大果沙棗不同部位總黃酮含量比較研究

凱迪日耶·玉蘇普　美合熱阿依·木臺力甫　周茜

【摘 要】目的：研究比較大果沙棗枝葉、種子、果肉和果皮不同部位總黃酮含量之間的差異。方法：采集新疆大果沙棗樹葉和果實，采取超聲波輔助乙醇提取法提取總黃酮，以NaNO2- Al（NO3）3-NaOH作為顯色體系，紫外-可見分光光度法測定枝葉、種子、果肉和果皮不同部位總黃酮含量。結果：大果沙棗樹葉、種子、果肉、果皮總黃酮含量分別為（8.27±0.04），（20.56±0.17），（5.91±0.05）和（2.52±0.07）mg/g（n=3）。沙棗種子中黃酮含量最高，果皮中總黃酮含量最低，大果沙棗不同部位總黃酮含量從高到底依次為種子，沙棗葉，果肉，果皮。結論：沙棗的種子、棗葉和果肉中總黃酮含量豐富，為沙棗黃酮類物質的進一步開發提供了一定的參考依據。

【關鍵詞】 大果沙棗;種子;超聲波;總黃酮含量

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2022）01-0031-05

Comparative Study on Total Flavonoids Content in Different Parts of Elaeagnus Angustifolia L.

KAIDIRIYE ?Yusupu MEIHEREAYI Mutailifu ZHOU Qian

1.?College of Life and Geographic Sciences，Kashi University，Kashi 844006，China;

2.?Key Laboratory of Biological Resources and Ecology of Pamirs Plateau in Xinjiang Uygur

Autonomous Region，Kashi 844006，China

Abstract：Objective The study compares the total flavonoids content in different parts of the leaves， seeds， pulp and peel of Elaeagnus angustifolia L.?Methods The leaves and fruits of the Xinjiang Elaeagnus angustifolia L.?were collected， and the total flavonoids were extracted by ultrasonic ethanol extraction，and the content was determined by the ultraviolet-visible spectrophotometry with NaNO2-Al（NO3）3-NaOH as the color system.Results The content of total flavonoids in leaves， seeds， pulp， and peel of Elaeagnus angustifolia L.?are （8.27±0.04）， （20.56±0.17）， （5.91±0.05） and （2.52±0.07） mg/g（n=3）respectively.The content of flavonoids in the seeds of Elaeagnus angustifolia is the highest， and the content of total flavonoids in the peel is the lowest.?The order of total flavonoids content in different parts of Elaeagnus angustifolia L.?is seeds> leaves> pulp> peel.Conclusion The seeds， leaves and pulp of Elaeagnus angustifolia L.?ware rich in total flavonoids，it provides a reference for the further development of the flavonoids.

Key?words：

Elaeagnus Angustifolia L.;Seeds;Ultrasound;Total Flavonoid Content

黃酮類化合物（flavonoids） 是一植物次生代謝產物之一，其具有多種結構類型和廣泛的生物活性，由于毒副作用比較小、具有廣譜的藥理活性，近幾年廣泛引起科學家和研究者的關注。黃酮類化合物主要由在不同位置帶有酚或多酚基團的苯并吡喃酮環組成，具有螯合金屬、減少脂質過氧化、清除自由基和抗氧化等作用。黃酮類化合物在自然界中存在非常廣泛，藥用植物、蔬菜、水果、堅果、草本植物、谷物、種子中均可發現黃酮類化合物，到目前為止，已分離鑒定出黃酮類化合物早已超過10000多種。作為天然化合物，黃酮類化合物已用于染料、化妝品和護膚品等領域中。黃酮類化合物具有光譜的藥理活性，已經廣泛用于抗腫瘤、抗菌、抗病毒、神經保護、抗氧化、防止惡性細胞擴散等，因此對黃酮類化合物的研究已成為國內外醫藥界研究的熱點話題，是一類天然藥物。

沙棗（Elaeagnus angustifolia L.）是胡頹子科胡頹子屬植物，適應性強，在半干旱、干旱、半荒漠、荒漠等多種環境中夠成長生存，被稱為沙漠里的“寶樹”。沙棗在我國新疆、青海、甘肅、內蒙古西部和寧夏等西北省份生長面積較大，產量高，河北、河南和東北的部分省份也有分布。

沙棗新鮮或者干燥的果實富含多種維生素和礦物質，比如生育酚、維生素E、C、B1和α-胡蘿卜素等，礦物質包括鉀，鈉，和磷等，沙棗果實中鉀，鈉和磷含量依次為8504 mg/kg， 1731 mg/kg 和635 mg/kg。沙棗在傳統民間醫學上具有止痛、解熱和利尿等功效，傳統民間醫學上沙棗的果實和花用于治療惡心、咳嗽、哮喘、發熱、黃疸、腹瀉等多種常見病，而沙棗種子則用于提取多酚以及其他抗氧化分子。以往研究發現，沙棗果實提取物可有效減輕類風濕關節炎患者的疼痛癥狀，同時能夠降低受傷人員的傷口愈合時間。沙棗花期在五至六月，芳香，呈黃白色，沙棗花可以作為蜜蜂的花蜜來源。沙棗的水或者有機溶劑提取物中可以檢測到黃酮、維生素、礦物質、糖類、固醇和生物堿等化合物，這可以證明它們可作為食品或藥物制劑中的成分使用。

沙棗提取物含有黃酮、多糖、生物堿、不飽和脂肪酸、甾醇、萜類、皂苷類、胡蘿卜素、單寧類等活性物質，具有抗菌、抗炎、心臟保護、降血脂、抗腫瘤、抗氧化等作用，因此在食品、藥品、化妝品等方面有較大應用價值。在國外也有研究闡述沙棗作為藥物材料的作用和成分。

目前，國內外學者對沙棗黃酮類研究大多集中在果實部分，沙棗葉黃酮研究較少，沙棗種子黃酮研究至今未見報道。鑒于此，本研究采用超聲波法提取沙棗葉、種子、果肉、果皮不同部位總黃酮，紫外可見分光光度法測定其含量，對比分析了沙棗不同部位總黃酮含量以及之間的差異，為進一步開發沙棗黃酮類物質提供了一定的實驗參考依據。

1 材料與儀器

1.1 材料 選取大果沙棗不同部位作為供試材料，大果沙棗及葉片采集與新疆維吾爾自治區喀什市。分別取沙棗干燥的全果，果皮，果實，種子以及葉片，自然風干，用粉碎機研碎，過0.45 mm篩，于室溫下保存備用。

1.2 儀器與試劑 LE403E電子天平（瑞士，梅特勒）;T6新世紀紫外-可見分光光度計（北京普析通風儀器有限責任公司）;DGG-9146A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）;SCIENTZ-ⅡD超聲波細胞破碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）;TDZ4K離心機（湖南湘儀實驗儀器開發有限公司）。

蕓香苷（蘆丁）標準品、無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均購自綠葉生物科技有限公司，以上試劑均分析純（AR）。

2 方法

2.1 標準曲線的制作 105 ℃烘干恒重的蕓香甙標準品適量，取一支干凈的250 mL棕色容量瓶，準確稱量50.00 mg蕓香甙，加入適量的無水乙醇攪拌至完全溶解后，定容至2 mL，配制成濃度為 0.20 mg/mL的蕓香甙標準溶液。取10 mL干凈的棕色容量瓶，精確吸取 0.20 mg/mL蕓香甙對照品溶液 4.00 mL，分別加入5 mg/mL亞硝酸鈉溶液0.30 mL，充分搖勻，放置 6 min 加入 10 mg/mL硝酸鋁溶液0.30 mL，充分搖勻，放置6 min ，加入4 mg/mL氫氧化鈉溶液 4.00 mL，用蒸餾水定容至相應的刻度，充分搖勻，室溫放置15 min，于400～600 nm波長處掃描，結果在498 nm處有最大吸收。

準確稱取50.00 mg蕓香甙，用無水乙醇溶解后，定容至100 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為 0.20 mg/mL的標準溶液。取7個25 mL棕色容量瓶中分別加入標準溶液 0.0 mL，0.5 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0 mL，之后在每個容量瓶中按順序加入5 mg/mL的 NaNO2 溶液 300 μL，搖勻，靜止6 min后加入 10 mg/mL的 Al- （NO3）3溶液300 μL，充分搖勻，靜止6 min，再加入4 mg/mL的 NaOH 溶液 4.0 mL搖勻，最后用60%的乙醇定容搖勻，靜止15 min后，設0號管為空白對照組，于498 nm波長處測定吸光度。3次測吸光度取平均值。用紫外可見分光光度計測定蕓香甙標準溶液吸光度值。結果見表1。

以498 nm吸光值為X軸，對應的蕓香甙濃度值為Y軸制作蕓香苷標準曲線，如圖1所示。 對蘆丁濃度和吸光度值數據進行回歸分析后，獲得的線性方程式為Y=76.125X+0.5318，R²=0.9980，在濃度為4.0～40.0 μg/mL范圍內具有良好的線性關系，此方法可以作為沙棗總黃酮含量的測定方法。

2.2 供試品的準備 分別稱取適量沙棗樹葉、果肉、果皮和種子，按照料液比 1∶22 加入60%的乙醇溶液，在320 W功率下超聲處理15 min，之后在4000 r/min離心10 min，將上清液收集在容量瓶中，用蒸餾水定容至25 mL，以備用。

2.3 沙棗不同部位總黃酮含量 取2 mL樣液至50 mL棕色容量瓶中，重復3次，按照2.1的方法在498 nm波長處測定吸光度，計算沙棗枝葉、種子、果肉和果皮不同部位總黃酮含量。以測定樣品的吸光度值為基礎，根據標準曲線的線性方程計算大果沙棗不同部位總黃酮含量，如圖2所示。實驗結果表明沙棗葉、種子、果肉、果皮中總黃酮含量分別為（8.27±0.04）、（20.56±0.17）、（5.91±0.05）和（2.52±0.07）mg/g（n=3）。試驗結果表明，沙棗種子中黃酮含量最高，果皮中總黃酮含量最低，大果沙棗不同部位總黃酮含量次序為種子>葉>果肉>果皮。圖2中可以得出，與果皮相比，棗葉、種子、果肉總黃酮含量有極顯著差異（P<0.01）。

黃酮含量（mg/g）=（黃酮濃度×稀釋倍數×提取液體積） /樣品重量

2.4 精密度實驗 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各3份，2 mL置50 mL容量瓶中，按照2.1的方法在498 nm波長處測定吸光度。結果表明枝葉、種子、果肉和果皮樣品吸收度RSD分別為0.45%，0.75%，1.19%，2.22%（n=3） 對照品吸收度RSD=2.23%（n=3），說明精密度較好。結果見表2。

2.?5 重復性實驗 精密稱定同一批沙棗葉、果肉、果皮和種子5份，按照2.2方法制得供試品溶液，按照2.1的方法在498 nm波長處測定吸光度。在498 nm波長處測定吸光度。結果表明枝葉、種子、果肉和果皮樣品吸收度RSD分別為0.45%，0.396%，1.19%，1.33% （n=3），說明重復性較好。結果見表3。

2.?6 穩定性實驗 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各2 mL置50 mL容量瓶中容量瓶，按照2.1的方法分別在 5，10，20，30，40，60 min 測定498 nm波長處測定吸光度。結果表明，結果表明枝葉、種子、果肉和果皮樣品吸收度RSD分別為0.46%，0.28%，0.865%，1.13%（n=3），樣品吸收度 RSD=0.46%（n=3），說明穩定性較好。結果見表4。

2.7 加樣回收實驗 取已知總黃酮含量沙棗種子粉末1 g，按照2.2方法制備供試品，同時分別加入已知濃度的蘆丁標準液1 mL，2 mL，3 mL依照上述樣品測定的方法測定，求出回收率結果。結果表明，3次測定的平均回收率為 100.19 % ，（RSD=0.314%， n=3）。說明該測定方法測得的結果準確。結果見表 5。

3 結論

總黃酮是植物生長過程中產生的次生代謝產物，植物體內次生代謝產物的產生和積累與植物的生長發育程度及外界環境因素密切相關。從實驗結果可知，大果沙棗種子總黃酮含量最高，其次為沙棗枝葉和果肉，沙棗果皮中最低。本研究采用超聲波提取法提取大果沙棗不同部位總黃酮以及比較所含總黃酮含量差異。由于超聲波能夠導致植物細胞壁的破壞，從而溶劑滲透細胞的速度進一步加快，有效成分迅速溶解到有機溶劑里，從而提高了有效成分的提取效果，減少提取時間，降低了高溫對提取成分的影響。超聲波提取不僅提取時間相對短，節約所用的有機溶劑，同時能提高提取速率，提取工藝相對不復雜，可以作為提取黃酮、多糖等活性物的首選的提取方法。實驗結果表明，在乙醇體積分數為?60%，320W功率下超聲提取15 min，料液比為 1∶22提取工藝條件下，大果沙棗種子的總黃酮含量可達（20.56±0.17）mg/g（n=3）。沙棗目前作為中藥的常用材料，其活性成分的提取，研究抗氧化、抗菌活性等是非常有必要的。綜上，沙棗的種子、枝葉和果肉中總黃酮含量豐富，可為今后大果沙棗資源的開發，醫藥成分的研究等提供了一定的實驗參考依據。

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（收稿日期：2021-05-06 編輯：陶希睿）