六味降糖顆粒提取和制劑工藝研究*

岳 璐，李牧珅，李春燕，張學敏，樊江平

(1 新鄉(xiāng)醫(yī)學院三全學院生物與基礎醫(yī)學實驗教學中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2 新鄉(xiāng)醫(yī)學院藥學院，河南 新鄉(xiāng) 453002)

目前全球有4億多成年人患有糖尿病，其中大部分是Ⅱ型糖尿病。中藥在治療糖尿病及其并發(fā)癥上具有獨特的優(yōu)勢。六味降糖顆粒是由丹參、葛根等6味中藥制成的中藥降糖顆粒。其中主藥葛根能解表退熱、生津止渴，葛根中的黃酮類化合物具有良好的擴血管作用，臨床上葛根素用于改善由于糖尿病等造成的微循環(huán)障礙。丹參能活血調經(jīng)，祛瘀止痛，養(yǎng)心安神，藥理學研究表明丹參具有降低血糖、防治糖尿病并發(fā)癥和改善微循環(huán)的作用[1-3]。本研究采用正交實驗法探究最佳水提醇沉工藝，并篩選最佳輔料，所制備的顆粒劑穩(wěn)定可行，成藥性良好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

UV-2700紫外可見分光光度計，日本島津公司；葛根素對照品(批號：110752-201514)，中國食品藥品檢定研究所；無水乙醇(批號：R0170308，分析純)，天津市天力化學試劑有限公司；可溶性淀粉(批號：20100317)，天津市德恩化學試劑有限公司；β-環(huán)糊精(批號：20140703)，北京索萊寶科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 處方吸水率

按六味降糖藥的處方量稱取9份，分別放入燒杯中，加入400 mL水，浸泡時間分別為0、10、20、30、40、50、60、90、120 min，測定吸水率[4]

1.2.2 水提醇沉工藝

以總黃酮含量和干膏重為指標，采用L9(34)正交表進行實驗[5]，水提工藝考察加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時間這三個因素對水提效果的影響，醇沉工藝考察藥液比、醇沉濃度和醇沉時間這三個因素對醇沉效果的影響。

1.2.3 總黃酮含量測定

取葛根素對照品約15 mg，精密稱定，置入100 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，作為對照品母液。精密量取葛根素對照品母液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、 1.00 mL、1.50 mL和2.00 mL 至25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇溶液定容，搖勻，在251 nm處測定吸光度，并繪制標準曲線。將水提醇沉工藝中的中藥藥液過濾后，精密量取1 mL藥液至50 mL的容量瓶中，加水定容，搖勻，過濾，精密量取0.5 mL至50 mL的容量瓶中，30%乙醇定容，搖勻，在251 nm處測定吸光度，代入上述標準曲線中計算總黃酮的含量。

1.2.4 干膏的制備

將藥液攪拌均勻，精密量取15 mL置已干燥并恒重的坩堝中，平行制備3組， 在105 ℃下干燥，測定干膏重量。

2 結果和討論

2.1 處方吸水率

吸水率實驗結果見圖1，處方藥材浸泡20 min后吸收率基本保持穩(wěn)定，故最佳浸泡時間為20 min。

圖1 處方吸水率測定結果Fig.1 The water absorption results of the prescription

2.2 水提工藝的篩選

如表1所示，根據(jù)極性大小判斷各因素對水提工藝的影響大小，極差越大，影響越大，故水提工藝各因素影響大小次序為C(煎煮次數(shù))> A(加水量)> B(煎煮時間)。每個因素下，各水平的比較主要參考均值的大小，均值越大，該因素相應的水平提取效果越好，故水提的最佳工藝為A3B1C3，即煎煮3次，每次加10倍的水，每次煎煮1 h。在大生產(chǎn)中，綜合考慮表1實驗結果與大生產(chǎn)中的時間成本和能源消耗，煎煮次數(shù)中煎煮2次(均值-7.596)與煎煮3次(均值-8.350)差別不大，故可以煎煮2次以節(jié)約成本；另外加水量考察中，8倍量水(均值-7.526)與10倍量水(均值-7.626)的差異很小，故定為8倍量加水量更利于實際生產(chǎn)。

表1 水提工藝正交實驗結果Table 1 Orthogonal experimental results of water extraction process

2.3 醇沉工藝的篩選

由表2可知，各因素影響大小次序為C(醇沉時間)> B(醇沉濃度)> A(藥液比)，故醇沉的最佳工藝為A3B3C1，即乙醇濃度50%，醇沉時間12 h，藥液比1:2。在大生產(chǎn)中，綜合考慮表2實驗結果與大生產(chǎn)中的時間成本和能源消耗，乙醇濃度40%(均值-7.361)與乙醇濃度50%(均值-7.392)差別很小，故可將醇沉濃度定為40%以節(jié)約成本；另外藥液比考察中，藥液比1:1.5(均值-7.259)與藥液比1:2(均值-7.403)的差異較小，故可將藥液比定為1:1.5。

表2 醇沉工藝正交實驗結果Table 2 Orthogonal experimental results of alcohol precipitation process

2.4 最佳輔料的篩選

分別以可溶淀粉、β-環(huán)糊精、低聚果糖、果糖二磷酸鈉作為輔料，藥與輔料1:1.5研磨均勻，用70%的酒精做潤濕劑，將制好的軟材過14目篩，制得的顆粒放入電熱鼓風干燥箱(60 ℃)干燥，過40目篩，篩去細粉。

外觀：研究發(fā)現(xiàn)低聚果糖制軟材效果不好，太黏；其余輔料制軟材效果較好。

溶化性：按中國藥典制劑通則中顆粒劑的檢查法，取顆粒1 g至20 mL的熱水中，攪拌5 min，立即觀察。以可溶性淀粉制得的顆粒有明顯的沉淀，果糖二磷酸鈉和低聚果糖為輔料制得的顆粒有輕微渾濁，以β-環(huán)糊精的顆粒溶化性良好。

吸濕性：結果表明以低聚果糖為輔料的顆粒全部黏在一起，以果糖二磷酸鈉和可溶性淀粉為輔料的顆粒較好；以β-環(huán)糊精為輔料的顆粒無明顯吸濕性，顆粒外觀良好。

綜上所述，β-環(huán)糊精制粒效果好，故以β-環(huán)糊精為本制劑的輔料。

2.5 總黃酮含量測定

圖2 葛根素對照品標準曲線Fig.2 Standard curve of Puerarin reference substance

取葛根素線性溶液，在251 nm處測定吸光度，以線性溶液濃度與紫外吸收繪制標準曲線如圖2所示，結果表明在1.579～12.63 μg/mL的范圍內線性良好。

3 結 論

六味降糖顆粒是由葛根、丹參等6味中藥組成的復方制劑，本實驗采用以干膏重、總黃酮的含量為指標，采用正交實驗對處方活性成分提取工藝進行影響因素分析，優(yōu)選最佳水提工藝和醇沉工藝，并在此基礎上優(yōu)選最佳輔料，所制備的顆粒制劑工藝科學合理，可行性較強，顆粒成藥性良好。