胃癌組織中LINC00152、UBE2Q1 的表達及意義

葉雅麗，阮榮華，蔡莎莎，段達榮，符竣惠

（臺州市第一人民醫院檢驗科1，普外科2，浙江 臺州 318020）

胃癌（gastric cancer）是最常見的消化道惡性腫瘤之一，其發病率和致死率較高，嚴重影響患者生命安全。目前胃癌診斷主要依據臨床癥狀、胃鏡、病理切片、影像學診斷以及CA199 等腫瘤標志物，但胃癌發病初期，并無明顯癥狀，且已知的腫瘤標志物敏感度和特異度均不能滿足臨床需求，容易漏診和誤診。胃鏡為侵入性操作，病理取材為有創性操作，患者難以接受，同時患者出現影像學改變時往往已發展為中晚期階段[1，2]，而中晚期胃癌手術難度高，放化療等治療手段療效有限，且治療費用高，患者耐受性差。因此早期診斷、及時治療是延長患者生存時間、降低治療費用、提高生存質量的關鍵。但目前尚無有效、無創的胃癌早期篩查診斷方法。本研究主要探討長鏈非編碼RNA LINC00152、泛素接合酶E2Q1（ubiqutin-conjugating enzyme E2Q1，UBE2Q1）在胃癌組織中的表達及意義，以期為胃癌腫瘤標志物的挖掘提供基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017 年1 月-2021 年3 月臺州市第一人民醫院收治的79 例首次診斷為胃癌患者的癌組織和遠端癌旁組織，所有患者術前均未進行放化療等任何治療，已排除合并其他腫瘤、術后病理確認為原發性胃癌者。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所獲得的樣本均經過患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 組織標本取材與保存 手術切除胃癌組織，取胃癌組織和距離癌組織距離大于5 cm 的遠端癌旁組織，切成小塊,置于無氮樣品保存液中，-80 ℃凍存。

1.2.2 實時熒光定量PCR 檢測LINC00152、UBE2Q1表達 取出-80 ℃保存的組織標本，解凍后裝入無RNA 酶的EP 管，加入1 ml Trizol 試劑，勻漿，提取總RNA。8 μl 總RNA，加2 μl 逆轉錄酶，配成10 μl體系，逆轉錄為cDNA，逆轉錄條件為：37 ℃15 min（逆轉錄），98 ℃5 min（酶失活），12 ℃0.5 min（保溫）。以逆轉錄所得的cDNA 為模板，設計引物（表1），以GAPDH 為內參，在美國ABI Step One Plus Real Time PCR System 上檢測各樣本中LINC00152、UBE2Q1 的水平，相對表達水平用2-△△Ct表示，△Ct=（Ct目的基因-CtGAPDH）。Trizol 試劑、反轉錄試劑盒、SYBR Green 熒光定量PCR 試劑盒均購自日本TaKaRa 公司。

表1 引物序列

1.3 觀察指標 比較胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達，并分析LINC00152、UBE2Q1 表達與胃癌患者臨床病理因素間的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0 統計學軟件對數據進行分析，非正態分布的計量資料以[M（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組比較采用Kruskal-Wallis 檢驗；計數資料以（n）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達比較 胃癌組織中LINC00152、UBE2Q1 表達高于癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達比較[M（P25，P75）]

2.2 LINC00152、UBE2Q1 的表達水平與胃癌患者臨床病理因素間的關系 LINC00152 表達與分化程度有關，UBE2Q1 表達與TNM 分期、轉移有關（P＜0.05），見表3。

表3 LINC00152、UBE2Q1 的表達水平與胃癌患者臨床病理因素間的關系[M（P25，P75）]

3 討論

LINC00152 位于染色體2p11.2 上，是一種含有828 個核苷酸分子的長鏈非編碼RNA，在多種人類腫瘤中，特別是消化系統惡性腫瘤中高度表達[3]。研究表明[4-6]，LINC00152 通過調控腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡，從而促進腫瘤的發生發展。此外，LINC00152 可通過影響PI3K/AKT、mTOR、NOTCH1等各種信號通路參與多種癌癥的發生，包括肝癌、膽囊癌、結腸癌等[7]。

何美玲等[8]的研究發現，LINC00152 可通過調控vimentin 和N-cadherin 蛋白的表達，促進胰腺癌細胞（MIAPaCa-2）的侵襲和遷移能力。唐世磊等[9]研究表明，LINC00152 在肝癌中異常高表達，高表達與腫瘤TNM 分期呈正相關（P＜0.05），且高表達患者的無病生存時間、總生存期均明顯低于低表達者（P＜0.05）。高希春等[10]通過RT-qPCR 方法檢測了24 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中LINC00152 的表達，結果發現胃癌組織中LINC00152 的表達水平與癌旁組織相比呈顯著高表達（P＜0.01），且LINC00152的表達水平與胃癌臨床病理分期呈正相關（P＜0.05）。Huang Y 等[11]從組織水平、細胞水平和動物模型方面研究了LINC00152 對胃癌增殖的影響，結果表明LINC00152 在胃癌組織中的表達水平明顯高于鄰近正常組織；LINC00152 下調后，胃癌細胞的增殖明顯受到抑制；構建裸鼠異種移植模型，進一步證實了LINC00152 促腫瘤增殖作用。本研究采用RTqPCR 方法檢測了79 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中LINC00152 的差異表達，結果發現胃癌組織中LINC00152表達高于癌旁組織（P＜0.05），且LINC00152 的表達水平與分化程度有關（P＜0.05），與既往研究結果相符[12-14]，提示LINC00152 在胃癌早期篩查診斷中具有一定臨床價值。

UBE2Q1 是一種泛素接合酶，定位于人1 號染色體長臂21 位點，編碼泛素接合酶E2蛋白，E2能促進活化泛素從泛素失活酶（E1）轉移到泛素連接酶（E3），從而影響下游基因，調節細胞生物學行為，在腫瘤中發揮作用[15，16]。UBE2Q1 已被證實在各種類型的癌癥中過度表達，參與肝癌、卵巢癌、結直腸癌等惡性腫瘤的發展和進展，有望成為臨床上潛在的生物標志物和分子治療靶點[17，18]。常仁安[19]研究發現，UBE2Q1 在肝癌組織中的表達高于癌旁組織，且其高表達與肝癌組織學分級有關（P＜0.001）；UBE2Q1在肝癌中的高表達與患者總生存率的降低呈明顯正相關，是肝癌患者預后的獨立指標；此外，細胞實驗發現，抑制UBE2Q1 的表達可以引起肝癌細胞增殖水平下降以及細胞周期的停滯。Topno R 等[20]研究表明，UBE2Q1 是高級別漿液性卵巢癌患者的潛在的預后指標，UBE2Q1 的高表達提示較低的無復發生存率和對鉑/紫杉烷治療的反應結果較差。本研究采用RT-qPCR 方法檢測了79 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中UBE2Q1 的差異表達，結果發現胃癌組織中UBE2Q1 表達高于癌旁組織（P＜0.05），且TNM分期Ⅲ/Ⅳ期患者的UBE2Q1 mRNA 表達水平高于Ⅰ/Ⅱ期，發生轉移患者的UBE2Q1 mRNA 表達水平高于未轉移患者（P＜0.05），表明UBE2Q1 的表達水平與TNM 分期、轉移有關。

綜上所述，LINC00152 和UBE2Q1 在胃癌組織中高表達，有望成為胃癌診斷的生物標志物和腫瘤治療的靶點，但其作用于胃癌的分子機制尚不明確，有待進一步研究。