石仙桃總黃酮提取工藝及體外抗氧化性研究

林繼輝,謝冰冰,馮慶玲,戴玉梅

(閩南科技學(xué)院 生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院, 福建 南安 362332 )

石仙桃(PholidotachinensisLindl )，石蘭科石仙桃屬植物[1]；我國(guó)西南、華南和臺(tái)灣地區(qū)均有分布[2]，為藥食兩用食材[3]，藥理活性優(yōu)越市場(chǎng)需求量大，相關(guān)的鑒定研究較少[4]、易與石斛等混淆[5].石仙桃的主要成分有萜類、多糖、酚類、黃酮、香豆素等，其中總黃酮以環(huán)石仙桃萜醇、環(huán)石仙桃萜酮為主，具有治療高熱、頭暈[6]、咳血[7]、增強(qiáng)免疫力[8]等作用.據(jù)國(guó)內(nèi)外研究表明石仙桃具有生物活性[9]、抗氧化活性、抗癌性[10]，從中提取的部分新化合物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株具有良好的抗增殖能力[11].由此可見(jiàn)，石仙桃提取物的開發(fā)研究對(duì)人類生命健康安全具有積極作用.

黃酮類化合物在蔬菜、水果、中草藥的根、莖、葉中均有分布，是植物新陳代謝的一級(jí)代謝產(chǎn)物[12].絕大多數(shù)黃酮類物質(zhì)可以通過(guò)清除自由基而具有抗氧化性，而部分黃酮類物質(zhì)因其不同結(jié)構(gòu)而產(chǎn)生一定的抑制癌細(xì)胞增殖作用[13].因此研究石仙桃總黃酮的提取有利于天然藥物化學(xué)的研究，為天然抗氧化物質(zhì)的開發(fā)具有積極的意義.

目前國(guó)內(nèi)主要的石仙桃總黃酮提取工藝主要有閃式提取法[14]、乙醇回流提取法[15]、超聲波輔助提取法[16]、微波輔助提取法[17]等.其中閃式提取法在提取時(shí)間為 3 min，80%的乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比 35 mL/g 的條件下，其平均提取率為1.52%；乙醇回流提取法在液料比 30 mL/g、65%的乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度 66 ℃ 的條件下提取 151 min，得到的平均提取率為1.23%；微波輔助提取法在液料比為 21 mL/g、60%的乙醇體積分?jǐn)?shù)、功率為 800 W 的條件下置于微波中 63 s，得到的平均提取率為1.52%；超聲波輔助提取法在乙醇體積分?jǐn)?shù)為66%、液料比為 26 mL/g、溫度為 61 ℃ 的條件下超聲 41 min，得到平均提取率為1.76%.

實(shí)驗(yàn)采用超聲波輔助提取石仙桃總黃酮，在傳統(tǒng)4因素3水平的基礎(chǔ)上增加粒徑因素，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝.在最優(yōu)工藝條件下得到的平均提取率為1.80%，相對(duì)于乙醇回流提取法相比，在時(shí)間和效率上有了明顯提高；相較微波法和閃式法時(shí)間偏長(zhǎng)，但提取率明顯優(yōu)于二者；超聲波法相對(duì)于文獻(xiàn)差異不顯著，證明了實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的可靠性，能夠?yàn)槭商铱傸S酮提取工藝的進(jìn)一步研究提供粒徑的數(shù)據(jù)參考.在最優(yōu)工藝下提取總黃酮，并對(duì)粗提物，以抗壞血酸威陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行抗氧化性能測(cè)試，得出石仙桃總黃酮對(duì)DPPH自由基具有良好的清除作用，并且粗產(chǎn)品具有一定的穩(wěn)定性，有利于進(jìn)一步的純化加工.實(shí)驗(yàn)彌補(bǔ)了文獻(xiàn)粒徑篩選數(shù)據(jù)上的空白，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法，為進(jìn)一步的研究提供理論依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 主要材料、藥品及儀器

石仙桃(購(gòu)于廣西百色)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(UV≥98%，合肥博美生物科技有限責(zé)任公司)、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、硫酸鐵、水楊酸(以上均為分析純，配成不同濃度使用)、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、30%過(guò)氧化氫溶液、L(+)-抗壞血酸(UV≥99.7%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；

KQ-400E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、EL104型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)、V-1100D型分光光度計(jì)(MAPADA)、DGX-9053B型鼓風(fēng)干燥箱(上海南榮實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司)、600Y型多功能粉碎機(jī)(永康市鉑歐五金制品有限公司)、SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)、FD-1冷凍干燥機(jī)(上海丞明設(shè)備有限公司).

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 材料預(yù)處理

將 5 000.0 g 石仙桃洗凈，切塊自然晾干，于 60 ℃ 烘箱內(nèi)干燥至恒重，得到 404.5 g 干石仙桃假鱗莖，按照藥材粉碎最適含水量小于5%計(jì)算，得出新鮮石仙桃假鱗莖含水量大致為92%.將干石仙桃假鱗莖放入粉碎機(jī)粉碎，過(guò)不同粒徑篩分(0.850、0.425、0.250、0.180、0.150 mm)并分裝入廣口試劑中密封保存?zhèn)溆?

1.2.2 提取方法

稱取 0.180 mm 石仙桃粉末 1.00 g 于 100 mL 錐形瓶中，加入一定體積的乙醇水溶液于不同提取溫度的超聲波清洗器中超聲一段時(shí)間，提取結(jié)束后，將粗提液抽濾，并將濾液在 55 ℃ 的條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮.

1.2.3 檢測(cè)原理及方法

采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測(cè)定總黃酮的含量.基于亞硝酸鈉能將黃酮類物質(zhì)還原，并與鋁鹽形成螯和，加入氫氧化鈉使其開環(huán)生成2-羥基查耳酮，呈現(xiàn)出橙紅色[18].該反應(yīng)發(fā)生在黃酮醇類成分中鄰位無(wú)取代的鄰二酚羥基部位，因此不具備此基團(tuán)的脂肪、多糖、蛋白質(zhì)等無(wú)此顯色反應(yīng).采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，在 510 nm 處測(cè)定吸光度.

將1.2.2中獲得的濃縮液移入 50 mL 具塞比色管中，定容至刻度.取 2 mL 于 10 mL 具塞比色管中，添加 0.6 mL 5%亞硝酸鈉，震蕩?kù)o置 6 min.加入 0.6 mL 10%的硝酸鋁，震蕩?kù)o置 6 min.最后加入 3.0 mL 4%氫氧化鈉溶液，定容至刻度，震蕩?kù)o置 15 min，測(cè)定吸光度，后代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(Y=6.684 5X-0.003 3，R2=0.999 5)計(jì)算得出總黃酮的質(zhì)量濃度ρ，并按式子(1)計(jì)算石仙桃總黃酮提取率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果平行測(cè)定3次并取平均值[14,19].

(1)

式中：50為待測(cè)體積(mL)；10為顯色體積(mL)；2為檢測(cè)體積(mL)；ρ為總黃酮質(zhì)量濃度(mg/mL)；m為樣品質(zhì)量(g).

1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn)

1) 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響 稱取 0.180 mm 石仙桃粉 1.00 g 于 100 mL 錐形瓶中，在液料比 25 mL/g、提取溫度 60 ℃ 的條件下超聲 40 min，考查不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液(55%、60%、65%、70%、75%)對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響，以確定最優(yōu)乙醇體積分?jǐn)?shù).

2) 液料比的影響 稱取 0.180 mm 石仙桃粉 1.00 g 于 100 mL 錐形瓶中，在乙醇體積分?jǐn)?shù)65%、提取溫度 60 ℃ 的條件下超聲 40 min，考查不同液料比(15、20、25、30和 35 mL/g)對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響，以確定最優(yōu)液料比.

3) 溫度的影響 稱取 0.180 mm 石仙桃粉 1.00 g 于 100 mL 錐形瓶中，在乙醇體積分?jǐn)?shù)65%、超聲 40 min、液料比 25 mL/g 的條件下，考查不同提取溫度(40、50、60、70和 80 ℃)對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響，以確定最優(yōu)提取溫度.

4) 提取時(shí)間的影響 稱取 0.180 mm 目石仙桃粉 1.00 g 于 100 mL 錐形瓶中，在乙醇體積分?jǐn)?shù)65%、液料比 25 mL/g 的條件下，超聲溫度 60 ℃、液料比 25 mL/g 的條件下，考查不同超聲時(shí)間(20、30、40、50和 60 min)對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響，以確定最優(yōu)提取時(shí)間.

5) 粒徑大小的影響 稱取 1.00 g 石仙桃粉末于 100 mL 錐形瓶中，在乙醇體積分?jǐn)?shù)65%、液料比 25 mL/g、提取溫度 60 ℃、超聲時(shí)間 40 min 的條件下，考查不同粒徑(0.850、0.425、0.250、0.180和 0.150 mm)對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響，以確定最優(yōu)提取時(shí)間.

1.2.5 響應(yīng)面設(shè)計(jì)

利用Design-Expert 8.05b軟件，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以總黃酮提取率為響應(yīng)值.設(shè)計(jì)乙醇體積分?jǐn)?shù),%(A)、液料比,mL/g(B)、超聲溫度,℃(C)、超聲時(shí)間，min(D)、粒徑,mm(E)5因素3水平共46次實(shí)驗(yàn)以獲得最優(yōu)提取工藝條件；因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1.

表1 響應(yīng)面設(shè)計(jì)編碼表

1.2.6 抗氧化研究

1) DPPH自由基清除能力 取一定量的石仙桃粉末，按1.2.2的提取方法減壓濃縮后于冷凍干燥器中冷凍至干，得到總黃酮粗提物.分別取總黃酮粗提物 20 mg，配成ρ為 2 mg/mL 的溶液.分別取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于 10 mL 具塞比色管中，稀釋至刻度，得到分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的樣品待測(cè)液；采用相同方法配制相同濃度的陽(yáng)性對(duì)照VC濃液.

取不同濃度樣品液 2 mL 于 10 mL 具塞比色管內(nèi)，加入 2 mL 0.04 g/L 的DPPH，混合均勻，避光 30 min，于 517 nm 處測(cè)吸光度，記為Ai；另取樣液 2 mL 于試管中，加 2 mL 無(wú)水乙醇，避光 30 min，在 517 nm 處測(cè)吸光度，記為Aj；取 2 mL 0.04 g/L 的DPPH和 2 mL 無(wú)水乙醇于 10 mL 具塞比色管中，于 517 nm 處測(cè)其吸光度，作為參照，記為A0.抗壞血酸(VC)為陽(yáng)性對(duì)照，DPPH自由基清除率的計(jì)算如公式(2)[20-22].

(2)

2) 羥基自由基清除能力 按(1)方法配制0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/mL 的待測(cè)液.依次加入 0.3 mL 6 mmol/L 的硫酸亞鐵和 0.5 mL 6 mmol/L 的水楊酸-乙醇溶液于 10 mL 具塞比色管中.加入 1 mL 待測(cè)液及 2 mL 蒸餾水.最后用 0.3 mL 6 mmol/L 過(guò)氧化氫啟動(dòng).于 37 ℃ 下水浴 30 min，在 510 nm 處測(cè)定吸光度，記為AX；以蒸餾水代替樣品液記為A0；不加過(guò)氧化氫的測(cè)定吸光度并記錄為Ax0.以抗壞血酸VC為陽(yáng)性對(duì)照，以空氣為校準(zhǔn)值，羥基自由基清除率按照公式(3)計(jì)算[21].

(3)

1.2.7 數(shù)據(jù)處理

單因素實(shí)驗(yàn)、響應(yīng)面及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)以同一比色管中的溶液平行測(cè)定3次，抗氧化性及標(biāo)準(zhǔn)曲線以同一比色皿中的溶液校準(zhǔn)后平行測(cè)定3次，各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差來(lái)表示并用作響應(yīng)面進(jìn)行方差分析，采用Excel制圖.

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響

由圖1可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在55%～65%變化時(shí)，石仙桃總黃酮提取率隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加而遞增，在65%時(shí)達(dá)到最高；這主要是由于當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)小于65%時(shí)，溶液的極性隨乙醇體積分?jǐn)?shù)增加而減弱，能夠促進(jìn)黃酮類物質(zhì)溶解；但當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于65%時(shí)，提取率隨之遞減.而當(dāng)乙醇的濃度超過(guò)65%時(shí)，溶劑的極性進(jìn)一步降低后親脂性物質(zhì)的溶解度增加[23]，與黃酮競(jìng)爭(zhēng)溶出，同時(shí)植物細(xì)胞內(nèi)部的蛋白質(zhì)因發(fā)生變性凝固，形成傳質(zhì)阻力不利于黃酮類物質(zhì)溶出[24]，最終導(dǎo)致提取率有所下降.因此確定最優(yōu)乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%.

圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取率的影響

2.1.2 液料比的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2，由圖可知當(dāng)液料比在15～25 mL/g 時(shí)，提取率隨液料比的增加而提高；在液料比達(dá)到 25 mL/g 時(shí)達(dá)到最值；當(dāng)液料比超過(guò) 25 mL/g 時(shí)，提取率隨液料比的增加而降低.這是由于當(dāng)液料比小于 25 mL/g 時(shí)，石仙桃粉末與溶劑的接觸不充分，不利于黃酮的溶出，隨著溶劑增多，石仙桃粉末中總黃酮的內(nèi)外濃度差增加，促進(jìn)了總黃酮的溶出，因而提取率升高，在液料比為 25 mL/g 時(shí)達(dá)到最值1.8%；當(dāng)液料比超過(guò) 25 mL/g 時(shí)，由于物料中提取物含量有限，即使溶劑增加對(duì)提取率的改變不大，反而使其它物質(zhì)溶出對(duì)提取率造成影響[24]，導(dǎo)致提取率減小，因此確定液料比 25 mL/g 為最優(yōu)條件.

2.1.3 提取溫度的影響

由圖3可知，當(dāng)超聲提取溫度小于 60 ℃ 時(shí)，石仙桃總黃酮提取率隨提取溫度上升而增加，在提取溫度為 60 ℃ 時(shí)達(dá)到最值；當(dāng)超聲溫度大于 60 ℃ 時(shí)，提取率隨溫度上升反而減小.這是因?yàn)椋?dāng)溫度在一定范圍內(nèi)變化時(shí)，溫度增加促進(jìn)黃酮類化合物分子的熱運(yùn)動(dòng)有利于其溶出，在 60 ℃ 時(shí)提取率達(dá)到最高，而當(dāng)溫度過(guò)高時(shí)，會(huì)加快乙醇溶劑的揮發(fā)和其它物質(zhì)的溶出從而影響其提取率，因而導(dǎo)致提取率降低，因此確定最優(yōu)超聲提取溫度 60 ℃.

圖2 液料比對(duì)總黃酮提取率的影響

圖3 溫度對(duì)總黃酮提取率的影響

2.1.4 時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4，由圖可知當(dāng)超聲時(shí)間低于 40 min 時(shí)，提取率隨超聲時(shí)間增加而上升，超聲時(shí)間在 40 min 時(shí)達(dá)到最高值；這是由于超聲時(shí)間的增加有利于物料與溶劑的接觸，在超聲波的協(xié)同下有利于內(nèi)部有效物質(zhì)的溶出[15,24].而當(dāng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，部分黃酮類物質(zhì)被超聲波的空化或熱效應(yīng)破壞，而導(dǎo)致提取率下降，故超聲波時(shí)間 40 min 為最優(yōu)條件.

2.1.5 粒徑大小的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5，由圖可知當(dāng)粒徑 0.180 mm 以下時(shí)，提取率隨粒徑的減小而增加，在 0.180 mm 達(dá)到最值，粒徑小于 0.180 mm 時(shí)有所回落.其原因在于，當(dāng)石仙桃顆粒過(guò)大時(shí)，石仙桃粉末與溶劑之間的接觸面積過(guò)小，從而導(dǎo)致接觸不充分，隨粒徑的減小，接觸面積增加，促進(jìn)了黃酮類物質(zhì)的溶解，粒徑在 0.180 mm 時(shí)達(dá)到頂峰，而篩目過(guò)大，導(dǎo)致粉末過(guò)細(xì)，使黃酮類物質(zhì)易在空氣中氧化，且受到超聲波空化及熱效應(yīng)的影響，最終導(dǎo)致提取率降低，因此粒徑對(duì)石仙桃總黃酮提取率影響的最優(yōu)條件為 0.180 mm .

圖4 超聲時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響

圖5 粒徑大小對(duì)總黃酮提取率的影響

2.2 響應(yīng)面結(jié)果分析

2.2.1 響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在單因素的基礎(chǔ)上，以石仙桃總黃酮提取率為響應(yīng)值，利用Design-Expert 8.05b軟件對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)的提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表2

2.2.2 模型建立極顯著性分析

利用響應(yīng)面軟件對(duì)表2的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行五元二次回歸擬合處理，得到回歸模型方程：Y提取率=1.83+0.098A+0.0.094B-0.12C+0.012D-0.065E-0.061AB+0.09AC-0.11AD-0.039AE+0.027BC-0.001BD-0.090BE+0.14CD+0.046CE-0.056DE-0.24A2-0.25B2-0.22C2-0.21D2-0.19E2

表3 方差分析

續(xù)表3

由F值和P值可知，各主因素的影響順序?yàn)椋簻囟?乙醇體積分?jǐn)?shù)>液料比>粒徑>超聲時(shí)間.回歸方程一次項(xiàng)A、B、C、E極顯著(P<0.01)，二次項(xiàng)AC、AD、BE、CD、A2、B2、C2、D2、E2極顯著(P<0.01)；AB、DE顯著(P<0.05)；一次項(xiàng)D，交互項(xiàng)BD、BC不顯著(P>0.05)，說(shuō)明各因素與提取率之間并非簡(jiǎn)單的線性關(guān)系.

2.2.3 各因素間的交互關(guān)系

圖6為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中各因素交互關(guān)系的響應(yīng)面圖.通過(guò)響應(yīng)面圖可以間接的判斷各因素間影響的主次關(guān)系以及因素間的交互作用強(qiáng)弱[24]；同時(shí)還可以從端點(diǎn)高低(坡度)[25]、等高線離心率大小、等高線疏密程度[24]及交互項(xiàng)F值大小判斷，而獲知各因素的交互作用對(duì)總黃酮提取率影響的相對(duì)顯著性.由圖6e，6f的響應(yīng)面等高線離心率都偏小，圖形接近圓，說(shuō)明液料比對(duì)溫度、粒徑的交互作用不顯著，與方差分析的結(jié)果相一致；圖6b、6e、6h、6i是有關(guān)溫度與乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間、粒徑交互作用的響應(yīng)面圖，由圖可知沿溫度方向比其它幾個(gè)因素方向坡度更陡，等高線更加密集，說(shuō)明溫度比其它4個(gè)因素對(duì)總黃酮提取率的影響更顯著；同理在圖6a、6c、6f響應(yīng)面中可知沿乙醇體積分?jǐn)?shù)方向比沿液料比、超聲時(shí)間、粒徑坡度更陡，等高線更加密集，說(shuō)明乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取率的影響比液料比、超聲時(shí)間、粒徑更加顯著.同理由圖6f、6g的響應(yīng)面圖和等高線圖可知液料比比超聲時(shí)間、粒徑對(duì)總黃酮提取率的影響更加顯著.綜上可得主次因素順序?yàn)椋簻囟?乙醇體積分?jǐn)?shù)>液料比>粒徑>超聲時(shí)間與表3方差分析表相一致.

圖6 各因素交互作用對(duì)總黃酮提取率的影響

2.2.4 最佳工藝條件的驗(yàn)證

根據(jù)回歸方程和實(shí)際檢驗(yàn)，根據(jù)響應(yīng)面分析得出最佳工藝條件是在60%乙醇、液料比為 25 mL/g、粒徑為 0.180 mm、溫度 60 ℃ 的條件下超聲 40 min.得出響應(yīng)面模型預(yù)測(cè)值為1.83%，而實(shí)際平均值是1.80%，與預(yù)測(cè)的相對(duì)誤差為1.64%，驗(yàn)證模型的有效性以及文獻(xiàn)對(duì)粒徑選擇的合理性.

2.3 抗氧化分析

2.3.1 石仙桃總黃酮DPPH自由基清除能力

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，結(jié)果表明：石仙桃總黃酮和VC對(duì)DPPH·的清除率在0.05～0.8 mg/mL 的范圍內(nèi)呈一定的量效應(yīng)關(guān)系.DPPH·清除率隨著總黃酮濃度和VC的升高而增加，即二者呈現(xiàn)出正相關(guān)；對(duì)DPPH·清除的IC50值分別為0.11和 0.052 mg/mL.從抗壞血酸(VC)陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以看出其對(duì)DPPH·的清除明顯優(yōu)于相同濃度的石仙桃總黃酮提取物.

2.3.2 石仙桃總黃酮對(duì)羥基自由基清除能力

從圖8可以看出當(dāng)石仙桃總黃酮和VC在0.00～0.25 mg/mL 的范圍內(nèi)，對(duì)·OH清除率隨著總黃酮量和VC的增加而增強(qiáng).總黃酮和VC對(duì)·OH清除的IC50值為0.083和 0.021 mg/mL，說(shuō)明其具有抗氧化活性.

圖7 石仙桃總黃酮和維生素C對(duì)DPPH·的清除能力

圖8 石仙桃總黃酮和維生素C對(duì)·OH清除能力

3 結(jié)語(yǔ)

在傳統(tǒng)4因素3水平的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上增加粒徑作為考查因素，雖響應(yīng)面未能對(duì)工藝進(jìn)行明顯優(yōu)化，但驗(yàn)證了文獻(xiàn)粒徑選擇的合理性，彌補(bǔ)了對(duì)粒徑數(shù)據(jù)上的空白，為進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù)；在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上利用響應(yīng)面優(yōu)化法得到最優(yōu)工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、粒徑 0.180 mm、液料比 25 mL/g、溫度 60 ℃、超聲提取時(shí)間 40 min；在此條件下實(shí)驗(yàn)得出石仙桃總黃酮提取率為1.8%，該工藝相對(duì)于傳統(tǒng)的乙醇回流提取法，提取時(shí)間上有著明顯的提高，并且提取率提高了46.3%.與微波輔助提取法相比，雖然時(shí)間上增加了 39 min，但提取率提高了18.42%.經(jīng)過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)與模型的預(yù)測(cè)值誤差為1.64%，誤差較小，說(shuō)明模可靠；抗氧化性實(shí)驗(yàn)表明石仙桃總黃酮具有較好的抗氧化性，在一定范圍內(nèi)抗氧能力隨濃度的增加而增強(qiáng)，但抗氧化能力低于相等濃度的VC陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)實(shí)驗(yàn)還未對(duì)超聲波功率對(duì)石仙桃總黃酮提取率的影響進(jìn)行探究，需在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中加以完善.