miR-155在結腸癌組織中的表達及其對HCT116、SW480細胞增殖與凋亡的影響

朱邢超，樂紅琴

鹽城市第三人民醫院消化內科，江蘇鹽城 224000

結腸癌是臨床常見癌癥疾病之一，國內較常見，好發于中老年人群，多數患者早期無明顯癥狀或僅有部分輕微癥狀，不易發現，容易發生遠處轉移，會給患者身心健康和生活質量帶來許多不利的影響，同時也會帶來一定的家庭經濟負擔[1-2]。劉黎等[3]的研究指出，微小RNA-155（miR-155）的下調能夠增加細胞放射的敏感性，抑制結腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲。microRNAs（miRNAs）是一類22～25 nt內源性的非編碼的單鏈小分子RNA，參與動植物轉錄后基因表達調控，其與腫瘤疾病的發生、發展密切相關[4]。如在甲狀腺乳頭狀癌[5]中，其表達水平與腫瘤TNM分期、病理分級及淋巴結轉移等密切相關；其在乳腺癌[6]疾病中，miR-155表達水平與雌激素受體、孕激素受體有相關性。miR-155與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關，并能對腫瘤細胞生物學形成產生影響，其能為臨床治療結腸癌提供新的治療策略。該次研究收集2020年6月—2021年6月鹽城市第三人民醫院內鏡中心結腸鏡檢查病理標本提示為結腸癌，且符合入組條件的78例結腸癌活檢組織，分析結腸癌組織中miR-155表達，并明確其對細胞增殖與凋亡的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鹽城市第三人民醫院內鏡中心結腸鏡檢查病理標本提示為結腸癌，且符合入組條件的78例結腸癌活檢組織納入結腸癌組織組，另外選取距離癌組織邊緣＞5 cm對應的癌旁組織標本為對照組。78例患者男50例，女28例；年齡34～78歲，平均（49.36±2.74）歲；病程7個月～3年，平均（1.26±0.39）年；體質指數23～30 kg/m2，平均（25.39±1.39）kg/m2；分期標準：Ⅰ期19例、Ⅱ期20例、Ⅲ期29例、Ⅳ期10例；組織分化程度：高分化40例、中分化17例、低分化21例。研究并獲院內醫學倫理委員會批準。

納入標準：①研究所納入的研究對象符合世界衛生組織（WHO）關于結腸癌的定義[7]；②經手術病理證實；③手術前均未接受任何放化療及免疫治療；④病灶無明顯壞死區；⑤患者均在該院建檔立卡，個人信息建檔立卡齊全；⑥患者對該次研究內容充分了解，并在知情同意書上簽字。排除標準：①合并存在嚴重電解質紊亂者；②妊娠或哺乳期女性者；③具有明顯炎癥細胞浸潤癌旁組織者；④臨床資料不全者；⑤合并其他惡性腫瘤疾病患者。

1.2 方法

選取自患者的病灶組織標本，人結腸癌HCT116、SW480細胞購買于中國科學院細胞庫，細胞培養液購自美國GIBCO公司，miR-155抑制劑購自上海邦景實業有限公司。

使用qRT-PCR方法檢測結腸癌組織和癌旁組織標本miR-155表達水平，按照Trizol試劑盒說明書操作提取總RNA，后根據反轉錄試劑盒操作步驟進行實時逆轉錄聚合酶反應，miR-155所用引物和內源性對照均購自上海邦景實業有限公司。

結腸癌細胞增殖率檢測，將HCT116、SW480細胞培養至對數生長期后進行細胞傳代，并分為空白對照組，不進行干預；miR-155抑制劑作用組，每組再分為24、36、48、72 h觀察組，相應作用時間完成后，加入CCK8溶液，并繼續培養3 h，后使用酶標儀（山東恒美電子科技有限公司，HM-SY96）讀取數值。使用流式細胞儀（貝克曼庫爾特國際貿易有限公司，CytoFLEX-LX）檢測空白對照組和miR-155抑制劑作用組結腸癌細胞凋亡率。

1.3 觀察指標

①對比癌旁組織與結腸癌組織miR-155表達水平差異。

②觀察miR-155抑制劑對人結腸癌HCT166、SW480細胞增殖的影響。

③觀察miR-155抑制劑對人結腸癌HCT116、SW480細胞凋亡的影響。

1.4 統計方法

采用SPSS 23.0統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗；采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癌旁組織與結腸癌組織miR-155表達水平比較

經檢查發現，結腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）、癌旁組織（1.01±0.09），結腸癌組織miR-155水平較高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 癌旁組織與結腸癌組織miR-155表達水平差異比較（±s）

表1 癌旁組織與結腸癌組織miR-155表達水平差異比較（±s）

組織miR-155表達水平結腸癌組織組（n=78）對照組（n=78）t值P值2.41±0.12 1.01±0.09 82.430<0.001

2.2 miR-155抑制劑對HCT116、SW480細胞增殖率的影響

miR-155抑制劑對人結腸癌HCT116、SW480細胞作用后發現，其能有效降低HCT116、SW480細胞增速度，見圖1、圖2。

圖1 miR155抑制劑對HCT116細胞增殖率的影響

圖2 miR-155抑制劑對SW480細胞增殖率的影響

2.3 miR-155抑制劑對人結腸癌HCT116、SW480細胞凋亡的影響

miR-155抑制劑對HCT116、SW480細胞作用后發現，與空白對照組相比，能明顯增加結腸癌細胞凋亡率，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 miR-155抑制劑的使用對結腸癌HCT116細胞和SW480細胞凋亡的影響（±s）

表2 miR-155抑制劑的使用對結腸癌HCT116細胞和SW480細胞凋亡的影響（±s）

組別細胞凋亡率幅度 凋亡率空白對照組mi R-155抑制劑作用組HCT116（4.05±0.47）SW480（3.77±0.29）HCT116（4.09±0.46）SW480（3.75±0.27）t/P HCT-116值t/P SW480值2.84±0.94 3.64±1.13 21.43±3.29 17.24±2.59 47.983/<0.001 42.506/<0.001

3 討論

結腸癌是全球常見的惡性腫瘤，隨著生活方式、膳食習慣改變，人口老齡化加劇等因素的影響，其發病率逐漸呈上升趨勢。疾病與多種因素有關，涉及多方面，如生活環境、遺傳以及藥物不合理使用等，疾病的發生、發展與腫瘤細胞增殖、轉化密切相關，需要加強對疾病分子生物學深入研究。結腸癌具有很強的環境關聯性和遺傳風險因素，手術治療雖能有效消除病灶，但術后復發和轉移會影響整體治療效果，患者的生存質量仍舊受到威脅[8-9]。結腸癌發生發展機制，涉及原癌基因激活、抑癌基因突變、細胞異常增殖、染色體缺失等。miRNAs在惡性腫瘤發生過程中會發揮癌基因或抑癌基本功效，其很有可能會成為惡性腫瘤診斷與判斷患者預后的預期靶點[10]。miR-155位于人21號染色體，其能夠促使細胞周圍纖維母細胞轉化為腫瘤相關性纖維細胞，進而會促使惡性腫瘤疾病進展[11]。另外其還會抑制TP53INPI mRNA功能，降低其表達水平，可促進腫瘤細胞增殖[12]。

該次研究結果指出，相較于癌旁組織（1.01±0.09），結腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）較高（P＜0.05），表示其在一定程度上促進結腸癌的發生、發展。此外在常占國等[13]的研究中提到，miR-155在結腸癌組表達水平（3.09±0.23）高于正常組（1.02±0.15），與該次研究結果相似，且其表達水平還與與淋巴結轉移、臨床分期、組織分化程度以及浸潤深度密切相關。另外其低表達時，無進展生存期、總體生存時間均較高，提示通過miR-155表達水平能夠判斷患者預后[14]。

關于miR-155在細胞增殖以及凋亡中的作用，研究結果表示，miR-155抑制劑能有效降低結腸癌HCT116細胞、SW480細胞增速度，增加結腸癌細胞凋亡率（P＜0.05），提示結腸癌細胞增殖與凋亡中，miR-155具有重要的調控作用。miR-155可能在結腸癌的遷移中發揮重要作用，可通過上調其表達，增強腫瘤細胞的轉移能力，從而影響患者預后[15]。除卻細胞增殖外，關于腫瘤細胞凋亡臨床也需加強重視，其是細胞內普遍存在的生物學過程，一定程度上能夠反映抗癌藥物使用的有效性[16-17]。線粒體凋亡信號通路是最為常見的腫瘤細胞通路，且線粒體凋亡信號也在腫瘤細胞凋亡中發揮著重要作用[18-19]。Bcl-2家族蛋白在線粒體凋亡信號通路中具有重要價值，Bcl-2家族蛋白，特別是Bax，能促進細胞凋亡發生。在李濤等[20]的研究中提到，miR-155抑制劑使用后，線粒體凋亡相關蛋白Bax呈高表達狀態，提示線粒體凋亡信號通路活化，誘導結腸癌細胞凋亡。

綜上所述，在結腸癌組織中，miR-155表達水平較高，對其進行抑制能夠降低HCT116細胞、SW480細胞增殖率，促使細胞凋亡，其有望能成為結腸癌患者治療靶點，以期能夠改善患者預后。