GPX-1基因Pro198Leu多態性與缺血性腦卒中相關性研究

徐秀芝　祝鴻雁

摘要：目的：探討谷胱甘肽過氧化物酶（GPX-1）基因Pro198Leu多態性與缺血性腦卒中的相關性。方法：選取我院神經內科2020年6月～2021年6月收治的缺血性腦卒中患者100例作為觀察組，依據是否合并糖尿病分為合并糖尿病組（合并組）與未合并糖尿病組（未合并組），選取入院體檢的健康人群60例作為對照組，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-HFLP）技術檢測其GPX-1基因Pro198Leu多態性并對比各組Pro198Leu多態性基因型與等位基因分布情況。結果：觀察組與對照組Pro198Leu 多態性基因型頻率和等位基因頻率差異均有統計學意義（P<0.05）。合并組、未合并組間Pro198Leu 多態性基因型頻率和等位基因頻率差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：缺血性腦卒中發病風險與GPX-1基因Pro198Leu多態性相關，與是否合并糖尿病無關。

關鍵詞：谷胱甘肽過氧化物酶;基因Pro198Leu多態性;缺血性腦卒中;糖尿病

缺血性腦卒中（acute ischemic stroke，AIS） 是臨床常見卒中類型，其發病率、致死率和致殘率在世界范圍內均處于較高水平，嚴重危害人類生命安全。近年來，受飲食習慣改變、生活壓力增大和人口老齡化加劇等諸多因素影響，AIS的患病率呈明顯升高態勢，防控形勢日益嚴峻。如何有效降低AIS的發病率，改善患者生存質量是當前研究的熱點問題。氧化應激是AIS發生發展的重要環節，其中谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase-1，GPX-1）是一種重要的抗氧酶，可催化脂質過氧化物、氨基酸氫過氧化物、蛋白質的還原反應發揮抗氧化作用。既往研究證實GPX-1的活性與多種心血管疾病密切相關，且受多種因素調節，GPX-1基因Pro198Leu多態性能通過影響紅細胞內硒含量最終改變氧化應激水平。但目前GPX-1基因Pro198Leu多態性與AIS的關系仍不明確。本研究旨在探討GPX-1基因Pro198Leu多態性與缺血性腦卒中的相關性，以期為為研究缺血性腦卒中的遺傳學發病機制提供更多依據。

1 資料與方法

1.1一般資料? 選取我院神經內科2020年6月～2021年6月收治的缺血性腦卒中患者100例作為觀察組，其中男52例，女56例，年齡42～80歲，平均（54.69±9.48）歲。依據是否合并糖尿病分為合并糖尿病組（合并組，32例）與未合并糖尿病組（未合并組，68例），糖尿病診斷標準依據1999年WHO發布的相關標準。納入標準：①符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》中診斷標準，且有明確AIS臨床癥狀或體征;②入院時均意識清楚，入院時間均發病至入院2周內;③經頭顱CT排除腦出血。排除標準：①合并其他神經系統疾病者;②病情危重、伴失語或存在嚴重認知障礙者;③既往或當前伴精神疾病（抑郁癥、精神分裂癥、癲癇等）者。選取入院體檢的健康人群60例作為對照組，其中男32例，女28例，年齡45～80歲，平均（53.98±9.62）歲。該研究經醫學研究倫理委員會審核同意，入選者簽署知情同意書。

1.2 研究方法? 采用PCR-HFLP技術檢測各組GPX-1基因Pro198Leu多態性并對比Pro198Leu多態性基因型與等位基因分布情況。實驗步驟：制備基因組DNA→PCR擴增目的基因片→擴增產物限制性內切酶→酶切產物電泳測序（將酶切結果顯示為不同基因型并各取2分，行PCR擴增，每份總體系20μl，共6份，后聯同引物測序）。

1.3 ?統計學方法? 采用SPSS20.0分析，計量資料呈正態分布時以（）表示，組間采用t檢驗，不符合正態分布時采用中位數和四分位數表示，組間比較采用MannWhitney U檢驗，分類計數資料以例數及百分比表示，采用χ檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1GPX-1基因Pro198Leu測序結果? GPX-1基因Pro198Leu測序結果顯示在觀察組中檢出CC基因型56例，CT基因型33例，TT基因型11例，在對照組中檢出CC基因型46例，CT基因型9例，TT基因型5例。

2.2觀察組與對照組基因型及等位基因頻率比較觀察組與對照組Pro198Leu 多態性基因型頻率和等位基因頻率差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.3合并組與未合并組基因型及等位基因頻率比較合并組、未合并組間Pro198Leu 多態性基因型頻率和等位基因頻率差異均無統計學意義（P>0.05），見表2。

3 討論

AIS發病與多種因素有關，其具體發病機制仍未完全闡明。結合臨床實踐我們發現，部分病程較長病情較差者未并發并發癥，但病程較短且病情較好者卻在早期出現相關并發癥，提示基因調控可能在AIS發病過程中發揮作用。現有研究認為遺傳、環境等因素可能在AIS發病中發揮重要作用，其中氧化應激可能與AIS發病密切相關，對抗氧化相關基因的研究可能為AIS的治療中提供新的方向。

目前人類已發現5種GPX同工酶，其中GPX-1（細胞質GPX）、GPX-4被證實與多種慢性疾病的發生發展有關。GPX-1是一種關鍵的抗氧化酶，在同工酶超家族中分布最為廣泛。正常情況下人體內氧化代謝會產生一定量的活性氧自由基，GPX等抗氧化酶系統能通過清除活性氧自由基使其處于相對較低水平。但在特定病理狀態下會破壞體內氧化與抗氧化平衡，誘發硬化應激反應，造成機體組織及細胞損傷，提高GPX-1活性可有效抑制細胞凋亡，減輕DNA損傷。GPX-1基因處于3號染色體斷臂上，包括1個內含子與2個外顯子，目前發現該基因存在多個多態性位點，其中有關Pro198Leu的研究相對較多，198位點上包括CC、CT、TT三種等位基因型。本研究發現，觀察組（AIS患者）與對照組GPX-1基因Pro198Leu多態性基因型與等位基因分布有明顯差異，其中觀察組CT、TT基因型和T等位基因頻率均明顯高于對照組，提示上述個體可能存在較高的AIS發生風險。本研究還發現，GPX-1基因Pro198Leu多態性與AIS患者是否合并糖尿病無關，GPX-1基因Pro198Leu測序可能在評估AIS是否并發糖尿病中無明顯作用，其原因可能與GPX-1基因Pro198Leu多態性受多種因素影響有關。

綜上所述，缺血性腦卒中發病風險與GPX-1基因Pro198Leu多態性相關，即GPX-1基因Pro198LeuCT、TT基因型個體者較其他人群更易發生缺血性卒中，而與是否合并糖尿病無關。

基金項目：黑龍江省衛生健康委課題：課題編號2019-151

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