MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA聯合檢測診斷兒童支原體肺炎的臨床價值

張泳儀 莫偉平

（廣東省東莞市人民醫院，廣東 東莞 523000）

肺炎支原體為呼吸道感染中較常見的一種病原體，是當前所知的一種能夠獨立生活、自行繁殖的最小病原體，具有獨立的細胞結構[1]。相關流行病學調查顯示，臨床上約有40%的兒童肺炎是由于感染肺炎支原體而引起的[2]。該病病程長，癥狀多樣，且由于兒童支氣管及肺部解剖生理特點，其發病大多突然，病情進展迅速，若不及時予以處理易造成多系統功能障礙，是導致小兒死亡的重要因素之一。因此，及時準確診治肺炎支原體感染，對于有效控制病情，避免抗生素濫用，改善患兒預后具有重要的意義。支原體肺炎的實驗室檢測項目通常為血清MP-IgM、MPIgG、體液MP-DNA定量分析、呼吸道九聯檢等[3]。本研究選擇158例疑似肺炎支原體肺炎患兒和160名健康兒童進行對照試驗，旨在探究應用化學發光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）聯合檢測MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA對于兒童支原體肺炎診斷的臨床價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年1月至2019年10月我院收治的158例疑似肺炎支原體肺炎患兒設為試驗組，該組患兒均伴有不同程度的咳嗽、發熱、肺部聽診聞及濕啰音，經頭孢菌素類、?-內酰胺類抗生素治療均無效，血常規檢查顯示白細胞計數水平＞10×109/L，胸部X線片顯示肺部有炎癥滲出。該組中有男81例，女77例；年齡1～11歲，平均（4.05±0.98）歲；病程5～21 d，平均（7.96±2.13）d。另選同期160名在我院進行保健檢查的健康兒童設為正常對照組，該組兒童保健檢查無異常，也無影響研究的疾病。該組中有男84例，女76例；年齡1～10歲，平均（4.21±0.92）歲。兩組年齡、性別數據對比，差異無統計學意義（P＞0.05），有可比性。兩組均排除先天性疾病、家族遺傳性疾病，以及臨床資料不完整或家屬不同意進行研究者。所有患兒及其家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已獲得我院倫理委員會的批準。

1.2 方法 對照組兒童入選當日以及試驗組就診當日口服阿奇霉素，10 mg/（kg?d），每日1次，服用3 d后停藥4 d，持續治療4周。治療后1、2、4、8周進行MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA陽性檢測。

1.2.1 MP-IgM、MP-IgG檢測 抽取兒童空腹靜脈血2 mL作為血樣本，選用CLIA，iFlash3000全自動化學發光免疫分析儀（深圳亞輝龍生物科技股份有限公司），MP-IgM、MP-IgG檢測試劑盒均由深圳亞輝龍公司提供，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。陽性判斷標準：根據校準品的吸光值設為臨界值，若檢測結果高于臨界值可判斷為陽性。

1.2.2 MP-DNA檢測 在兒童清晨未進食前應用無菌棉簽在咽喉部采集咽部分泌物作為檢測樣本，選用美國ABI 7500實時熒光定量PCR儀和MP-DNA熒光定量試劑盒（中山大學達安基因股份有限公司），嚴格按照試劑盒說明書應用實時熒光PCR法進行MP-DNA檢測。陽性結果判斷標準：Ct值無數值顯示判斷為陰性，Ct值＜30且曲線為S形擴增曲線判斷為陽性。

1.3 觀察指標 ①對比入選當日試驗組與正常對照組兒童的MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA陽性檢測結果。②分析試驗組患兒就診當日、治療1、2、4、8周的MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA陽性檢測結果。

1.4 統計學方法 采用SPSS 23.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 試驗組與正常對照組MP-IgM、MP-IgG、MPDNA陽性率對比 試驗組的MP-IgM、MP-IgG、MPDNA陽性率均顯著高于正常對照組（P＜0.05），見表1。

表1 試驗組與正常對照組MP-IgM、MP-IgG、MP-DNA陽性率對比[n（%）]

2.2 試驗組患兒不同病程時期MP-IgM、MP-IgG、MP-DNA陽性率分析 隨著試驗組患兒病情好轉以及疾病治愈，到治療后第8周只有121例患兒接受隨訪研究，其余37例失訪。經統計分析，試驗組中就診當日的MP-IgM陽性率為32.91%，在治療2周后達高峰，隨后逐漸降低；MP-IgG就診當日陽性率為3.16%，在治療4周后達高峰；MP-DNA就診當日的陽性檢出率為75.95%，隨著病程的延長，其陽性率逐漸下降。上述3項指標的陽性檢出率在不同病程比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 試驗組患兒不同病程時期MP-IgM、MP-IgG、MP-DNA陽性率分析

3 討 論

肺炎支原體是繼病毒、細菌較易引起兒童肺炎的常見病原體。在全球范圍內，每年均有支原體肺炎感染病例報告，能夠持續散發或不定期流行，每隔3～7年會出現1次流行高峰[4]。肺炎支原體有較高的傳染率，往往會在中小學、幼兒園、托幼機構等相對封閉場所暴發流行。小兒支原體肺炎的臨床癥狀無特異性，多表現為發熱、咳嗽、咳痰等，病情嚴重時還可誘發肺外感染，甚至引起心力衰竭、全身炎性反應等并發癥。肺炎支原體缺乏細胞壁，針對抑制細胞壁合成發揮抗菌作用的頭孢菌素類、β-內酰胺類抗生素治療支原體肺炎是無效的，而大環內酯類抗生素的抗菌機制是控制細胞內蛋白質的合成，故其對大環內酯類藥物治療效果顯著。因此，及早診斷支原體肺炎，對于制訂治療方案具有積極的臨床意義。痰液支原體分離培養是當前臨床診斷與鑒別診斷支原體肺炎的金標準，但該檢測方法所需時間較長，操作繁雜，病原體培養難度較大，難以滿足臨床快速檢測的要求，臨床較少用[5]。

當前有研究報道，免疫學發病機制在兒童支原體肺炎發生發展中發揮著重要的作用[6]。肺炎支原體感染后，機體免系統會針對肺炎支原體侵入而誘發一系列免疫應答。血清特異性抗體檢測是臨床診斷支原體肺炎最常用的實驗室檢測方法。本研究結果顯示，與正常對照組相比，試驗組的MP-IgM、MP-IgG、MP-DNA陽性率顯著升高，提示MP-IgM、MP-IgG、MP-DNA檢測對于診斷兒童支原體肺炎具有一定的臨床價值。

MP-IgM為支原體肺炎發病后免疫應答中最早出現的一種特異性抗體，一般在患病后的第1～2日就可以被檢測出來，但其存有一定的窗口期，少數患兒在肺炎支原體感染后的第7～10日才可被檢出，病程到第2周可達高峰值，經過一段時間后MP-IgM抗體量會逐漸減少甚至消失。MP-IgM的產生主要是由于抗原刺激誘導體液免疫應答分泌的免疫球蛋白，其能夠迅速激活補體系統，與抗原結合啟動補體級聯反應的同時，還可與侵入的肺炎支原體連接起來，便于巨噬細胞吞噬，使其在早期體液中發揮防御作用，進而控制感染[7]。因此，臨床一般將MP-IgM作為支原體肺炎早期或急性期診斷的主要檢測指標[8]。本研究發現，支原體肺炎患兒在就診當日的MP-IgM陽性率為32.91%，在治療2周后達高峰（77.22%），隨后逐漸降低。但需要注意的是，MP-IgM陽性并不代表受檢者目前的感染狀況，因為有的患者在感染肺炎支原體后6個月甚至是1年均可檢測出MP-IgM。此外，MP-IgM在再次感染支原體肺炎后機體內含量極少，部分再次感染肺炎支原體患兒可能檢測不出MP-IgM。有文獻報道，MP-IgM陽性檢測的影響因素較多[9-11]：①受檢者的年齡。新生兒、嬰兒機體的免疫系統處于發育階段，體內感染肺炎支原體后若抗體生成不足就會導致MP-IgM抗體陽性率檢出率較低。②感染病程：機體對抗原刺激進行免疫應答繼而產生抗體需要一個過程，故一般MP-IgM陽性率一般在患病后2周達峰值，故對于病程短于1周的患兒，單純檢測MP-IgM極易漏診。③機體自身免疫能力：部分機體免疫力低下的患兒，產生免疫抗體較為薄弱，MP-IgM升高幅度較小，故其陽性率不高。由此可見，單一檢測MP-IgM診斷支原體肺炎有一定的局限性。

MP-IgG屬于一種特異性抗體，但其出現較MPIgM要晚，且會在機體內持續較長時間，故一般將其作為支原體肺炎回顧性診斷或者是亞急性感染診斷的主要觀察指標[12]。本研究結果顯示，MP-IgG就診當日陽性率只有3.16%，在治療4周后達高峰，治療第8周陽性率較高。由此可見，MP-Ig需與MP-IgM、MP-DNA等其他生物學分子相結合診斷，才可避免漏診、誤診，必要時還需進行病原學追蹤。

此外，與MP-IgM、MP-IgG相比，MP-DNA在支原體肺炎患病初期的陽性檢出率相對較高，且該指標的檢測結果不受病程、感染程度等因素的影響，敏感性更高[13]。有研究發現，少數在發病早期MP-DNA檢測確診患有支原體肺炎的患兒，其在治療4周后才檢測出MP-IgM陽性，有的MP-IgM陰性支原體肺炎患兒的病情較IgM陽性者要嚴重得多，提示若臨床單純進行MP-IgM、MP-IgG檢測有可能忽略病情進展較為嚴重的患兒，影響診治工作[14-15]。有文獻指出，MPDNA具有檢測時間短、操作簡單、靈敏度高、特異性強等優勢，且該指標不受機體抗體水平所影響，可彌補MP-IgM高峰出現時間晚、患兒免疫功能發育不完善、無法對肺炎支原體做出準確診斷等不足[16]。本研究發現，MP-DNA就診當日的陽性檢出率為75.95%，隨著病程的延長，其陽性率逐漸下降，提示MP-DNA能夠直觀反映支原體肺炎患兒早期體內感染狀況，有可為臨床動態監測療效和預測患兒預后轉歸提供參考依據。因此，筆者建議對于疑似支原體肺炎的患兒建議同時進行MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA，以使本病診斷的敏感度、特異性升高，減少漏診、誤診情況的發生。

綜上所述，在肺炎支原體感染患兒不同病程時期應用化學發光法同時檢測MP-IgM、MP-IgG抗體以及MP-DNA可實現優勢互補，有效提高兒童支原體肺炎診斷的敏感度及特異性，減少漏診、誤診情況的發生，對于本病早期診治具有重要的臨床意義。