Cys-C、sTRAIL、PDGF 血清表達與慢性乙肝肝硬化病情程度間關聯性及預后預測價值探究

廉娜

（河南省焦作煤業集團有限責任公司中央醫院檢驗科，河南 焦作454000）

流行病學調查顯示， 我國肝硬化多繼發于乙型肝炎病毒（HBV）感染，并隨慢性乙肝患者增多，發病率呈明顯升高趨勢[1-2]，同時，根據相關并發癥嚴重程度， 慢性乙肝肝硬化患者1 年內病死率可達1~57%[3]。 Child-Pugh 肝功能分級為臨床常用慢性乙肝肝硬化患者肝損傷評估指標， 但受主觀因素影響，準確性較差。 近年來，隨醫學研究不斷發展，利用有創性小的血清學指標，監測肝硬化發展進程已成為研究熱點。 據報道， 在慢性乙肝患者中，隨時間延長，肝實質反復炎癥導致肝細胞外基質大量增生出現纖維化加重， 且在此基礎上隨病情進展可破壞肝小葉結構， 進一步發展成為肝硬化[4-5]。 而血清胱抑素-C（Cys-C）水平上升，可反映肝臟炎癥過程。 可溶性腫瘤細胞壞死因子相關凋亡誘導配體（sTRAIL）可調節免疫系統，參與感染、炎癥、自身免疫性疾病與細胞凋亡的過程。 血小板衍生生長因子（PDGF）可刺激肝纖維組織增生，促進肝纖維化進展。 既往研究已證實血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 在慢性乙肝患者中的應用價值，但關于上述指標與慢性乙肝肝硬化患者病情程度的關系及聯合表達對慢性乙肝肝硬化患者預后預測價值鮮有報道。基于此，本研究初次探討血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達與慢性乙肝肝硬化病情程度的相關性及對預后的預測價值。 具體分析如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2017 年11 月至2019 年5 月我院慢性乙肝肝硬化患者119 例設為研究組，另選取健康體檢者119 例設為對照組。研究組：女53例，男66 例，年齡46~78 歲，平均（62.19±7.22）歲；體質量指數 （BMI）17.2~27.6kg/m2， 平均 （23.36±1.54）kg/m2； 慢 性 乙 肝 病 程7.5~30.8 年， 平 均（20.83±4.75）年；依據Child-Pugh 肝功能分級分為輕度（A 級）49 例、中度（B 級）41 例、重度（C 級）29例；對照組：女50 例，男69 例，年齡48~76 歲，平均 （61.95±6.87） 歲；BMI 17.0~27.8kg/m2， 平 均（22.92±1.63）kg/m2。 兩組基本資料 （年齡、 性別、BMI）均衡可比（P＞0.05）。

1.2 選取標準

1.2.1 納入標準 （1）研究組均符合《2015 JSGE 循證臨床實踐指南：肝硬化》[6]中診斷標準，并經腹部CT、B 超、肝組織活檢等證實為肝硬化；乙肝表面抗原（HBsAg）陽性＞6 個月；（2）兩組臨床資料均完整，且患者及家屬簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 （1）合并甲肝、丙肝感染或獲得性免疫缺陷綜合征者；（2）合并酒精性肝病、代謝遺傳性肝病、 原發性膽汁性肝硬化或其他類型肝病者；（3）肝癌或其他部位惡性腫瘤者；（4）腎、肺等重要臟器器質性病變者；（5）既往有肝臟手術史者；（6）合并冠心病、糖尿病等基礎疾病者；（7）認知功能障礙或精神行為異常者。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 空腹取6 mL 靜脈血， 離心12 min，3 000 r/min，離心半徑16 cm，分離取血清，置于-20 ℃冰箱低溫保存：（1） 采用乳膠增強免疫透射比濁法檢測血清Cys-C 水平， 試劑盒購自鄭州科欣生物技術有限公司；（2）采用單克隆雙抗體夾心ABC 酶聯免疫吸附試驗 （ELISA） 檢測血清sTRAIL 水平， 試劑盒購自上海鈺博生物科技有限公司；（3） 采用ELISA 法檢測血清PDGF 水平，試劑盒購自上海廣銳生物科技有限公司， 上述操作均嚴格按照試劑盒說明書執行。

1.3.2 治療方法 研究組均接受甘草酸二銨腸溶膠囊保肝治療，飯后口服，每次3 粒，3 次/d，同時口服恩替卡韋，每次0.5 mg，1 次/d，持續服用12 個月。

1.4 統計學方法 應用SPSS 22.0 軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t 檢驗，計數資料用百分比表示， 采用χ2檢驗，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關聯性采用Logistic 回歸分析， 采用Spearman 相關性進行兩變量的相關性分析， 繪制受試者工作特征曲線 （ROC） 得到曲線下面積（AUC），檢驗Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預后預測價值，AUC＞0.9 表示預測性能較高，0.71～0.90 表示有一定的預測性能，0.5～0.7 表示預測性能較差，＜0.5 表示沒有預測效能，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達 研究組血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達高于對照組 （P＜0.05）。 見表1。

表1 兩組Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較（±s）

表1 兩組Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較（±s）

組別 n研究組對照組119 119 t P Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）1.13±0.24 0.79±0.14 13.349＜0.001 219.80±45.44 86.41±19.39 29.453＜0.001 PDGF（pg/mL）122.68±20.69 26.91±9.11 46.213＜0.001

2.2 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關聯性 以慢性乙肝肝硬化作因變量， 將Cys-C、sTRAIL、PDGF 作自變量，納入Logistic 回歸分析模型，結果顯示，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化具有顯著關聯性（P＜0.05）。 見表2。

表2 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關聯性

2.3 不同病情程度患者血清指標表達 不同病情程度慢性乙肝肝硬化患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達間存在顯著差異（P＜0.05），且中度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達高于輕度患者（P＜0.05）；重度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達高于中度患者（P＜0.05）。 見表3。

表3 不同病情程度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達（±s）

表3 不同病情程度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達（±s）

組別 n輕度中度重度F 值P 值49 41 29 Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）0.93±0.15 1.16±0.23 1.41±0.29 44.604＜0.001 138.86±50.61 227.70±61.15 345.41±56.97 124.673＜0.001 PDGF（pg/mL）78.91±21.38 127.64±23.11 189.61±32.91 177.075＜0.001

2.4 血清指標與慢性乙肝肝硬化病情程度相關性Spearman 分析得知，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化病情程度呈正相關性（P＜0.05），見表4。

表4 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化病情程度相關性

2.5 不同預后患者Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較 隨訪6 個月， 研究組119 例患者中HBV-DNA 陽性者31 例， 預后良好者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF表達低于預后不良者（P＜0.05），見表5。

表5 研究組不同預后患者血清指標比較（±s）

表5 研究組不同預后患者血清指標比較（±s）

組別 n預后良好預后不良88 31 t P Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）0.99±0.20 1.53±0.31 11.087＜0.001 198.71±34.67 279.67±50.11 9.885＜0.001 PDGF（pg/mL）97.64±18.62 193.76±26.59 21.963＜0.001

2.6 Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預后預測價值 繪制Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預后預測價值ROC 曲線，Cys-C AUC 為0.718，95%CI 為0.629～0.797，Z 值為3.709，P 值為0.000，當截斷值＞1.46 mg/L 時，敏感度為54.84%、特 異 性 為84.09%；sTRAIL AUC 為0.781，95%CI為0.696～0.851，Z 值為5.660，P 值為0.000，當截斷值＞231.00 pg/mL 時，敏感度為77.42%、特異性為69.32%；PDGF AUC 為0.809，95%CI 為0.727 ～0.875，Z 值 為7.272，P 值 為0.000， 當 截 斷 值＞131.31 pg/mL 時， 敏感度為70.97%、 特異性為81.82%；聯合檢測AUC 為0.875，95%CI 為0.788～0.962，Z 值 為8.467，P 值 為0.000， 敏 感 度 為77.42%、特異性為92.05%。 見圖1。

圖1 血清Cys-C、sTRAIL、PDGF對慢性乙肝肝硬化預后預測價值

3 討論

肝纖維化是機體對慢性肝損傷的一種修復反應，也是慢性乙肝進展為肝硬化的必經環節[7-8]。 因此準確判斷肝纖維化程度， 對判斷肝硬化病情嚴重程度、評估預后具有積極意義。

Cys-C 屬胱蛋白超家族中一員，具有抑制或調節組織蛋白酶活性作用， 是早期反映腎小球濾過率的生化標記物， 亦是評估早期腎功能損害的靈敏性指標[9-10]。本研究結果顯示，慢性乙肝肝硬化患者血清Cys-C 表達明顯高于健康體檢者。 血清Cys-C 表達上調，一定程度會影響基質金屬蛋白酶及其抑制物基質金屬蛋白酶抑制劑的平衡， 參與細胞外膠原蛋白的生成與沉積，加重肝纖維化，參與慢性乙肝肝硬化的發生、進展[11]。另外，趙直光等[12]通過研究血清Cys-C 與Child-Pugh 肝功能分級關聯性可知，血清CysC 是乙型肝炎性肝硬化發生的高危因素， 并與Child-Pugh 評分存在正相關關系，與本研究觀點一致。 肝組織損傷后，可激活半胱氨酸蛋白酶等組織蛋白酶， 增強血管內皮細胞及肝細胞線粒體外膜通透性， 促進大量凋亡因子釋放，從而導致細胞凋亡，而機體為對抗組織蛋白酶所致“損害效應”，會應激性增加CysC 含量，最終形成惡性循環， 加重慢性乙肝肝硬化患者病情程度[13]。 經ROC 曲線進一步證實，當截斷值＞1.46 mg/L 時， 血清Cys-C 對慢性乙肝肝硬化患者預后的預測特異性可達84.09%， 有力佐證了血清Cys-C 表達具有成為預測慢性乙肝肝硬化患者預后的特異性指標潛力，可選取個性化治療方案，判斷預后提供新靶點。

sTRAIL 通過結合細胞膜上相應受體， 在機體免疫調節、 免疫自穩及免疫監視中發揮重要作用[14]。 本研究發現，血清sTRAIL 在慢性乙肝肝硬化患者中過度表達， 考慮可能為活化肝星狀細胞（HSC）表面TRAIL 受體蛋白表達升高，導致HSC對TRAIL 所致肝細胞凋亡敏感度也隨之增強，從而引發組織、細胞嚴重壞死，加快肝纖維化進展。經Spearman 相關性分析， 血清sTRAIL 表達與慢性乙肝肝硬化患者病情程度存在明顯正相關性。血清sTRAIL 與可溶性血管細胞黏附分子-1 （sVCAM-1）具有協同作用，當血清sTRAIL 水平異常高表達時，載體調節的細胞因子會產生主動轉運，而經細胞因子級聯反應， 損傷肝細胞會形成多元性瀑布效應，從而誘導肝細胞凋亡，加劇肝臟損傷嚴重程度，加重病情程度[15]。 進一步對比不同預后患者血清sTRAIL 表達顯示， 血清sTRAIL 在預后不良患者呈異常升高態勢，提示血清sTRAIL 高表達可能會增加慢性乙肝肝硬化患者死亡風險，嚴重影響預后改善。 推測早期下調血清sTRAIL 水平可能是促進慢性乙肝肝患者預后改善的重要原因。

PDGF 與細胞表面PDGF 受體結合，能介導下游信號通道轉導，在肝纖維化發生、進展中發揮重要作用[16]。 通過ELISA 法檢測發現，血清PDGF 在慢性乙肝肝硬化患者中呈異常高表達狀態， 并隨病情程度加重出現升高趨勢，與林勇[17]結果相似。同時，劉典勛等[18]報道也證實，血清PDGF 表達提示乙型肝炎肝硬化患者肝功能損傷狀況。PDGF 能激活并活化靜止HSC，縮短HSC 分裂周期時間，加快HSC 增殖， 同時又促使新合成細胞遷移至相關部位，迅速結合受體，產生細胞外基質與相應膠原蛋白，誘導HSC 分泌轉化生長因子β1（TGF-β1）等細胞因子， 一定程度會促進纖維連結蛋白及蛋白多糖的合成，加重肝臟組織損害程度[19]。 但Cys-C、sTRAIL、PDGF 預測慢性乙肝肝硬化患者預后價值均存在一定局限性， 故本研究采用聯合預測方式，結果顯示，Cys-C、sTRAIL、PDGF 聯合預測慢性乙肝肝硬化患者AUC 優于上述指標單一預測，提示三者聯合對慢性乙肝肝硬化患者預后具有一定指導價值，可為臨床預后評估提供新途徑。

綜上可知，血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達與慢性乙肝肝硬化患者病情程度存在明顯正相關性， 三者聯合有望成為評估慢性乙肝肝硬化患者預后的有效手段，為臨床判斷病情程度、預測預后提供循證指導。