GC-MS/MS法同時測定蜂王漿中8種高風險農藥殘留

王健，黃華，方建軍*，郭浩煒，段瑀，毛小紅

衢州市食品藥品檢驗研究院（衢州 324000）；2. 浙江江山健康蜂業有限公司（江山 324100）

蜂王漿也叫蜂乳，簡稱王漿。是工蜂頭部營養腺分泌的一種乳白色或淡黃色、略帶甜味并附有酸澀味的漿液[1]，富含氨基酸、糖類、有機酸等多種活性成分[2]，具有抑菌、抗氧化、抗衰老及護膚美容等其他多方面生理作用，被譽為“生命青春之源”[3]。中國是蜂王漿生產和出口第一大國，世界上90%以上的蜂王漿產自中國[4]，2019年，日本、歐盟對蜂王漿農藥殘留限量要求提高，中國需要研究突破日本、歐盟技術壁壘的農藥殘留檢測的法定標準，從而解決農藥殘留問題[5]。以日本為例，進口蜂王漿需檢測氟胺氰菊酯等高風險農藥殘留。因此，亟須從國際出發，提升檢測方法，破解技術壁壘。

農藥殘留的檢測方法主要有氣相色譜（GC）法[6-7]、高效液相色譜（HPLC）法[8-9]、氣相色譜-質譜（GCMS）法[10-11]、液相色譜-質譜（LC-MS）法[12-13]。這些檢測方法在一定程度上增強了對蜂王漿中農藥殘留的質控力度，但是方法涉及的品種偏少，類別單一，前處理過程和檢測手段不同且繁瑣，現行標準如GB 23200.98—2016《食品安全國家標準 蜂王漿中11種有機磷農藥殘留量的測定 氣相色譜法》和GB 23200.100—2016《食品安全國家標準蜂王漿中多種菊酯類農藥殘留量的測定氣相色譜法》采用氣相法，存在靈敏度偏低和假陽性干擾。采用GC-MS/MS法建立一種科學、簡單、快捷、準確的檢測方法，可填補國內蜂王漿中多種高風險農藥殘留量檢測方法的空白。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 儀器與設備

8890-7000D氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀（安捷倫公司）；XS-205電子天平（瑞士梅特勒公司）；Milli-Q超純水儀（美國密理博公司）；X1R冷凍離心機（美國賽默飛公司）。

1.1.2 標準品

雙甲脒（CAS 33089-61-1，批號G1037847，純度99.2%）、雙甲脒2,4-DMA（CAS 95-68-1，批號G147027，純度99.38%）、氯苯胺靈（CAS 101-21-3，批號G167711，純度99.70%）、克螨特（CAS 2312-35-8，批號G140573，純度99.55%）、毒死蜱（CAS 2921-88-2，批號G989695，純度99.61%）、三唑醇（CAS 55219-65-3，批號G163571，純度98.91%）、蠅毒磷（CAS 56-72-4，批號G141883，純度99.15%）、氟胺氰菊酯（CAS 102851-06-9，批號G1005521，純度97.30%），均為德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.1.3 試劑和供試品

檢測用樣品（浙江江山健康蜂業有限公司）；乙腈（色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司）；其他化學試劑（均為分析純，上海凌峰化學試劑有限公司）；自制超純水。

1.2 方法

1.2.1 標準品溶液的制備

精密稱取8種標準品各約20 mg，分別置于10 mL量瓶中，以乙腈為溶劑定容至刻度，搖勻，即得每1 mL各含2 mg標準品儲備液，精密吸取各標準品儲備液適量混合，使用空白基質提取液逐級稀釋儲備液，配制成0.02，0.05，0.10，0.15，0.20和0.25 μg/mL的混合標準溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備

稱取2 g（精確至0.01 g）試樣于50 mL塑料離心管中，加入10 mL水渦旋混勻，加入300 μL氨水，渦旋混勻，加入乙腈-三氯甲烷（1∶1，V/V）溶液10 mL，渦旋5 min，使試樣完全乳化溶解，無顆粒物，加入10 g無水硫酸鈉，劇烈振蕩3～5 min后以6000 r/min離心5 min，吸取上清液，殘渣中加入5 mL乙腈，劇烈振蕩3 min后以6000 r/min離心5 min，合并上清液，加入5 mL正丙醇，40 ℃水浴中氮氣吹干，加入1 mL乙腈復溶，過0.22 μm濾膜，用于測定。

1.2.3 儀器色譜條件

色譜柱Agilent 19091S-431 HP-5ms，15 m×250 μm×0.25 μm 2根；色譜柱溫度60 ℃保持1 min，以40 ℃/min的升溫速率升至120 min，以5 ℃/min的升溫速率升至310 ℃；載氣為氦氣，純度≥99.999%，流速1為0.866 mL/min，流速2為1.066 mL/min；進樣口溫度280 ℃；樣量1 μL；電子轟擊源70 eV；離子源溫度280 ℃；傳輸線溫度280 ℃；溶劑延遲4 min；8種農藥殘留其他質譜條件參數見表1。

表1 8種農藥殘留保留時間、定量離子對、定性離子對、碰撞電壓

2 結果與分析

2.1 儀器條件的優化

色譜柱采用Agilent 19091S-431 HP-5ms，15 m×250 μm×0.25 μm 2根，試驗采用反吹裝置將2根色譜柱串聯起來，該裝置作用是每一針進樣完成后在中間會用載氣進行反吹，將殘留污染物盡可能去除，經過反吹可使儀器、色譜柱、離子源等部位減少殘留，提高儀器、色譜柱、離子源等使用壽命。在EI離子源的模式下，用MS2全掃描類型，將0.25 μg/mL的標液進行SCAN掃描，得到色譜圖（見圖1～圖4），確定各組分的保留時間。采用Agilent MassHunter TQ優化程序優化前級離子、產物離子、碰撞能量等參數，選擇靈敏度高、穩定性和重現性好的離子作為定量離子。8種農藥殘留的定量離子對、定性離子對、碰撞能量及保留時間見表1。

圖1 2, 4-DMA和毒死蜱色譜圖

圖2 氟胺氰菊酯和克螨特色譜圖

圖3 氯苯胺靈和三唑醇色譜圖

圖4 雙甲脒和蠅毒磷色譜圖

2.2 檢測方法學驗證

2.2.1 檢出限和標準曲線

在1.2.3的試驗條件下，以空白蜂王漿為基質提取液配制的系列農藥標準質量濃度分別為0.02，0.05，0.10，0.15，0.20和0.25 μg/mL的混合標準溶液，供氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀測定。以農藥定量離子峰面積為縱坐標、農藥標準溶液質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明：8種農藥殘留在0.02～0.25 μg/mL具有良好線性關系，相關系數R2為0.991 7～ 0.999 0；根據檢測時的信噪比（S/N）3和信噪比（S/N）10時分別計算8種農藥殘留的檢出限和定量限，該方法檢出限為0.003 mg/kg，定量限為0.009 mg/kg，能夠很好滿足定量分析要求（見表2）。

表2 8種農藥殘留檢出限、定量限、相關系數

2.2.2 回收率和精密度

稱取蜂王漿空白樣品進行0.01，0.05和0.10 mg/kg 3個濃度水平添加回收率試驗，每個濃度水平平行進行3次試驗，在每個添加濃度水平選取其中1份重復測定6次進行精密度試驗。在1.2.3試驗條件下，結果顯示8種農藥殘留在3個濃度回收率為80.7%～109.2%，精密度SRSD（n=6）為0.89%～9.74%。8種農藥殘留回收率和精密度SRSD見表3。

表3 8種農藥回收率、精密度、準確度

2.2.3 準確度試驗

在1.2.3試驗條件下，以添加回收率的方式添加質量分數0.05 mg/kg水平進行3次試驗，對測定含量（經回收率校正后）平均值與真值含量進行偏差比較，GB/T27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》附錄F.5中規定在0.05 mg/kg添加質量分數下偏差范圍為-20%～10%，結果表明該方法準確度好（見表3）。

3 結論

建立氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀（GC/MS/MS）檢測蜂王漿中8種農藥殘留的最優檢驗方法。通過試驗驗證，8種農藥殘留線性關系良好，相關系數R2為0.9917～0.9990，回收率為80.7%～109.2%，相對標準偏差為0.89%～9.74%（n=6），準確度在-10.1%～ 5.6%，檢出限為0.003 mg/kg。該方法具有檢出限低、靈敏度高、簡單、快捷、準確的特點，可為相關檢測機構、蜂王漿生產企業及出口企業提供方法參考。