ciRS-7 和miR-7 在結(jié)直腸腺瘤和腺瘤癌變組織中的表達(dá)及相關(guān)關(guān)系

譚嘉圣 李伊倩 張寶庭 陳毅斌

（東莞市松山湖中心醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 東莞 523000）

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，發(fā)生于結(jié)腸或直腸，通常直腸癌為常見，后期可出現(xiàn)大便性狀改變、便血、腹痛等。結(jié)直腸癌的惡性程度較高，進(jìn)展期患者的生存率僅有7%左右，但其進(jìn)展需要一個(gè)過程，若能在早期及時(shí)診出，同時(shí)采取有效措施加以治療，可有效改善預(yù)后，提升患者的生存率。以往，早期診斷結(jié)直腸癌通常采用影像學(xué)手段進(jìn)行，盡管有一定的效果，但鑒別診斷水平仍有待提高，而生物學(xué)分子標(biāo)志物作為另一診斷方法，也有較大的爭(zhēng)議[1]。近年來，醫(yī)學(xué)界對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)病分子學(xué)機(jī)制研究不斷深入。本文在以往的研究基礎(chǔ)上，針對(duì)結(jié)直腸腺瘤和腺癌病變組織中，ciRS-7 和miR-7 的表達(dá)水平及相關(guān)關(guān)系進(jìn)行分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入我院2019 年7 月至2021 年6 月收治的結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸腺癌患者各30例為研究對(duì)象。結(jié)直腸腺瘤：男18例，女12例；年齡32～78歲，平均（58.74±2.36）歲。結(jié)直腸腺癌：男19例，女11例；年齡34～76 歲，平均（58.60±2.35）歲。兩種疾病患者各資料差異不顯著（P＞0.05）。

1.2 方法 采集結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸癌患者新鮮組織標(biāo)本，平均分為3 份，其中一份立即送病理診斷，其余兩份離體30min 后用EP 管保存，存儲(chǔ)至-80℃的冰箱中。經(jīng)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)組織標(biāo)本中ciRS-7 和miR-7 的表達(dá)水平。（1）提取總RNA：取出組織標(biāo)本，取100mg 轉(zhuǎn)入研磨器，將液氮加入其中后研磨在至粉狀，隨后將1mL TRIzol 加入其中并搖勻。根據(jù)常規(guī)TRIzol RNA 方法進(jìn)行總RNA 提取，成功后冰箱保存（-80℃）。（2）PCR 反應(yīng)檢測(cè)：經(jīng)核酸蛋白檢測(cè)儀，對(duì)RNA 的濃度、純度進(jìn)行檢測(cè)，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，合成的cDNA 保存至-20℃冰箱，適當(dāng)稀釋后進(jìn)行PCR 反應(yīng)。檢測(cè)時(shí)，嚴(yán)格按操作要求進(jìn)行檢測(cè)，確保檢測(cè)的質(zhì)量符合要求，以保證研究工作的順利進(jìn)行。ciRS-7 和miR-7 引物序列。見表1

表1 ciRS-7 和miR-7 引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 軟件處理，用Excle繪制相關(guān)關(guān)系圖，若P＜0.05 則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和有明顯相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩種疾病病變組織ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較結(jié)直腸腺癌ciRS-7 的表達(dá)水平高于結(jié)直腸腺瘤，miR-7 表達(dá)水平低于結(jié)直腸腺瘤，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2

表2 兩種疾病病變組織ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較（）

表2 兩種疾病病變組織ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較（）

2.2 兩種疾病病變組織ciRS-7 和miR-7 的相關(guān)關(guān)系結(jié)直腸腺瘤病變組織中，ciRS-7 和miR-7 呈明顯負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；結(jié)直腸腺癌病變組織中，ciRS-7 和miR-7 呈明顯負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見圖1

圖1 iRS-7 和miR-7 表達(dá)的相關(guān)關(guān)系

3 討論

CircRNA 廣泛存在與真核細(xì)胞中，是一種內(nèi)源性非編碼新型RNA 分子，其不存在5’和3’末端，被RNA外切酶破壞的可能性較低，與傳統(tǒng)線性RNA 相比，其穩(wěn)定性更加突出，而上述特征的存在，也使其相較于miRNAs 和非編碼長(zhǎng)鏈RNA 作為生物學(xué)標(biāo)志物應(yīng)用在惡性腫瘤的早期診治中更為適合[3]。ciRS-7 是RAN分子之一，形狀為環(huán)狀，其功能主要為miRNA 海綿、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)和與RNA 結(jié)合蛋白相互作用[4]。但是國(guó)內(nèi)有關(guān)ciRS-7 與結(jié)直腸癌相關(guān)內(nèi)容的研究并不多見。miRNAs 是非編碼RNA，有長(zhǎng)19～23 個(gè)的核苷酸，參與了細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和凋亡[5]。RNA-7 是一種新型的腫瘤標(biāo)志物，其在多種腫瘤中的表達(dá)均表現(xiàn)出下調(diào)，有研究指出其是惡性腫瘤預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素[6]。而國(guó)內(nèi)尚無miR-7 在正常腸粘膜-結(jié)直腸腺瘤-腸癌序列癌變組織中表達(dá)方面的研究。本研究結(jié)果顯示：ciRS-7 表達(dá)水平，結(jié)直腸腺癌高于結(jié)直腸腺瘤（P＜0.05）；miR-7 表達(dá)水平，結(jié)直腸腺癌低于結(jié)直腸腺瘤（P＜0.05），說明了結(jié)直腸腺瘤→腺癌的發(fā)病過程中，ciRS-7 表達(dá)上升，miR-7 表達(dá)下降。此外，ciRS-7、miR-7 的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。由此可推測(cè)，在結(jié)直腸癌細(xì)胞中ciRS-7 可抑制miR-7 的表達(dá)，其可能發(fā)揮出了miR-7 抑制劑的作用。

綜上，結(jié)直腸腺癌ciRS-7 表達(dá)高于結(jié)直腸腺瘤，miR-7 表達(dá)低于結(jié)直腸腺瘤，ciRS-7、miR-7 呈顯著的負(fù)相關(guān)。