UPLC法測定醋酸阿托西班含量及有關物質方法學研究

林強

摘要：醋酸阿托西班是子宮內及蛻膜、胎膜上受體的催產素競爭性的拮抗劑，能有效幫助早產的孕婦推遲即將來臨的早產，達到保胎的目的。目前通常采用HPLC法測定醋酸阿托西班含量及有關物質，其檢測時間較長，化學試劑用量大，本文參照HPLC測定方法，進行UPLC含量及有關物質測定方法學研究。

關鍵詞： HPLC、UPLC、醋酸阿托西班、方法學

【中圖分類號】 R4 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）12--01

原料藥生產過程中，需嚴格控制每一道工序純化產物的有關物質，故而每次純化收集的餾分都需經過檢測，檢測符合要求后方可轉入下一道工序。目前生產過程中的檢測，主要以高效液相色譜儀（HPLC）進行檢測。其單次檢測耗時較長，大批量生產時檢測次數多，需配備較多的高效液相色譜儀（HPLC）及較長的檢測周期以滿足生產的需求，設備、時間及人工成本較高。

目前，超高效液相色譜儀（UPLC）發展技術已十分成熟，其采用的色譜柱填料粒徑更小，更利于有關物質的分離。相比較于高效液相色譜儀（HPLC），它的主要優勢有分離度高，檢測時間短，靈敏度更高，溶劑用量小等優點。如果能在原料藥生產過程中使用，能夠大大降低單次檢測時長，檢測周期都能較大的縮短，對于原料藥生產過程的成本控制是非常有效的。而且，超高效液相色譜儀（UPLC）具有靈敏度高的優點，對于產品質量的控制也能起到很大的作用。

本文根據醋酸阿托西班原料藥HPLC測定方法，進行UPLC方法學研究，旨在探討UPLC條件下中間控制過程檢測的適用性。

1. 儀器及試劑

本次使用的是waters公司生產的超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC H-Class系統，C18色譜柱，規格為：2.1×50mm，1.8微米;試劑為：乙腈，純化水，溶劑：50mmol/L磷酸二氫鉀溶液。

2. 試驗

2.1專屬性試驗：

分別稱取經過結構確認的，生產過程中產生的相關雜質（雜質1、雜質3、雜質9、雜質27），用溶劑進行稀釋配制成試液。

將目標產品阿托西班用溶劑配制成供試品溶液，與各雜質試液按（濃度比約為100：1）比例混合配制成系統適用性溶液，并對該系統適用性溶液進行檢測，確定該洗脫條件下各組分分離及柱效情況。要求各組分USP分離度≥1.5，USP理論塔板數≥5000。檢測結果如下：

從上表可以看出，系統適用性溶液各組分USP分離度>1.5，理論塔板數>25000，各組分之間均能達到有效分離，系統適用性良好。

2.2耐用性試驗：

2.2.1、分別采用0.15ml/min、0.20ml/min、0.25ml/min，三個不同的流速，對系統適用性溶液進行檢測，確定不同流速情況下系統適用性溶液分離情況;

2.2.2、分別采用三根相同規格，不同品牌色譜柱，按0.2ml/min的流速，對系統適用性溶液進行檢測，確定不同品牌色譜柱情況下該系統適用性溶液分離情況。

通過檢測結果發現，不同流速情況下，系統適用性溶液各組分USP分離度均>1.5，理論塔板數均>25000，流速的細微變化對樣品檢測分離無影響;不同品牌色譜柱之間檢測結果同樣滿足分離度及柱效要求，保留時間基本一致。

2.3定量限及檢測限試驗：

通過檢測，通常信噪比達到10～15，可作為定量限;信噪比達到3～5，可作為檢測限。定量限及檢測限均符合要求，滿足日常生產需求。

2.4線性范圍試驗：

取溶劑，定量限試液進樣1ul作為最低點，取阿托西班配制樣品溶液，分別進樣0.5ul、1.0ul、1.5ul、2.0ul、2.5ul， 檢測結果峰面積分別為142、2837301、5866774、8837434、11769891、14843102，通過計算得出R2=0.9999，即當前樣品濃度下，在當前的進樣量范圍內，結果滿足線性關系。

2.5準確度（回收率）試驗：

配制成阿托西班含量分別為80%、100%、120%的三組樣品，每組檢測3次，共計9次，并計算其回收率。回收率（%）=實際測定值/理論值*100%，通過結果計算回收率為100.13%，符合要求。

穩定性試驗：

配制樣品溶液進行穩定性考察，分別在：0小時、2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、30小時進樣測定，樣品峰面積RSD≤0.6%。樣品溶液穩定性良好。

2.6進樣精密性試驗：

2.7.1、配制阿托西班樣品溶液，連續進樣6針進行測試進樣精密度，確定設備重復性，保留時間及峰面積RSD分別為0.8%;0.6%。

2.7.2、使用不同實驗室，同型號設備，相同參數條件，不同操作人員連續進樣6針進行檢測中間精密度。

檢測結果顯示，進樣精密度保留時間及峰面積RSD值分別為0.0%及0.1%，設備重復性精密度良好。

不同實驗室檢測結果顯示，保留時間及峰面積RSD分別為0.3%和0.3%，重復性符合要求，中間精密度良好。

3. 結論

通過上述試驗結果表明，在當前醋酸阿托西班原料藥UPLC檢測色譜條件下，主成分阿托西班與雜質之間的分離度、柱效，系統適用性良好;設備定量、檢測靈敏度高，設備準確度及精密度符合生產需求，可以作為醋酸阿托西班中間過程控制的檢測方法。

參考文獻：

[1]HPLC法測定醋酸阿托西班有關物質的研究[J]. 姚志勇，支欽，李新宇.? 中國處方藥. 2014（05）