡萄球菌陰性;樣品421的鑒定結果為金黃色葡萄球菌陰性;樣品579的鑒定結果為金黃色葡萄球菌陽性。結論：本次能力驗證活動的3個樣品檢驗均取得令人滿意的結果，同時達到了實驗室內部質控、人員考核、水平驗證的預期目的，也為應對日常檢測工作積累了寶貴的經驗。

【關鍵詞】能力驗證;金黃色葡萄球菌;化妝品;微生物檢驗

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2022.03.019

Analysis and Discussion on the Validation Results of Staphylococcus Aureus in Cosmetics

HU Tong-jing，YAN Ting，LIU Min，YI Yun-lei

（Nanjing Product Quality Supervision and Inspection Institute，Nanjing 210019，China）

Abstract：Objective：through participating in the ability verification of external organizations，the laboratory achieves the expectation of assessing the microbial detection ability of internal technicians and enhancing the comprehensive competitiveness of the laboratory. Methods：in 2021，our laboratory participated in the cfapa-1203 determination and validation plan for Staphylococcus aureus in cosmetics organized and implemented by Dalian ZhongshiGuoshi Detection Technology Co.，Ltd. The test basis is the Technical specification for safety of cosmetics（2015 Edition）. Results：the identification result of sample 169 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 421 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 579 was positive for Staphylococcus aureus. Conclusion：the three results of this capability verification activity have achieved satisfactory results，achieved the expected purpose of laboratory internal quality control，personnel assessment and level verification，and accumulated valuable experience for daily testing.

Key words：capability verification;Staphylococcus aureus;cosmetics;microbiological examination

金黃色葡萄球菌是自然界中廣泛存在的致病菌。革蘭氏陽性球菌，是微球菌科葡萄球菌屬的一個下屬種[1]，當空氣中氧分含量降低時易產生腸毒素，可能引起食物中毒的癥狀[2]。金黃色葡萄球菌也是常見的病原菌，可能引起化膿性炎癥。如果人發生感染，病原菌進入血液可造成肺炎、心包炎等內臟器官感染，嚴重的可引起敗血癥、膿毒血癥等全身感染[3]。

人們日常生活離不開化妝品，而化妝品又常與人體皮膚接觸，如果化妝品中檢出不明微生物，則存在引發皮膚發炎、過敏的風險。部分化妝品本身含水量高、營養豐富，容易發生微生物污染。被微生物污染的化妝品不僅會引起產品質量下降造成經濟損失，也可能會對消費者的健康造成威脅。《化妝品安全技術規范》（2015年版）中明確規定：化妝品中不得檢出金黃色葡萄球菌[4]。對化妝品中微生物的檢測是保障化妝品衛生安全的一個重要環節[5]。

能力驗證是一個實驗室技術能力的重要考核指標，與現場評審考核共同構成了能力評價體系[6-7]。通過能力驗證可以加強本實驗室的微生物檢測能力，提高檢驗人員的業務水平，也是實驗室內部質量控制的重要補充[8]。2021年，本實驗室參加了由大連中食國實檢測技術有限公司組織和負責實施的《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定驗證計劃》，通過對結果的評價考核本實驗室微生物檢測能力和檢驗人員業務能力，完成內部質控。

1材料與方法

能力驗證等同于日常檢測工作，每一步操作都應該在嚴格遵循能力驗證作業指導書和相應國標要求的基礎上，結合本實驗室質量手冊、內部SOP要求以及實驗人員相關工作經驗，仔細把控每一步操作細節來完成本次能力驗證，以期達到滿意結果和內部質量控制的要求。

1.1檢測依據

本次能力驗證全部依據《化妝品安全技術規范》（2015年版）中給出的金黃色葡萄球菌檢驗方法，結合本次《CFAPA- 1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定能力驗證計劃參試指導書》進行。

1.2檢測材料

1.2.1培養基及試劑

試驗中使用SCDLP液體培養基、甘露醇發酵培養基、Baird-Parker平板、營養肉湯培養基均購自北京陸橋微生物制劑有限公司;科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色瓊脂購自法國科馬嘉，以上均按產品標簽配制后使用;凍干血漿、血瓊脂平板均購自北京陸橋技術股份有限公司，按照使用說明直接使用成品;革蘭氏陽性菌GP鑒定卡（法國梅里埃生物公司）。

1.2.2標準菌株

按照國標要求，試驗中使用金黃色葡萄球菌ATCC6538 作為陽性對照，表皮葡萄球菌CMCC（B）26069作為陰性對照。

1.2.3儀器設備

電子天平（上海衡際科學儀器有限公司）;生化培養箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）;vitek2全自動微生物鑒定系統（法國梅里埃生物公司）。

1.3待測樣品

待測樣品為真空包裝，均保存在西林瓶內冷鏈運輸至實驗室，共3件樣品，樣品編號分別為：樣品169、樣品421、樣品579，由大連中食國實檢測技術有限公司提供。

1.4檢測過程

1.4.1樣品處理

取出待測樣品，在無菌條件下開啟樣品西林瓶，然后立即加入4 mL無菌生理鹽水進行溶解。待瓶內樣品溶解后，將其吸出再放入無菌瓶中，接著反復用余下的生理鹽水清洗西林瓶內壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，最后得到生理鹽水稀釋液共計40 mL，此溶液為待測樣品原液。用無菌吸管吸取10 mL待測原液加入到90 mL滅菌生理鹽水中混勻，制成作業指導書要求的1：10檢液。

1.4.2增菌培養

使用無菌移液管吸取1：10稀釋的檢液10 mL接種到90 mL 滅菌SCDLP液體培養基中，置于（36±1）℃培養（24±2）h進行增菌培養。

1.4.3分離培養

從上述增菌培養液中挑取培養物，通過劃線法接種到Baird-Parker平板培養基或血瓊脂平板上，置于（36±1）℃培養48 h后觀察并描述菌落形態。

1.4.4鑒定試驗

挑取單個可疑菌落接種到血瓊脂平板上，置于（36±1）℃培養（24±2）h。挑取分純后的菌落，分別進行染色鏡檢、甘露醇發酵試驗、血漿凝固酶試驗，對其進行篩選驗證。

1）染色鏡檢：挑取分純后的菌落涂片，進行革蘭氏染色后鏡檢。金黃色葡萄球菌為典型的革蘭氏陽性菌株，一般情況下其形態應排列成葡萄狀，無芽抱、無莢膜，菌體相對較小，直徑約為0.5～1 μm。

2）甘露醇發酵試驗：挑取分純后的菌落接種到甘露醇發酵培養基上，在培養基液面上加入高度約2～3 mm的滅菌液體石蠟。置于（36±1）℃培養（24±2）h后，一般情況下金黃色葡萄球菌應能發酵甘露醇產酸，出現變黃的現象。

3）血漿凝固酶試驗：根據凍干血漿使用說明先用0.5 mL生理鹽水溶解均勻，加入新鮮的可疑菌營養肉湯培養物0.5 mL，混勻，（36±1）℃恒溫箱培養，每半小時觀察一次，6h之內出現凝塊則判定為陽性結果。同時將已知血漿凝固酶陽性、陰性菌株的肉湯培養物及肉湯培養基視作陽性對照、陰性對照和空白對照。

2能力驗證結果

若在上述選擇培養基出現符合形態的菌落生長，后經過革蘭氏染色鏡檢證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，同時能發酵甘露醇產酸、血漿凝固酶試驗陽性，可報告為檢出金黃色葡萄球菌。本次能力驗證試驗的結果見表1、表2、表3。

3討論與分析

本次能力驗證主要依據《化妝品安全技術規范》（2015年版）中的金黃色葡萄球菌檢驗方法，結合本次《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定能力驗證計劃》參試指導書進行增菌培養、劃線分離以及后續鑒定等檢測步驟，最終給出了樣品169陰性、樣品421陰性、樣品579陽性的結果。隨后大連中食國實檢測技術有限公司給出的能力驗證結果評價均為滿意。

本次能力驗證本質為金黃色葡萄球菌定性試驗，故在本次試驗過程中，參考如GB 4789.10—2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》等標準信息，結合實驗員經驗，使用科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色培養基作為補充驗證的依據，有效避免了添加在樣品內的干擾菌對試驗結果的影響，優化了檢測流程，加快了實驗進程。在本次試驗過程中，使用了成品血瓊脂培養基、凍干血漿試劑等商業化成品培養基。成品培養基的出現方便了日常檢測工作，把實驗人員從繁瑣的試劑配置工作中解放出來。專業化生物制劑公司生產的產品大多是有質量保證的，但仍需要按照實驗室內部的培養基比對試驗驗證合格后方可投入使用。

在微生物檢測工作中，每個環節的把控都關系到檢測工作的質量，因此，對各個工作環節始終都要做好質量控制工作，而能力驗證就是質量控制的重要一環。定期參加能力驗證并通過考核也有助于提升客戶對實驗室出具準確可靠檢測結果的信心，有利于實驗室的發展。

4結論

本次能力驗證活動的3個結果均取得了滿意的結果，同時達到了實驗室內部質控、人員考核、水平驗證的預期目的，也為應對日常檢測工作積累了寶貴的經驗。

【參考文獻】

[1]R·E·布坎南、N·E·吉本斯.伯杰細菌鑒定手冊[M].北京：科學出版社，1984.

[2]蔣原.食源性病原微生物檢測技術圖譜[M].北京：科學出版社，2019.

[3]向春艷.化妝品中金黃色葡萄球菌檢測能力驗證方法與結果分析[J].檢驗檢疫學刊，2020，30（2）：17-20.

[4]化妝品安全技術規范（2015年版）[S].

[5]王小燕.微生物檢驗在化妝品檢驗中的應用[J].生物化工，2019，5⑵：167-168.

[6]合格評定能力驗證的通用要求：GB/T27043—2012[S].

[7]能力驗證提供者認可準則：CNAS-CL03[S].

[8]舒鵑娟，張偉沖，袁峰，等.食品微生物的檢測能力驗證[J].上海預防醫學，2014，26（3）：154-157.