結直腸癌患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達及其臨床意義

李軍彥 陳文超 李中輝 王騰飛 盧少峰 丁東哲 趙守魁

結直腸癌是臨床上常見的消化系統惡性腫瘤之一，近年來，隨著我國環境的變化和人民生活習慣的改變，該病發病率逐年升高。在早期，患者臨床體征不甚明顯，許多患者以腹痛、消化不良而就診，導致病情延誤。目前對于直腸癌的發生原因尚不明確，雖然通過放療、化療、免疫治療等多種方法不斷改善結直腸癌患者預后，但是手術切除仍是根治結直腸癌的唯一方法，有研究表明，直腸癌Ⅳ期的患者5年生存率低至10%[1]。近年來隨著分子生物學的飛速發展，越來越多的指標被發現在臨床評價直腸癌患者病情發生和發展中具有重要意義。基質金屬蛋白酶7(MMP7)屬于分泌型的蛋白，一般表達在細胞腺上皮，在腫瘤組織中由腫瘤細胞表達，因此在多種惡性腫瘤中均存在表達升高。Survivin屬于新型凋亡抑制蛋白，可以抑制細胞凋亡并對細胞分裂進行調節，多數在細胞G2/M期表達，能夠與有絲分裂過程中紡錘體微管相結合，有研究指出其表達異常是結直腸癌發生早期必然事件，因此對于腫瘤預后具有一定的判斷價值[2]。過氧化物酶增殖物激活受體屬于核轉錄因子，生理狀態下可以參與人體脂肪細胞分化與脂質代謝，通過與其配體結合可以誘導細胞分化與凋亡，因此對于腫瘤生長和增殖具有一定的價值。透明質酸受體屬于可以介導細胞與細胞、細胞和細胞外基質黏附并作用的黏附分子，廣泛存在于各種細胞表面跨膜蛋白，其中CD44v7是變異型的透明質酸受體，其表達同腫瘤發生、發展以及轉移之間關系密切[3]。本研究分析了MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達水平變化對結直腸癌患者病情發生與發展的影響，現將結果進行如下報告。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集了我院在2015年7月至2016年12月期間接受治療的結直腸癌患者89例，其中男性46例，女性43例，平均年齡(63.72±8.93)歲。TNM分期：Ⅰ期患者22例，Ⅱ期患者21例，Ⅲ期患者22例，Ⅳ期患者24例。同時選取88例正常健康體檢者作為對照組，其中男性45例，女性43例，平均年齡(64.86±9.53)歲。納入標準：①結直腸癌患者符合結直腸癌的相關診斷標準。②患者及家屬知情并同意。2組研究對象的一般資料比較，無統計學差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法 抽取2組研究對象空腹靜脈血5 ml，以2000 r/min離心30 min后分離血清待檢，采用免疫組織化學法測定血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達情況，嚴格按照試劑盒說明書操作，試劑均由北京中杉生物技術有限公司提供。

1.2.2 治療方法 手術方法：89例結直腸癌患者均采取開腹直腸癌切除治療，具體操作如下：取患者截石位，麻醉后進入腹腔，對是否存在遠處轉移和腫瘤的局部狀況進行確認了解。在患者的近端腸管開展結扎，充分暴露腸系膜下血管根部，然后切斷并游離Toldt間隙，將直腸和系膜游離至腫瘤的遠端5 cm處后，開展Dixon手術。使用閉合器關閉遠端腸管，在離斷腸管后行端端吻合，再采用Miles手術將患者肛門挖除并在近端腸管造瘺，術后均給予常規的抗炎支持。

化療方法：采用卡培他濱聯合奧沙利鉑治療，奧沙利鉑130 mg/m2+5%葡萄糖注射液500 ml靜脈滴注治療，時間控制在3～4 h，d1，停藥20 d，3個周期后觀察患者的臨床療效。

1.2.3 隨訪方法 定期進行電話、家訪或者微信等形式隨訪，內容主要包括患者的生活質量、不良反應及生存時間等情況，并將結果錄入計算機后進行相關的分析。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 2組血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率比較

結直腸癌患者血清中MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于對照組，具有統計學差異(P<0.05)，見表1。

表1 2組血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達情況比較(例，%)

2.2 直腸癌不同階段患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率比較

對腫瘤患者進行TNM分期后發現，Ⅲ～Ⅳ期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，見表2。

表2 不同分期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達情況比較(例，%)

2.3 血清MMP7、CD44v7、Survivin和PPARγ陽性表達與腫瘤患者死亡的關系

治療后4年進行隨訪，死亡37例(41.6%)。死亡患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率均明顯高于存活患者(P<0.05)。以死亡為應變量(1=存活，2=死亡)，各因子表達為自變量進行回歸分析，發現Survivin陽性表達與腫瘤患者治療后4年死亡密切相關(P<0.05)，見表3、表4。

表3 血清MMP7、CD44v7、Survivin和PPARγ陽性表達與腫瘤患者死亡的關系(例，%)

表4 各因子陽性表達與腫瘤患者死亡關系

3 討論

腸癌是一種屬于大腸中直乙交界部位到肛管之間的惡性腫瘤，是臨床上常見的消化系統惡性腫瘤之一，近年來直腸癌發病率呈現升高的趨勢。有報道顯示大腸癌發病率在全球范圍內位列所有惡性腫瘤的第3位，在消化道腫瘤中位列第2位[4]。直腸癌有增生-腺瘤-惡性腫瘤的演變過程，雖然該病的發病機制尚未十分明確，但是目前可知其應該是與遺傳易感性、生活習慣改變等多種因素相關。采用手術治療是目前臨床上根治直腸癌的主要方法，但是由于人體直腸和附近的臟器缺乏漿膜層的覆蓋，以致直腸部位腫瘤容易出現浸潤，因此需要對直腸癌患者進行全面的綜合治療[5]。近年來隨著分子生物學發展，越來越多的分子生物學指標在結直腸癌發生發展和預后評判方面發揮重要作用，為臨床提供指導。

MMP7屬于MMPs家族中分子量最小的分泌型蛋白，通過活化可以降解細胞外基質，其細胞外基質水解和降解的活性極強，同時具備較強的底物特異性，能夠對膠原、可溶性彈性蛋白、蛋白多糖的底物進行水解與降解，有報道指出在多種腫瘤組織中呈現特異性表達，尤其和結直腸癌的侵犯和轉移關系密切[6]。Survivin是目前發現的凋亡抑制因子，可以同Caspases基因結合并抑制活性，對細胞周期進程進行調節，參與到受體介導信號傳導途徑中，結直腸癌腫瘤細胞通過對Survivin過量表達會上調細胞有絲分裂抗凋亡作用，可以保持腫瘤細胞增殖與生長[7]。有學者報道Survivin同結直腸癌病理分級、淋巴結轉移及腫瘤分期密切相關，Survivin在結直腸癌組織中高度表達，但是在癌旁組織中則未發現[8]。CD44屬于具有多種功能、多結構細胞表面跨膜糖蛋白，是未分類細胞黏附分子，可以促進腫瘤細胞和血管內皮細胞的黏附及對細胞基底膜的浸潤，對細胞的骨架蛋白分布和構型產生影響，加強了腫瘤細胞的運動能力，促進腫瘤細胞發生轉移[9]。有報道指出CD44v7是淋巴細胞歸巢受體，可以參與到淋巴細胞激活過程，被激活的淋巴細胞與轉移的腫瘤細胞可以通過CD44v7進行結合在淋巴細胞特異性受體導致在腫瘤細胞在淋巴結生長分化[10-11]。PPARγ具有廣泛的生物學功能，可以對脂肪與糖代謝和脂肪細胞分化以及單核細胞成熟過程進行調控，同時可以誘導細胞凋亡并抑制體內炎癥反應過程，在一定程度對腫瘤細胞分化、凋亡以及腫瘤血管生成產生影響[12-13]。有報道指出PPARγ可以結合相應配體發揮抑制腫瘤生長作用，被激活后下調Bcl-2家族蛋白發揮促凋亡作用，因此該通路被認為是誘導結直腸癌腫瘤細胞凋亡的途徑之一[14-15]。

本研究顯示，結直腸癌患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于對照組，說明在結直腸癌患者中存在血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ高表達。對腫瘤患者進行TNM分期后發現，Ⅲ～Ⅳ期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率較Ⅰ～Ⅱ患者明顯增高，說明患者分期越晚血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性率升高越顯著。通過長期隨訪發現，死亡患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率均明顯高于存活患者，而回歸分析顯示Survivin陽性表達與腫瘤患者死亡的密切相關，說明血清Survivin陽性表達對結直腸癌預后的判斷更具臨床價值。本研究優勢在于證實了血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ對結直腸癌患者預后具有一定的判斷意義，但是本研究入組病例有限，影響因素未能完全排除，因此還需擴充病例進行深入論證分析。

綜上所述，MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達水平變化可以有效地提示患者疾病的發生發展程度，為下一步更好的治療提供了保障。