多發性骨髓瘤患者NLR、β2-MG、LDH與免疫表型、細胞遺傳學及預后生存的關系

張 琪，甘宜敏，徐 陽，衡 春△

江蘇省淮安市第一人民醫院：1.血液病研究室；2.檢驗科，江蘇淮安 223000

多發性骨髓瘤(MM)是常見的血液系統惡性腫瘤，是一種漿細胞異常克隆增殖性疾病，目前尚無有效的治療方法，預后一般較差[1-2]。MM的致病機制尚不明確，但隨著間接熒光原位雜交技術(FISH)、基因表達譜檢測(GEP)等技術的不斷發展，MM的生物學及遺傳特征逐漸明確[3-4]。細胞遺傳學異常被認為是影響MM預后的重要因素，但細胞遺傳學檢驗的實驗室條件嚴格，檢查費用高，并不適用于基層醫院，故尋找更為方便簡單的方法預測MM患者預后，成為了當前MM相關研究的熱點。外周血中性粒細胞/淋巴細胞比值(NLR)是一種和免疫調節功能相關的指標，能反映體內免疫炎癥反應強度[5]。有研究表明，NLR在反映乳腺癌、卵巢癌以及膀胱癌等多種惡性腫瘤患者預后中均具有較高的價值[6]。β2微球蛋白(β2-MG)是一種單鏈多肽低分子蛋白，主要由淋巴細胞分泌，研究表明，合并惡性腫瘤患者血清β2-MG水平將大幅度升高，這可能是因為腫瘤細胞自身能合成并分泌β2-MG以及惡性腫瘤患者機體免疫穩定性被破壞，免疫反應被激活，促使β2-MG分泌增加[7]。乳酸脫氫酶(LDH)是糖酵解過程中的重要代謝酶，其血清水平能提示機體缺氧、腫瘤細胞活性狀態及惡性轉化等狀況[8]。以上指標的檢測取材方便，步驟簡單。研究外周血NLR、血清β2-MG以及LDH與MM患者細胞遺傳學以及免疫表型之間的關系，進而分析其在MM患者預后中的價值具有一定的臨床意義，基于以上背景，本課題組開展了如下研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2016年1月至2019年1月收治的233例MM患者以及同期100例健康體檢合格的志愿者納入研究，分別作為MM組與健康組。MM患者納入標準：患者符合2003年國際骨髓瘤工作組制定的MM相關診療標準[9]；初次被診斷為MM；參與研究前未接受過任何化療。MM患者排除標準：參與研究前已存在急性或活動性感染者；合并自身免疫性疾病、艾滋病等可能影響NLR者；合并各類慢性炎癥者；合并其他惡性腫瘤者。233例MM患者中，男141例、女92例，年齡43～81歲、平均(65.41±13.54)歲；對照組中，男61例、女39例，年齡45～80歲、平均(66.14±14.03)歲；兩組年齡及性別構成比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1外周血指標檢測 采集被研究者空腹靜脈血6 mL，均分為3份，置于干燥潔凈的試管內，分別用于檢測外周血NLR以及血清β2-MG、LDH水平。血清β2-MG采用放射免疫法檢測，試劑盒為上海超研生物科技有限公司生產。NLR及LDH均采用日立7600全自動生化分析儀檢測。

1.2.2患者免疫表型、細胞遺傳學檢查結果的收集 收集MM患者的檢查結果，包括常規染色體核型、骨髓免疫分型、細胞遺傳學、FISH檢查結果。染色體核型檢測包括常規染色體核型(中期R+G顯帶)、FISH(間期)檢測，復雜染色體核型指常規中期R+G顯帶染色體檢測存在≥3個染色體核型異常或多個預后不良染色體核型異常。

1.2.3分組比較及隨訪 首先比較MM組與對照組以及MM不同DS分期患者外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平。并根據MM患者外周血NRL及血清β2-MG、LDH的中位水平，將其分為高、低NLR組，高、低β2-MG水平組，高、低LDH水平組，分別比較各亞組患者免疫表型以及細胞遺傳學特點；隨訪3年，繪制生存曲線，分析外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平對MM患者生存情況的影響。

2 結 果

2.1MM組與對照組外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較 MM組外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 MM組與對照組外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較

2.2不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較 DS分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。進一步兩兩比較顯示，不同DS分期患者外周血NLR、血清β2-MG、LDH水平：Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較

2.3NLR水平與MM患者免疫表型及細胞遺傳學的關系分析 MM組中233例患者外周血NLR中位值為1.96，以NLR中位水平作為分組標準，將233例MM患者分為高NLR組(n=72)與低NLR組(n=161)。比較發現，高NLR組患者CD56、TP53、RB-1以及復雜核型檢出率均高于低NLR組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 NLR水平與MM患者免疫表型及細胞遺傳學的關系分析[n(%)]

2.4血清β2-MG水平與MM患者免疫表型及細胞遺傳學的關系分析 MM組患者血清β2-MG中位水平為3.94 mg/L，以此作為分界點，將233例MM患者分為β2-MG高水平組(n=55)與β2-MG低水平組(n=178)。比較發現，β2-MG高水平組TP53、RB-1以及復雜核型檢出率均高于β2-MG低水平組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 血清β2-MG水平與MM患者免疫表型及細胞遺傳學的關系分析[n(%)]

2.5血清LDH水平與MM患者免疫表型及細胞遺傳學的關系分析 233例MM患者血清LDH中位水平為196.69 U/L，以此作為分組標準，將其分為血清LDH高水平組(n=89)與LDH低水平組(n=144)，比較發現，LDH高水平組CD56、TP53、RB-1以及復雜核型檢出率均高于LDH低水平組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 血清LDH水平與MM患者細胞表型及細胞遺傳學的關系分析[n(%)]

2.6外周血NLR、β2-MG以及LDH水平與MM患者預后的關系 隨訪3年，繪制生存曲線發現，高NLR組MM患者中位生存時間為13個月，低NLR組MM患者中位生存時間為24個月，兩組生存曲線比較差異有統計學意義(Log-rankχ2=9.577，P<0.05)，見圖1。β2-MG高水平組MM患者中位生存時間為16個月，β2-MG低水平組MM患者中位生存時間為20個月，兩組生存曲線比較，差異有統計學意義(Log-rankχ2=10.156，P<0.05)，見圖2。LDH高水平組MM患者中位生存時間為22個月，LDH低水平組MM患者中位生存時間為21個月，兩組生存曲線比較差異有統計意義(Log-rankχ2=4.177，P=0.041)，見圖3。

圖1 不同NLR水平MM患者生存曲線

圖2 不同β2-MG水平MM患者生存曲線

圖3 不同LDH水平MM患者生存曲線

3 討 論

MM是一種生物異質性強的血液系統惡性疾病，雖近年來，免疫調節劑、蛋白酶體抑制劑等新藥物的使用大幅度提高了MM的生存率，但MM病死率依舊較高，借助可靠的指標有效預測MM預后，在指導臨床治療工作中具有重要價值。

隨著FISH、GEP等技術的不斷發展，細胞遺傳學與MM之間的關系已逐步明了，細胞遺傳學也被證實為影響MM患者預后的重要因素[10]。有學者研究發現，MM患者常伴有一個或多個細胞遺傳學異常，其中1q、IgH、RB-1以及TP53陽性等被證實為高危遺傳學異常，是影響患者預后的獨立危險因素[11]。但細胞遺傳學檢查對檢測條件要求高，檢測費用高，在臨床中并不適用。血生化指標的檢測具有取材方便、步驟簡單的優勢，是許多疾病診斷、病情及預后判斷的常用輔助手段。

本研究以外周血NLR及血清β2-MG、LDH作為研究指標。其中NLR是反映機體免疫炎癥狀態的敏感指標，而腫瘤的發生及發展與機體免疫調劑功效間關系密切。淋巴細胞及中性粒細胞是機體免疫系統中重要的組成部分[12]。有研究表明，實體腫瘤中NLR值異常上升一般預示著預后不良。孫磊[13]研究發現，NLR>2.61是影響MM患者預后的獨立危險因素。血清β2-MG是一種單鏈多肽低分子蛋白，是組織相容性抗原Ⅰ，在正常生理條件下，β2-MG進入血液循環后以非蛋白結合狀態存在，經腎小球基底膜過濾后可被腎小管重吸收，進一步被降解，其血清水平維持穩定。但當機體發生惡性病變時，血清β2-MG水平將異常升高，這與惡性腫瘤異常增生，導致細胞被大量破壞，促進β2-MG釋放，并且腫瘤自身也合成大量β2-MG等因素有關。張蘊玉等[14]研究表明，β2-MG在預測MM患者近期療效中的靈敏度及特異度分別為89.3%與73.6%，曲線下面積為0.865，提示血清β2-MG在反映MM療效中的價值較高。LDH廣泛分布于人體心、肝、腎等多種器官，是反映細胞代謝狀態的敏感指標，有研究表明，惡性腫瘤細胞內基因失調將增加LDH的合成及釋放，進而導致血清中LDH水平上升[15]，故LDH在反映惡性腫瘤病情及預后中也具有一定價值。

本研究發現，與對照組相比，MM組患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH水平均異常升高，且隨著DS分期的增加，MM組患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平均隨之上升。這說明外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情中具有一定價值。根據MM組患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH中位水平，將其依次劃分為高、低水平的各個亞組。在檢測各亞組細胞遺傳學以及免疫表型中發現，高NLR組患者CD56、TP53、RB-1以及復雜核型檢出率均顯著高于低NLR組(P<0.05)；β2-MG高水平組TP53、RB-1以及復雜核型檢出率顯著高于β2-MG低水平組(P<0.05)；LDH高水平組CD56、TP53、RB-1以及復雜核型檢出率均顯著高于LDH低水平組(P<0.05)；提示MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其細胞遺傳學及免疫表型異常發生率越高。受限于研究設計及條件，本研究并未對其中的原因進行探討。此外，本研究進行了為期3年的隨訪，繪制生存曲線發現，高NLR、β2-MG高水平組以及LDH高水平組生存時間均明顯短于各低水平亞組，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在預測MM患者預后中具有一定的價值。

綜上所述，MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其發生細胞遺傳學及免疫表型異常的概率越大，生存時間也越短，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情及預后中具有一定的價值。