MTHFR基因多態性與乳腺癌內分泌治療藥物引發子宮內膜病變的相關性分析

王書芬 杜新峰 程偉巖 倪 猛

乳腺癌屬于婦科惡性腫瘤，大部分乳腺癌患者屬于激素依賴型，其發生發展受內分泌影響和調控[1]。內分泌治療是目前針對激素受體陽性的乳腺癌患者的常見治療方式[2]。目前常見的內分泌治療藥物-選擇性雌激素受體調節藥(selective estrogen receptor modulators，SERMs)如他莫昔芬(tamoxifen)、櫞酸托瑞米芬 (toremifene) 可以抑制雌激素受體(ER)陽性的乳腺癌細胞生長，刺激ER陽性的子宮內膜細胞增生，子宮內膜腺體表現囊性擴張樣水腫或形成息肉，子宮內膜呈現息肉-增生-惡性變等多樣的變化[3-4]。對于內分泌治療藥物引起的子宮內膜病變，常采用診斷性刮宮治療，但是患者的治療依從性較差[5]。5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)MTHFR有多個單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNPs)位點，其中C677T、A1298C位點屬于臨床上兩個重要的多態位點，是葉酸代謝的關鍵酶，與患者子宮內膜癌的關系密切[6]。因此本研究將探索C677T、A1298C位點SNPs與SERMs相關子宮內膜病變的相關性，以期達到預防乳腺癌內分泌治療藥物引發的子宮內膜病變的目的。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選2018年1月至2020年12月本院收治乳腺癌患者80例。納入標準：①符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范》[7]關于乳腺癌的診斷標準，并經病理細胞學診斷證實； ② 患者經他莫昔芬或托瑞米芬藥物治療超過1年；③患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標準：① 已使用過促黃體生成素釋放激素類似物患者；②合并其他惡性腫瘤患者；③患者已切除子宮、卵巢。

1.2 MTHFR基因檢測

采集患者靜脈血5 ml，并采用全血DNA試劑盒(QIAamp DNABlood MiniKit)提取DNA，經PCR熒光定量分析儀(BIO-Rad CFX-96)分析，PCR擴增條件：95 ℃變性15 s，60℃延伸60 s，循環20次，然后90 ℃變性30 s，60 ℃延伸90 s，循環30次。擴增產物經自帶軟件分析樣本位點基因型，其中 MTHFR 基因 C677T 位點的 FAM 通道標記的為突變型(T)，HEX通道標記的為野生型(C)；檢測 MTHFR 基因 A1298C 位點的 FAM 通道標記的為野生型(A)，HEX 通道標記的為突變型(C)。

引物如下：CT677T 上游：5'-AAGCTGCGTGATGATGAAATCG-3'，下游：5'-CTCCCGCAGACACCTTCTCC-3'；A1298C上游：5'-AACGAAGACTTCAAAGACACTT-3'，下游：5'-CTTCACTGGTCAGCTCCTCCCC-3'。

1.3 子宮內膜病變觀察

B超檢查觀察子宮內膜厚度，統計行陰道診刮患者例數，計算子宮內膜診刮率。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 MTHFR基因SNPs與子宮內膜厚度的關系

MTHFR基因CT677T位點各基因型患者間子宮內膜厚度的差異顯著，具有統計學意義(P<0.05)，對于CT677T，在T顯性模式下，即C/T、T/T基因型患者子宮內膜厚度均大于C/C基因型患者，C/T基因型子宮內膜厚度大于C/C基因型(P<0.05)。MTHFR基因A1298C位點各基因型患者間子宮內膜厚度的差異，無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 MTHFR基因SNPs與子宮內膜厚度的關系

2.2 MTHFR基因SNPs與子宮內膜診刮率的關系

MTHFR基因CT677T位點各基因型患者間子宮內膜診刮率的差異有統計學意義(P<0.05)，其中，C/T基因型患者子宮內膜診刮率高于A/A及C/C基因型(P<0.05)。MTHFR基因A1298C位點各基因型患者間子宮內膜診刮率差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3 MTHFR基因SNPs與不同內分泌藥物子宮內膜厚度的關系

同一基因型患者不同藥物組間子宮內膜厚度差異無統計學意義(P>0.05)，對于CT677T，C/T基因患者的子宮內膜厚度比C/C和T/T型厚(P<0.05)，見表3 。

表3 MTHFR基因SNPs與不同內分泌藥物子宮內膜厚度的關系

3 討論

他莫昔芬及枸櫞酸托瑞米芬在抑制ER陽性乳腺癌細胞生長的同時，也刺激ER陽性子宮內膜細胞增生[8]。研究證實，乳腺癌患者手術后口服他莫昔芬引起子宮內膜增生的發病率為4.7%～16%，SERMs可在乳腺腫瘤組織中發揮抗雌激素作用，在子宮內膜組織中發揮弱雌激素作用，從而引起子宮內膜病變[9-11]。目前臨床上常選擇通過暫停內分泌治療及刮宮來降低子宮內膜厚度[12]。

葉酸是水溶性維生素中的一種，即維生素B9，主要參與機體DNA合成、蛋白質代謝、胚胎發育等過程[13-14]。MTHFR是葉酸代謝的關鍵酶，參與DNA的合成和修復及甲基化過程[15]。MTHFR有多個SNPs位點，其中C677T、A1298C位點屬于臨床上兩個重要的多態位點，其中677位的C突變為T，促使第222位丙氨酸轉化為纈氨酸，1298位的A突變為C，促使谷氨酸轉變為丙氨酸[16-18]。在葉酸代謝過程中，MTHFR可催化5,10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-亞甲基四氫葉酸，MTHFR基因位點突變可降低MTHFR活性，升高同型半胱氨酸水平，從而影響DNA結構和DNA甲基化水平[19-20]。有研究證實MTHFR基因多態性與復發性流產、婦科腫瘤包括乳腺癌、子宮內膜癌的關系[21-22]，但是MTHFR基因多態性與子宮內膜病變的關系尚不清楚。

本研究顯示MTHFR基因CT677T位點各基因型患者間子宮內膜厚度的差異顯著對于CT677T，在T顯性模式下，即C/T、T/T基因型患者子宮內膜厚度均高于C/C基因型患者，C/T基因型子宮內膜厚度高于C/C基因型。MTHFR基因CT677T位點各基因型患者間子宮內膜診刮比例的差異顯著，其中，C/T基因型患者子宮內膜診刮率高于A/A及C/C基因型。同一基因型患者不同藥物組間子宮內膜厚度差異無統計學意義，對于CT677T，C/T基因患者的子宮內膜厚度比C/C和T/T型厚。由此可見，他莫昔芬及枸櫞酸托瑞米芬引發的子宮內膜病變情況基本相同，因此兩種藥物間的更換意義很小。C/T基因是子宮內膜病變易感型基因，臨床上可以針對該基因型患者進行針對性干預治療，減少子宮內膜病變的發生率。

綜上所述，本研究發現MTHFR基因CT677T位點C/T亞型患者是SERMs藥物引起子宮內膜病變的高發人群。但是本研究存在一定局限性，該研究屬于單中心研究，且樣本量較少，后續需要大樣本、多中心的前瞻性研究觀察MTHFR基因多態性與乳腺癌子宮內膜增生的關系，為進一步探索乳腺癌子宮內膜病變的關系。