淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌免疫微環(huán)境改變及預(yù)后分析

藍(lán) 莉，黃英舉

（1.欽州市第二人民醫(yī)院病理科；2.欽州市第二人民醫(yī)院腫瘤外科，廣西 欽州 535000）

目前隨著人們生活方式的改變和生活節(jié)奏的加快，甲狀腺癌的發(fā)病率逐年上升，女性和男性的患病率之比為3∶1[1]。甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，占比較高，一般甲狀腺乳頭狀癌的病情發(fā)展緩慢，惡性程度較低，預(yù)后較好，若淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移超過30%，患者術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)率極高，預(yù)后較差[2]。目前臨床有研究顯示，腫瘤的免疫微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、預(yù)后等都有緊密聯(lián)系[3]。基于此，本研究探討了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌免疫微環(huán)境的變化與預(yù)后的相關(guān)性，為臨床提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年1月至2021年4月欽州市第二人民醫(yī)院收治的31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象進(jìn)行回顧性分析，其中男性10例，女性21例；年齡30～69歲，平均年齡（48.52±2.34）歲；腺外浸潤20例，非腺外浸潤11例。本研究經(jīng)欽州市第二人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《甲狀腺疾病外科學(xué)》[4]中甲狀腺乳頭狀癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②臨床資料完整；③經(jīng)病理檢查確診為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌；④mRNA測序數(shù)據(jù)完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①同時合并其他惡性腫瘤；②隨訪時間不足60 d；③認(rèn)知、精神存在障礙。

1.2 研究方法 采用TIMER軟件對31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌的樣本進(jìn)行處理，主要是計算22種免疫細(xì)胞的浸潤百分比，幼稚CD4+T細(xì)胞浸潤程度均是0，對剩下21種免疫細(xì)胞均進(jìn)行浸潤百分比計算，之后進(jìn)行排列。以淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)后病情加重或死亡作為觀察終點，再應(yīng)用Perl語言對免疫細(xì)胞含量矩陣和相關(guān)臨床信息作相應(yīng)的整合。采用Wilcoxon檢驗對不同臨床病理特征中的每個免疫細(xì)胞浸潤程度的差異進(jìn)行計算和分析。得出的每種免疫細(xì)胞含量相對百分?jǐn)?shù)中位值作為界線，然后把淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者分為低浸潤組和高浸潤組。應(yīng)用TIMER軟件分析各個免疫細(xì)胞和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，采用Log-rank檢驗生存分析評價甲狀腺乳頭狀癌患者的無進(jìn)展生存時間，評估免疫微環(huán)境的改變與預(yù)后相關(guān)性。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較免疫細(xì)胞浸潤豐度情況。②分析免疫細(xì)胞與性別的相關(guān)性。③分析免疫細(xì)胞與腫瘤外浸潤的相關(guān)性。④分析免疫細(xì)胞與預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料以（x）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫細(xì)胞浸潤豐度情況比較 幼稚CD4+T細(xì)胞的浸潤程度為0，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的M0巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、靜息狀態(tài)下肥大細(xì)胞、靜息狀態(tài)下樹突狀細(xì)胞、活化樹突狀細(xì)胞的浸潤豐度高于正常細(xì)胞，記憶B細(xì)胞、幼稚B細(xì)胞、M1巨噬細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、活化肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞的浸潤豐度低于正常細(xì)胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 免疫細(xì)胞浸潤豐度情況比較（x）

2.2 免疫細(xì)胞浸潤豐度與性別的相關(guān)性分析 不同性別患者M(jìn)0巨噬細(xì)胞、M1巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞、靜息狀態(tài)肥大細(xì)胞、活化樹突狀細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、幼稚B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、活化的肥大細(xì)胞浸潤豐度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 免疫細(xì)胞浸潤豐度與性別的相關(guān)性分析（x）

2.3 免疫細(xì)胞浸潤豐度與腫瘤外浸潤的相關(guān)性分析 腫瘤腺外浸潤患者的靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞、M0和M2巨噬細(xì)胞的浸潤豐度較未出現(xiàn)腺外浸潤患者高，幼稚B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤豐度低于未出現(xiàn)腺外浸潤患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 免疫細(xì)胞浸潤豐度與腫瘤外浸潤的相關(guān)性分析（x）

2.4 分免疫細(xì)胞與預(yù)后的相關(guān)性分析 以患者病情嚴(yán)重或死亡作為觀察的終點，將出現(xiàn)差異的11種免疫細(xì)胞含量相對百分?jǐn)?shù)中位值作為界線，把患者分為高浸潤組和低浸潤組，M0巨噬細(xì)胞（P=0.042）、M2巨噬細(xì)胞（P=0.023）、CD8+T細(xì)胞（P=0.043）、靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞（P=0.045）、幼稚B細(xì)胞（P=0.032）與患者的預(yù)后相關(guān)（P＜0.05），見表4。M0巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞高浸潤組患者的無進(jìn)展生存時間比較短，幼稚B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞高浸潤組患者的無進(jìn)展生存時間較長。

表4 免疫細(xì)胞與預(yù)后的相關(guān)性分析（x）

3 討論

腫瘤微環(huán)境主要組成成分有腫瘤細(xì)胞和周圍的各種免疫細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及炎癥細(xì)胞因子、細(xì)胞間質(zhì)微血管等。有研究顯示，腫瘤在增殖生長與轉(zhuǎn)移時都離不開腫瘤微環(huán)境[5]，并且微環(huán)境中的免疫細(xì)胞浸潤與腫瘤發(fā)生發(fā)展更有緊密聯(lián)系。在腫瘤剛開始形成的時候，免疫細(xì)胞能夠?qū)ζ溥M(jìn)行監(jiān)視和抗擊，但是隨著腫瘤不斷增多增大，免疫細(xì)胞就會與其產(chǎn)生協(xié)同作用，協(xié)助其完成免疫逃逸[6]。

腫瘤微環(huán)境中免疫和巨噬細(xì)胞是最常見的，其中巨噬細(xì)胞分為M0、M1和M2型，M0型的未活化狀態(tài)主要為幼稚細(xì)胞，受到M1和M2特異性的信號激活后活化，進(jìn)而形成M1和M2型巨噬細(xì)胞[7]。M1型巨噬細(xì)胞主要作用是釋放出NO等物質(zhì)，并直接將其殺死，還能合成腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-12白細(xì)胞介素-18、白細(xì)胞介素-1β等細(xì)胞因子，對Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行調(diào)節(jié)并有促進(jìn)作用，進(jìn)而產(chǎn)生有效的抗腫瘤效果[8]。M2型巨噬細(xì)胞能夠分泌白細(xì)胞介素-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β1等細(xì)胞因子和免疫因子等，對Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行調(diào)節(jié)并促進(jìn)，進(jìn)而產(chǎn)生免疫抑制功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞因子的生長、遷移、增殖等[9]。有研究顯示，腎乳頭狀癌中的M2巨噬細(xì)胞浸潤度比較高，并且該細(xì)胞與病情進(jìn)展有密切聯(lián)系[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，在甲狀腺乳頭狀癌中刺激M0型巨噬細(xì)胞，使其分化成M2型，該過程會對腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生促進(jìn)作用[11]。本研究結(jié)果結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的M0巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、靜息狀態(tài)下肥大細(xì)胞、靜息狀態(tài)下樹突狀細(xì)胞、活化樹突狀細(xì)胞的浸潤豐度高于正常細(xì)胞，記憶B細(xì)胞、幼稚B細(xì)胞、M1巨噬細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、活化肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞的浸潤豐度低于正常細(xì)胞；腫瘤腺外浸潤患者的靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞和M0、M2巨噬細(xì)胞浸潤豐度較高，幼稚B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤豐富較低；M0巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞高浸潤組患者的無進(jìn)展生存時間較短，幼稚B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞高浸潤組患者的無進(jìn)展生存時間較長。樹突狀細(xì)胞是人體抗原提呈細(xì)胞中活化效果最好的，能夠有效激活CD8+和CD4+T細(xì)胞，在免疫應(yīng)答中主要起到啟動和調(diào)控的作用[12-13]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靜息狀態(tài)樹突狀細(xì)胞含量高的患者預(yù)后相對更差，并且腫瘤出現(xiàn)周圍浸潤和轉(zhuǎn)移的概率也更高。淋巴細(xì)胞是免疫細(xì)胞重要的組成部分，在本研究中CD8+T細(xì)胞在無腫瘤腺外浸潤組的浸潤豐度更高，與患者的預(yù)后呈正相關(guān)。

綜上所述，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的免疫微環(huán)境具有一定的特異性，與預(yù)后有緊密聯(lián)系，該結(jié)果也為臨床的免疫治療提供新方向。