吳守麗，白瑪央宗，張春陽，林 勛，盧曉麗，王征樺，謝美榕，顏蘋蘋，陳 亮

艾滋病是全球性重大公共衛(wèi)生和社會問題，從發(fā)現(xiàn)至今在福建省流行已30多年，疫情流行形勢不容樂觀，流行特征也不斷發(fā)生變化。雖然我省艾滋病傳播途徑主要以性接觸傳播為主，但是近年來男男同性傳播(MSM)比例有所上升。從2005年福建省報告首例男男同性性傳播(0.5%)以來，其比例逐年上升，到2015年高達31.4%[1]。為進一步了解福建省MSM人群艾滋病流行特征及新近感染影響因素，科學研判疫情趨勢，為制定有針對性的艾滋病防控措施提供科學依據(jù)。本文對福建省2019年MSM哨點監(jiān)測人群開展新近感染狀況調(diào)查及分子流行特征分析研究。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2019年福建省MSM哨點監(jiān)測人群采用滾雪球的方式，在知情同意的基礎上填寫調(diào)查問卷,并采集3～5 mL靜脈血進行分裝凍存。

1.2 實驗方法

1.2.1 HIV血清學檢測 采用酶聯(lián)免疫方法對哨點監(jiān)測MSM人群血樣進行HIV抗體初篩和復檢，初篩陽性樣本再采用HIV BLOT 2.2 WB試劑盒進行確證。實驗操作嚴格按照說明書進行。

1.2.2 HIV新近感染檢測 采用限制性抗原親和力酶免法(簡稱LAg)對MSM哨點監(jiān)測人群中新確診的HIV-1抗體陽性樣本進行HIV新近感染檢測。實驗操作、結(jié)果處理和解釋以試劑盒說明書為準。 新近感染檢測的樣本入選標準是當年新診斷感染者的HIV抗體陽性的血清或血漿樣本；排除標準是艾滋病病人或已接受抗病毒治療的樣本。

1.2.3 基因序列亞型鑒定 取140 μL血漿樣本，用QIAGEN核酸提取試劑盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)提取病毒RNA，用Takara PrimeScriptTMOne Step RT-PCR Kit，通過RT-nested PCR擴增pol區(qū)和gag區(qū)目的基因片段，實驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行。PCR擴增引物及反應條件見表1。將PCR產(chǎn)物純化后送至生工生物工程(上海)股份有限公司測序； 獲得的序列用ChromasPro和BioEdit軟件進行編輯、校正、拼接和比對分析，利用美國拉莫斯國家實驗室HIV核酸序列庫(http://www.hiv.lanl.gov)進行BLAST初步鑒定亞型。用Mega 6.0軟件中neighbor-joining(N-J)method分別對pol和gag區(qū)進行系統(tǒng)進化樹構(gòu)建，可靠性均用Bootstrap重復檢測1 000次。最后根據(jù)2個基因區(qū)的基因型進行綜合判斷。

表1 PCR擴增引物和反應條件Tab.1 PCR amplification primers and reaction conditions

1.2.4 基因型耐藥檢測分析 將pol區(qū)獲得的序列提交到Stanford HIV Drug Resistance Database 網(wǎng)站(http://hivdb.stanford.edu) 中HIVdb Program 進行耐藥性分析，利用基因型耐藥解釋系統(tǒng)判斷是否耐藥以及耐藥的程度。HIVDB系統(tǒng)將耐藥程度分為敏感(S)、潛在耐藥(P)、低度耐藥(L)、中度耐藥(I)和高度耐藥(H)5個水平，將后3個水平判斷為耐藥。

1.3 影響因素分析 根據(jù)全國艾滋病哨點監(jiān)測實施方案MSM調(diào)查問卷收集人口學資料、艾滋病知識知曉情況、行為學特征等資料。用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進行描述性分析和卡方檢驗，多因素Logistic回歸模型分析HIV新近感染影響因素，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 MSM哨點監(jiān)測人群血清學檢測結(jié)果 2019年哨點監(jiān)測MSM人群共招募863名，其中福州市354人，廈門市252人，泉州市257人。通過血清學檢測共發(fā)現(xiàn)105例HIV抗體陽性者，HIV抗體陽性檢出率為12.17%(105/863)，其中福州、廈門、泉州市分別為11.58%(41/354)、10.32%(26/252)、14.79%(38/257)。

2.2 MSM哨點監(jiān)測人群 HIV新近感染情況 基于LAg-Avidity EIA方法的對MSM哨點監(jiān)測人群105例新報告的HIV感染者進行新近感染檢測，結(jié)果共有34例新近感染檢測陽性，總的新近感染率為11.97%，其中福州、廈門、泉州新近感染率分別為11.99%、11.96%、11.98%(表2)。

表2 2019年福建省哨點MSM人群HIV-1抗體陽性率和新近感染率Tab.2 Prevalence rates of anti-HIV antibody and recent HIV infections among the MSM population at sentinel sites in Fujian Province, 2019

2.3 MSM哨點監(jiān)測人群HIV新近感染影響因素分析

2.3.1 單因素分析 對2019年哨點監(jiān)測的MSM人群HIV新近感染影響因素進行分析，剔除掉信息不全或質(zhì)量不高的樣本數(shù)據(jù)，最終納入統(tǒng)計分析的樣本共有792份。應用SPSS 23.0軟件，將HIV新近感染相關因素(年齡、樣本來源、婚姻狀況、戶籍所在地、本地居住時間、文化程度、性取向、行為學特征、艾滋病知曉情況等)進行單因素分析，結(jié)果顯示樣本來源、最近6個月與同性發(fā)生過肛交行為情況、最近6個月同性肛交安全套使用頻率與新近感染有關(P<0.05)。見表3。

表3 2019年福建省哨點MSM人群的HIV-1新近感染單因素分析Tab.3 Univariate analysis of recent HIV-1 infections among the MSM population at sentinel sites in Fujian Province, 2019

2.3.2 多因素Logistic回歸分析 將單因素分析結(jié)果中可能對新近感染有影響的因素(P<0.05)進行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示樣本來源和最近6個月內(nèi)同性肛交安全套使用頻率可能是HIV新近感染的影響因素。其中來源于VCT的MSM HIV新近感染的概率是來源于場所MSM的1.868倍(95%CI:1.471～29.588)；最近6個月同性肛交未堅持使用安全套的MSM HIV新近感染的概率是堅持使用者的1.662倍(95%CI:2.321～11.970)(表4)。

表4 HIV新近感染的多因素Logistic回歸分析結(jié)果Tab.4 Multivariate logistic regression analysis of recent HIV infection

2.4 HIV新近感染者基因亞型和耐藥分析

2.4.1 基因亞型分布 34份新近感染樣本中，除了3份樣本量不足外，對30份樣本進行核酸提取、PCR擴增、測序，最終pol區(qū)獲得15條序列，gag區(qū)獲得13條序列。

2.4.1.1pol區(qū)基因亞型分布pol區(qū)序列系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果顯示： CRF07_BC所占比例最高，占53.33% (8/15)，其次是CRF01_AE，占26.67%(4/15)，CRF55-01B占13.33%(2/15), B亞型占6.67%(1/15)，所有序列在同一地區(qū)未見明顯聚集現(xiàn)象，見圖1。

圖1 新近感染者流行毒株pol區(qū)系統(tǒng)進化樹Fig.1 Phylogenetic analysis comparing HIV-1 pol region coding sequences from HIV-1 strains in a newly infected person

2.4.1.2gag區(qū)基因亞型特征gag區(qū)序列系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示：CRF07_BC所占比例最高，占46.15%(6/13)，CRF01_AE占38.46%(5/13)，CRF55-01B和B亞型各1條，分別占7.69%。除廈門1例樣本XMAM0013和泉州1例樣本QZLC0013同源性達100%聚在一起外，其他序列未見明顯聚焦性現(xiàn)象。見圖2。

圖2 新近感染者流行毒株gag區(qū)系統(tǒng)進化樹Fig.2 Phylogenetic analysis comparing HIV-1 gag region coding sequences from HIV-1 strains in a newly infected person

根據(jù)gag和pol區(qū)的基因型進行綜合判斷： 本研究共檢出CRF01_AE、CRF07_BC、B亞型、CRF55-01B 4種亞型，其中以CRF07_BC和CRF01_AE亞型為主，CRF07_BC占47.62%(10/21)、CRF01_AE占38.10%(8/21)，其次為CRF55-01B占9.52%(2/21)、B亞型占4.76%(1/21)。

2.4.2 耐藥性分析 對MSM哨點監(jiān)測新近感染者樣本進行耐藥性檢測，結(jié)果分析顯示，15例樣本對蛋白酶類抑制劑[atazanavir/r (ATV/r)、darunavir/r (DRV/r)、lopinavir/r (LPV/r)]、核苷類逆轉(zhuǎn)錄抑制劑[abacavir(ABC)、zidovudine (AZT)、emtricitabine (FTC)、lamivudine (3TC)、tenofovir (TDF)]均敏感；有1例對非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑[efavirenz (EFV)和nevirapine (NVP)]產(chǎn)生高度耐藥，耐藥率為6.67%(1/15)，有1例為潛在耐藥。

3 討 論

由于HIV感染屬于慢性感染過程，潛伏期長約7～10年，因此，新診斷的HIV感染者未必都是新近感染者，大部分可能是既往感染者，而用常規(guī)HIV抗體檢測不能有效區(qū)分此兩者，從而不能正確評價當前艾滋病流行形勢和防治措施效果。本研究利用LAg-Avidity EIA的新近感染檢測方法，對福建省2019年哨點監(jiān)測MSM人群進行新近感染檢測，估算新近感染率，能夠比較正確評估福建省MSM人群中HIV流行情況。本研究顯示，2019年福建省哨點監(jiān)測MSM人群HIV新近感染率處于較高水平為11.97%，對比福建省2010-2012年福州、廈門、泉州市MSM哨點監(jiān)測HIV新近感染率分別為5.8%、10.9%、2.2%[3]，除了廈門一直保持高位以外，福州和泉州兩地市新近感染均有不同程度上升，需引起相關部門足夠的重視，應加大宣傳力度，對MSM人群開展健康促進等綜合干預，以減少HIV的播散和蔓延。

新近感染影響因素分析顯示，VCT樣本來源和最近6個月內(nèi)同性肛交安全套使用頻率是新近感染的危險因素，其部分原因可能是有些社會組織或網(wǎng)上自檢查出的可疑陽性病例通過轉(zhuǎn)介到VCT點進一步確診，導致VCT樣本來源的新近感染比例偏高。這也說明應該在VCT的MSM人群中加大監(jiān)測力度，同時安全套的使用可以有效的防止HIV的傳播，因此，應該加強福建省避孕套的投放力度，在賓館、高校等場所增加安全套自動售賣機的配備，通過各種干預途徑加強艾滋病相關知識的普及，可以有效增加安全套的使用率，從而減少HIV傳播。

HIV-1流行毒株亞型復雜多變,早期研究結(jié)果顯示，福建省主要以CRF01_AE重組型(早期報道為E亞型)為主，其次是B亞型和C亞型[4-5]。不同時期亞型分布存在一定的變化，本研究顯示2019年福建省MSM新近感染者中以CRF07_BC和CRF01_AE重組亞型為主，同時存在CRF55-01B和B亞型，相較于以往研究結(jié)果[1]，CRF07_BC 流行重組型所占比例持續(xù)上升，首次超過CRF01_AE亞型成為福建省最主要流行重組亞型，新的重組亞型不斷出現(xiàn)并傳播。這與全國流行趨勢基本吻合[6]。MSM人群是HIV感染的高危人群，其性生活頻次高，性伴多而復雜，從而導致其體內(nèi)HIV毒株的重組變異幾率加大，易產(chǎn)生新的HIV重組毒株并快速傳播流行，對艾滋病防控帶來新的挑戰(zhàn)。

隨著治療覆蓋面擴大及治療時間的延長，HIV耐藥產(chǎn)生的可能性也不斷增加并可傳播[7-8]。本研究對新近感染樣本耐藥檢測結(jié)果分析顯示，有1例(6.67%)對非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑產(chǎn)生高度耐藥，有1例為潛在耐藥。這說明耐藥株可能已在新近感染者中傳播。因此，我們應該要重視原發(fā)性耐藥的監(jiān)測，為耐藥病人及時更換有效的治療方案，并且實施干預措施，提高病人的依從性，從而防止耐藥毒株的進一步傳播，控制多藥耐藥和交叉耐藥的出現(xiàn)。

總之，福建省2019年哨點監(jiān)測MSM人群HIV新近感染率處于較高水平，基因亞型以CRF07_BC 和CRF01_AE流行重組型為主，CRF07_BC比例有所上升，多種亞型并存，發(fā)現(xiàn)原發(fā)耐藥株傳播。因而建議相關部門在強化對高危人群宣傳教育、行為學干預的同時，應加強對HIV新近感染者的分子流行特征變化趨勢以及原發(fā)耐藥傳播的動態(tài)監(jiān)測，及時調(diào)整防控策略，采取有效措施控制福建省艾滋病感染與傳播。

本研究受到樣本保存質(zhì)量影響，導致擴增效率有所降低，獲得的序列有限，對實驗結(jié)果可能存在一定的偏倚，在今后的研究中需重視哨點監(jiān)測樣本保存問題，并長期動態(tài)監(jiān)測MSM人群以獲得更為可靠的數(shù)據(jù)。

利益沖突：無

引用本文格式：吳守麗，白瑪央宗，張春陽，等. 福建省MSM哨點監(jiān)測HIV新近感染影響因素及分子流行特征研究[J].中國人獸共患病學報，2022，38(5)：451-457. DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.058