QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肝中氯丙嗪殘留量

周 青，周宏霞，姜華軍，張玉潔

（威海市食品藥品檢驗檢測研究院，山東威海 264209）

氯丙嗪（Chlorpromazine，CPZ）是一種吩噻嗪類藥物，具有安眠、鎮(zhèn)靜等作用。但是一些不法商販在飼料中添加氯丙嗪，對動物間接催肥或減少運輸中的質(zhì)量損失和死亡率，導(dǎo)致氯丙嗪在畜禽產(chǎn)品中存在殘留[1]。氯丙嗪在動物體內(nèi)的肝臟代謝過程中易引起藥物殘留，經(jīng)食物鏈傳遞到人體后，能引起白細(xì)胞減少等不良反應(yīng)，甚至導(dǎo)致人體肝腎的病變[2]。目前，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）明確指出，氯丙嗪允許做治療用，但在動物性食品中不得檢出[3]。

近年來，氯丙嗪的檢測方法有氣相色譜法[4]、液相色譜法[5]、氣質(zhì)聯(lián)用法[6]和液質(zhì)聯(lián)用法[7]。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法以其高靈敏度和高準(zhǔn)確性，在氯丙嗪的檢測中具有明顯的優(yōu)勢。本研究采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，在現(xiàn)有研究基礎(chǔ)上，重點研究了QuEChERS法對豬肝樣品的前處理方法優(yōu)化，建立了乙腈提取、QuEChERS凈化、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯丙嗪殘留量的分析方法，為豬肝中氯丙嗪的測定提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

Qtrap 6500液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國AB SCIEX公司；SQP電子天平，美國Sartorius公司；GM200刀式研磨儀，德國Retsch公司；超純水機(jī)，法國Millipore公司；移液槍，美國Sartorius公司；超聲波清洗器，昆山美美超聲儀器有限公司；渦旋混合器，德國IKA公司；高速冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf公司；TurboVAP全自動氮吹濃縮儀，瑞典Biotage公司。

1.2 試劑

鹽酸氯丙嗪（99%，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈、乙酸乙酯、甲醇（色譜純、美國FISHER公司）；甲酸（色譜純，上海麥克林生化科技有限公司）；無水硫酸鈉、無水硫酸鎂（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；PSA、C18（天津博納艾杰爾科技有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18 ℃避光儲存?zhèn)溆谩Ａ咳∵m量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇稀釋成1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，4 ℃避光保存。分別量取適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，用空白基質(zhì)提取液稀釋，配制成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、 5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL和100.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品的離子色譜圖見圖1。

圖1 氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測離子色譜圖（1 ng/mL）

1.3.2 樣品前處理

將樣品粉碎，稱取5.00 g樣品，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入10 mL乙腈，2.0 g無水硫酸鈉，渦旋混合1 min，超聲提取5 min，4 000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液，殘渣用10 mL乙腈重復(fù)提取一次。合并兩次提取液。取上清液4 mL于100 mg C18、150 mg PSA、500 mg無水硫酸鎂的10 mL離心管中，渦旋混合1 min，8 000 r/min離心5 min。將上清液在40 ℃氮吹至近干，加1 mL初始流動相溶液溶解，過0.22 μm有機(jī)濾膜，待測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Kinetex C18，100 mm×2.1 mm，2.6 μm； 流動相A：0.1%甲酸溶液，流動相B：乙腈；梯度洗脫程序：0～2 min，90% A；2～8 min，90%～ 10% A；8.1～10.0 min，10%～90% A；流速：0.3 mL/min； 柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.3.4 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI+；監(jiān)測模式：MRM；離子源溫度：500 ℃；噴霧電壓：4 500 V；氣簾氣壓力（CUR） 35 psi；霧化器壓力（GS1）55 psi；輔助霧化氣壓力（GS2）55 psi。氯丙嗪的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 氯丙嗪的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

氯丙嗪是脂溶性化合物，易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯等，實驗分別采用乙腈、甲醇、乙酸乙酯、乙腈∶水溶液（1∶1）（V/V）等溶劑進(jìn)行提取，凈化條件選擇QuEChERS法，進(jìn)行加標(biāo)回收實驗[2,7]。結(jié)果表明，采用甲醇、乙酸乙酯作為提取溶劑時會提取出部分脂類等基質(zhì)干擾物質(zhì)，影響后續(xù)的凈化和分析檢測；乙腈-水溶液提取時，提取液較為混濁，而乙腈的提取效果好、干擾較小，且具有沉淀蛋白質(zhì)的作用[8]。因此，本研究采用乙腈進(jìn)行樣品的提取處理。

2.2 前處理條件的優(yōu)化

在樣品凈化過程中，本研究比較了HLB固相萃取柱[9]、QuEChERS法等凈化方法。由于氯丙嗪屬于脂溶性化合物，因此并不適合液液萃取的凈化方法[1]。采用HLB固相萃取柱凈化時，氯丙嗪的回收率較低，回收率在45.1%～66.7%；采用QuEChERS法進(jìn)行凈化時，PSA對樣品中的脂肪、蛋白質(zhì)類化合物具有較好的吸附作用，C18可以有效吸附色素類物質(zhì)，此時氯丙嗪的回收率均在80%以上。因此，選擇QuEChERS法進(jìn)行樣品提取液的凈化。

2.3 方法的線性范圍和檢出限

本方法采用空白樣品基質(zhì)提取液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在0.5～100.0 ng/mL的濃度下，以樣品濃度對應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=7 022.970 18x-1 453.511 59，相關(guān)系數(shù)r為0.997 2，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。以3倍信噪比為檢出限，10倍信噪比為定量限，氯丙嗪的檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。

2.4 方法回收率與精密度

在空白豬肝樣品中添加1.0 μg/kg、2.5 μg/kg、10.0 μg/kg 3個水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照1.3.2的方法進(jìn)行前處理，每個水平平行測定6次，結(jié)果表明氯丙嗪的加標(biāo)回收率為80.9%～95.1%，RSD為0.8%～1.9%，見表2，回收率與精密度均能滿足檢測要求。

表2 豬肝中氯丙嗪添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

2.5 實際樣品測定

采用該方法對15批次市售豬肝樣品進(jìn)行測定，結(jié)果表明所購買的豬肝樣品中均未檢出氯丙嗪殘留。

3 結(jié)論

本研究采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立了豬肝中氯丙嗪殘留的快速檢測方法，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)，外標(biāo)法定量。該方法檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，具有較好的線性范圍、精密度和回收率。結(jié)果表明該方法檢測靈敏度高、重現(xiàn)性好，可為豬肝中氯丙嗪殘留量的檢測提供參考依據(jù)。