鼻咽癌組織中TRIM59、PPM1B的表達及臨床意義

劉 旭 周 強 蒲高祥 劉曉梅

四川省遂寧市中心醫院腫瘤科，四川遂寧 629000

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是發病于鼻咽部黏膜的上皮性惡性腫瘤。2018 年全球新發患病數達12.8 萬例，死亡例數達5 萬例[1]。目前，NPC的臨床治療以放化療為主，但晚期患者生存預后較差，5 年生存率僅為50%[2]。三結構域蛋白59（tripartite motif-containing 59，TRIM59）是一種參與泛素-蛋白質轉移過程的蛋白質，可作為先天免疫信號通路中的多功能調節劑[3]。TRIM59 在膠質母細胞瘤、肺癌中發揮促癌功能，如TRIM59 通過上調細胞周期相關蛋白來促進表皮生長因子受體突變的肺腺癌細胞的增殖和遷移[3-4]。蛋白磷酸酶1B（protein phosphatase 1B，PPM1B）是絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶（PP2C）的家族成員，能夠負向調控細胞應激反應[5]。據報道，在膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤中PPM1B 低表達會促進腫瘤細胞的增殖，促進腫瘤惡性進展[6-7]。因此，本研究通過分析NPC 中TRIM59、PPM1B的表達，探討兩者的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014 年2 月至2018 年2 月四川省遂寧市中心醫院（以下簡稱“我院”）診治的97 例NPC 患者。納入標準：①局部組織病理活檢明確診斷為鼻咽部鱗癌；②初診，既往未接受過放化療等；③患者及家屬對本研究知情同意；④臨床和隨訪資料完整。排除標準：①合并鼻咽部急性炎癥；②鼻咽部其他類型腫瘤或合并其他臟器腫瘤；③伴心肺等臟器功能不全。其中男60 例，女37 例；年齡35～76歲，平均年齡（59.4±6.1）歲；吸煙史：有33 例，無64 例；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期65 例，Ⅲ～Ⅳ期32 例；腫瘤分化：高中分化35 例，低分化62 例；淋巴結轉移：有55 例，無42 例。本研究經我院倫理委員會審核批準通過。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組織化學染色法檢測TRIM59、PPMIB 表達 在手術局部組織活檢過程中，取癌組織和癌旁組織（距腫瘤邊緣2 cm，病理明確為正常黏膜組織）約50 mg，10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋切片。實驗步驟按照免疫組織化學染色法檢測，試劑盒購于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司（貨號E-IR-R213）。一抗TRIM59 稀釋比1∶1000，PPM1B 稀釋比1:400，均購于Abcam 公司（貨號ab69639、ab244353）。200 倍鏡下觀察結果（倒置顯微鏡，日本奧林巴斯株式會社，型號：CKX53），染色評分根據染色強度和陽性染色面積的乘積計算[8]。染色強度：不著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色顆粒為2 分，顏色深為3 分。染色面積：無著色為0 分，<25%為1 分，25%～50%為2 分，>50%為3分。染色評分≥3 分判定為染色陽性。

1.2.2 隨訪方法 所有患者出院后開始進行隨訪，每3個月電話隨訪1 次，隨訪內容為患者生存狀態，連續隨訪3 年，隨訪截至2021 年2 月或患者死亡。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0 軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman 秩相關分析；Kaplan-Meier 生存曲線分析TRIM59、PPM1B 表達對NPC 患者預后的影響，并采用log-rank檢驗進行差異分析。以P <0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NPC 患者中TRIM59、PPM1B的陽性表達情況

TRIM59 陽性染色主要位于細胞漿和細胞核，PPM1B 陽性染色主要位于細胞核，部分位于細胞漿。NPC 癌組織中TRIM59、PPM1B 陽性表達率分別為69.07%（67/97）、26.80%（26/97）；癌旁組織中TRIM59、PPM1B 陽性表達率分別為28.87%（28/97）、68.04%（66/97）。與癌旁組織比較，癌組織中TRIM59 陽性表達率明顯較高（χ2=31.374，P ＜0.001），而PPM1B 陽性表達率明顯較低（χ2=33.078，P ＜0.001）。見圖1。

2.2 NPC 患者中TRIM59、PPM1B 相關性分析

TRIM59 與PPM1B 表達呈負相關（r=-0.524，P ＜0.001）。

2.3 TRIM59、PPM1B 表達與NPC 患者臨床特征的關系

Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移的NPC 患者TRIM59 陽性表達率、PPM1B 陰性表達率高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的NPC 患者（P <0.05）。見表1。

表1 RIM59、PPM1B 表達與NPC 患者臨床特征的關系[例（%）]

2.4 TRIM59、PPM1B 表達對NPC 患者預后的影響

對97 例NPC 患者隨訪2～36個月，中位隨訪32個月（13～36個月）。隨訪期間失訪3 例，死亡27 例，3 年生存率為71.27%（67/94）。Kaplan-Meier 生存分析結果顯示，TRIM59 陽性表達組3 年生存率[63.08%（41/65）] 低于陰性表達組[89.66%（26/29）]（log-rank χ2=4.822，P=0.006）；PPM1B 陽性表達組3年生存率[92.00%（23/25）]高于陰性表達組[63.77%（44/69）]（log-rank χ2=6.041，P ＜0.001）。見圖2。

3 討論

NPC 是鼻咽腔的惡性腫瘤。目前認為，遺傳易感性、環境因素、EB 病毒感染等多種因素均參與NPC的發生發展[9-10]。NPC 惡性程度較高，腫瘤分化不良，病理上非角化型鱗癌最為常見[11]。NPC 由于位置隱匿，發現時常為中晚期[12]。放化療是NPC的首選治療方式，提高了腫瘤的局部控制率，并延長患者生存時間[13]。但治療后腫瘤發生復發轉移仍然是治療失敗的主要因素[14]。因此，深入研究NPC的疾病機制，尋找能夠有效預測NPC 患者預后的分子標志物，有助于臨床治療方式和治療后隨訪方案的選擇，是近年來的研究熱點[15-16]。

TRIM 家族包括70 多個成員，該家族蛋白結構上具有一個RBCC 結構域和N 末端環手指結構域，功能上具有E3 泛素連接酶的作用，參與包括細胞內信號傳導、發育、細胞凋亡等細胞過程[17]。TRIM59 在肺癌、乳腺癌、肝癌等許多癌癥中表達上調，并且TRIM59高表達患者的遠期生存預后較差，是腫瘤患者不良預后的腫瘤標志物[18-19]。本研究結果顯示，NPC 患者腫瘤組織中TRIM59的陽性表達率明顯較高，提示NPC 中TRIM59 表達上調。TRIM59的表達受到多種因子的調控。既往研究發現，腫瘤中表皮生長因子受體活化能激活細胞周期素激酶5（cyclin-dependent kinase 5，CDK5），CDK5 能夠順式促進TRIM59的表達，促進腫瘤細胞的增殖[3]。此外，本研究結果顯示，NPC 患者TRIM59 陽性表達與TNM 分期及淋巴轉移有關，提示TRIM59 表達上調參與促進NPC的發生發展。有研究報道，TRIM59 表達能夠穩定程序性細胞死亡蛋白10，進而抑制自噬相關蛋白p62 賴氨酸63 位的泛素化，p62 降解減少后激活Ras 家族成員A，促進腫瘤的侵襲和轉移[18]。此外，TRIM59 可以被外泌體包裹后釋放到腫瘤微環境，激活腫瘤相關巨噬細胞中NLRP3炎癥小體，促進巨噬細胞向M2 型轉化，促進免疫抑制狀態的形成[20]。

PPM1B 是金屬依賴性絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶家族的成員。近年來研究發現，PPM1B 作為腫瘤增殖信號傳導途徑的重要負調節因子，通過直接抑制P38和JNK 途徑蛋白激酶的磷酸化激活，發揮抑制腫瘤增殖的作用[21]。既往研究發現，NPC 中存在P38和JNK 途徑的過度激活[22]。鑒于PPM1B 對P38和JNK途徑的負調節作用，PPM1B 可能是NPC 中潛在的抑癌基因。本研究結果顯示，NPC 腫瘤組織中PPM1B 陽性表達率較低，提示NPC 中PPM1B 表達下調。分析其原因可能與非編碼RNA的表達調控有關。Yang 等[6]研究發現，腫瘤中PPM1B 受到上游miR-186的表達調控，miR-186 異常升高能夠顯著抑制PPM1B的表達，促進G1向S 期轉換，導致腫瘤過度增殖。此外，本研究結果顯示，NPC 中PPM1B 表達與TNM 分期及淋巴轉移有關，提示PPM1B 表達下調參與促進NPC的腫瘤進展。PPM1B 在腫瘤中主要發揮腫瘤抑制的作用，Cho 等[23]動物實驗結果表明，PPM1B 低表達導致癌基因RhoGDl1的磷酸化激活，RhoGDl1 通過激活RhoA的表達，促進人乳腺癌細胞的增殖和遷移，促進轉移。亦有學者在NPC 腫瘤細胞中發現，RhoA信號通路有過度激活的現象[24]。因此，NPC 中PPM1B的低表達可能是通過激活下游RhoA 通路發揮腫瘤促進的作用。本研究結果顯示，TRIM59 與PPM1B 呈負相關，提示兩者可能存在相互作用的關系。王文忠等[25]報道，NPC 細胞（HNE1）中PPM1B 是TRIM59的下游靶基因，TRIM59 表達升高能夠通過靶向抑制PPM1B 表達，促進HNE1 細胞的遷移和侵襲。因此，TRIM59 可能通過抑制PPM1B 發揮促進NPC 腫瘤進展的功能。本研究結果顯示，TRIM59 陽性表達、PPM1B 陰性表達患者的生存預后較差。提示檢測NPC 癌組織中TRIM59 與PPM1B 表達有助于患者臨床預后預測，是新的判斷預后的標志物。

綜上所述，NPC 中TRIM59 陽性表達率較高，而PPM1B 陽性表達率較低。NPC 中TRIM59、PPM1B的表達與TNM 分期和淋巴轉移有關。臨床上，可根據TRIM59、PPM1B 表達情況對患者病情、預后進行評估，指導臨床治療方案的選擇。但本研究未對TRIM59、PPM1B 之間作用機制進行探索，有待今后深入探索兩者的作用機制，為臨床提供新的治療靶點。