山胡椒、狹葉山胡椒果實的鑒別

潘澤玥章蕾鐘曉明黃真

（浙江中醫藥大學藥學院，浙江 杭州310053）

山胡椒Lindera glauca（Sieb.et Zucc.）Bl.為樟科山胡椒屬植物，是落葉灌木或小喬木，主要分布于山東、浙江、湖南等丘陵山地［1-2］。具有溫中散寒、行氣止痛、平喘等功效［3］，能抑制腫瘤細胞活性、抗炎、抑菌［4-7］，其化學成分有檸檬醛、羅勒烯等［8］，始載于《新修本草》［9］，《植物名實圖考》［10］記載“野胡椒，大小葉排生如簇，葉微似橘葉，青時氣已香馥”。但山胡椒地方用藥描述頗為混亂，廣西地區［11］又名“假死風”，《浙江植物志》［12］稱其為“牛筋樹”。文獻［13-14］亦誤將其描述為樟科木姜子屬植物。

狹葉山胡椒Lindera angustifoliaCheng 又名“見風消”，《植物名實圖考》［10］記載其“生長沙山阜，葉面青背白，似野胡椒而窄”，具有祛風、利濕消腫、行氣散寒的功效［15］，可見它與同屬植物山胡椒在基原、藥理活性、化學成分方面相似。為了保證臨床用藥準確有效，有必要展開山胡椒、狹葉山胡椒鑒定研究。

因此，本實驗采用性狀鑒別、微性狀鑒別、顯微鑒別等多種中藥鑒別方法，并通過掃描電鏡觀察山胡椒、狹葉山胡椒果實表面形態，旨在為這種藥材鑒別奠定依據，同時也為其他果實類中藥相關研究提供參考。

1 材料

1.1 藥材與試劑 山胡椒、狹葉山胡椒果實各3批，采自浙江省杭州植物園植物分類區，經浙江中醫藥大學黃真教授分別鑒定為樟科山胡椒屬山胡椒Lindera glauca（Sieb.et Zucc.）Bl.、狹葉山胡椒Lindera angustifoliaCheng 果實。FAA 固定液由10%甲醛5 mL、冰醋酸5 mL、70% 乙醇90 mL 配制。稀甘油、水合氯醛為分析純。

1.2 儀器 Olympus 光學顯微鏡［奧林巴斯（中國）有限公司］；Olympus SZ61 體式顯微鏡、KDBM 生物組織包埋機、KD-BL 包埋機冷凍臺（浙江金華市科迪儀器設備有限公司）；HM430 石蠟切片機［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；YT-6C生物組織攤片機、su8010 型掃描電子顯微鏡、e1010 型離子濺射鍍膜儀（日本日立公司）。

2 方法與結果

2.1 基原鑒別 觀察山胡椒和狹葉山胡椒全株，記錄根、莖、葉、果實特征，結合文獻［1］進行描述。

2.1.1 山胡椒 落葉小喬木或灌木；小枝灰白色；芽鱗無脊；葉呈橢圓形，長4～9 cm，下部被白色柔毛；傘形花序具3～8 花；雄蕊9；雌花花被片橢圓形或倒卵形，柱頭盤狀；果實球形，成熟時為黑褐色，直徑約4 mm；果柄長10～15 mm。

2.1.2 狹葉山胡椒 落葉小喬木或灌木；小枝黃綠色，無毛；芽鱗具脊；葉呈橢圓狀披針形，長6～14 cm，下部沿脈疏被柔毛；傘形花序2～3 腋生；雄蕊9；雌花花被片6，柱頭頭狀；果實球形，成熟時為黑色，直徑約8 mm；果柄長為5～15 mm，被微柔毛。

2.2 性狀鑒別 山胡椒果實呈球形，直徑5～6.5 mm；表面黑色，光滑，腺點分布多，頂端有花柱殘基，基部有圓形果梗痕，多數連接細果柄；中果皮柔軟，內果皮黃棕色，質地脆；種皮內有肥厚子葉2枚，富含油質；氣芳香，味辛涼。狹葉山胡椒果實呈球形，直徑7～8 mm，表面黑色，光滑，腺點分布少，頂端帶有明顯花柱殘基呈黑色，基部帶果柄被稀疏柔毛，具盤狀果托；外果皮薄，中果皮肉質多汁，富油性；內果皮黃棕色，質地脆；種皮內子葉大多呈空洞狀不可見；氣芳香濃烈具檸檬香氣，味辛而麻舌。綜上所述，2 種藥材性狀特征整體相似，但在大小、果實頂端花柱殘基、氣味方面存在差異。

2.3 微性狀鑒別 在體式顯微鏡下進行觀察。山胡椒果實呈球形；外果皮棕黑色，較薄，腺點分布多，有細密干縮皺紋，頂端花柱殘基不明顯，基部連接細果柄；中果皮黃白色；內果皮黃棕色；種皮極薄與內果皮連結緊密；種皮內有肥厚子葉2枚，類白色，富含油質，見圖1。狹葉山胡椒果實呈橢球形；外果皮黑色，較薄，腺點分布較少，光滑，頂端帶有明顯花柱殘基，基部帶果柄被稀疏柔毛；中果皮黃綠色，斷面頂部偶可見暗棕色圓斑；內果皮黃棕色；種皮與內果皮連結緊密；種子內為子葉大多呈空洞狀不可見；其他微性狀特征與山胡椒果實相似，見圖2。

圖1 山胡椒果實微性狀Fig.1 Microscopic characteristics of the fruits of L.glauca

圖2 狹葉山胡椒果實微性狀Fig.2 Microscopic characteristics of the fruits of L.angustifolia

2.4 掃描電鏡鑒別 將處理后干燥的山胡椒、狹葉山胡椒果實的外果皮粘貼在掃描載物臺上進行噴金，在掃描電鏡下觀察并拍照，參照文獻［16-17］進行描述。

2.4.1 果實頂部表面特征 2 種藥材果實頂部有小突起狀花柱殘痕，掃描電鏡下可見近圓形突起。其中，山胡椒果實自果實頂部向外呈明顯放射狀線紋，突起部位細胞間隙大，呈蜂窩樣繩索狀連結的形態；狹葉山胡椒果實突起內紋飾不規則，表面粗糙且有空洞，周圍有半圓球狀、環狀實心突起，表面可見線狀紋路。

另外，山胡椒果實頂部表面為網狀紋飾；網眼稍隆起，表面可見顆粒狀突起；網脊平、窄，鑲嵌在網眼之間；細胞輪廓較為清晰，細胞排列緊密呈五邊形；果頂中部向外細胞排列由緊密到疏松，細胞間隔較窄，近內部細胞大小為20～30 μm，細胞形狀呈不規則五邊形。而狹葉山胡椒表面為波狀及平滑型紋飾；網眼表面可見顆粒狀小突起，網脊平；細胞輪廓不清晰，細胞排列緊密呈四邊形；果頂中部向外細胞排列緊密，間隔大，細胞自內向外逐漸變大，近內部細胞大小約為30 μm，外部約為60 μm，形狀為四邊形，見圖3～4。

圖3 山胡椒果實頂部Fig.3 Top of the fruits of L.glauca

圖4 狹葉山胡椒果實頂部Fig.4 Top of the fruits of L.angustifolia

2.4.2 果實柄部及表面特征 2 種藥材果實柄部在表面紋飾、細胞形狀、油細胞數量及大小方面有一定區別，見圖5～6。由此可知，山胡椒果實自果柄處向外呈同心環狀紋飾，平滑處呈淺網狀紋飾，網脊隆起不明顯，網眼近四邊形；表面為網狀紋飾，網眼凹陷，網脊明顯較寬；非腺毛散在，呈細長柱形，長度約為2 μm；可見褶皺狀突起及分泌物；油細胞呈半圓球狀突起，直徑為1～4 μm，分泌孔可見，而狹葉山胡椒果實線狀褶皺，果蒂內平滑處呈網狀紋飾，網脊隆起，網眼近四邊形。果實表面為淺波狀紋飾，網眼稍隆起，網脊平、窄；非腺毛散在，長度為2～3 μm；油細胞呈半圓球狀或圓球狀突起，直徑為2～8 μm，密集分布偶可見分泌孔。

圖5 山胡椒果實梗部Fig.5 Stalk of the fruits of L.glauca

2.5 顯微鑒定

2.5.1 石蠟切片法 隨機選取新鮮、有代表性的山胡椒、狹葉山胡椒果實，在FAA 中固定7 d，采用常規石蠟切片法［18］并結合預實驗結果，確定果實切片厚度為8～12 μm，番紅-固綠染色。在顯微鏡下拍攝并記錄，結果見圖7。

圖6 狹葉山胡椒果實梗部Fig.6 Stalk of the fruits of L.angustifolia

圖7 果實橫切面特征Fig.7 Cross-section traits of fruits

由此可知，山胡椒果實最外層為1 列長方形三面增厚的石細胞，其下有1～3 列扁平外果皮細胞；中果皮細胞多角形，油細胞散在并可見周韌型維管束；內果皮柵狀細胞切向壁外側間隙及細胞內含方晶，形成一結晶環，外側有一列薄的石細胞層；種皮為一列長方形薄壁細胞；子葉細胞呈類圓形、類方形，含糊粉粒及豐富的脂肪油滴；種子內維管束位于種腔中縫兩側，每側6～8個，而狹葉山胡椒果實外側邊緣略呈波狀彎曲，最外層為1 列三面增厚的石細胞，其下有1～3 列扁平外果皮細胞；中果皮細胞呈多角形或橢圓形，散在油細胞，并有周韌型維管束分布；內果皮柵狀細胞切向壁外側間隙及細胞內方晶較少，外側有一列薄的石細胞層；種皮為一列長方形薄壁細胞；子葉細胞呈類圓形、類方形，含糊粉粒較少；在石蠟切片中種子內多呈空洞狀，子葉細胞少見，可能是果實成熟致子葉皺縮。

2.5.2 藥材粉末鑒別 圖8 顯示，山胡椒粉末黃棕色；油細胞淡黃色，多破碎，完整者呈類圓形或類多角形，直徑1～10 μm；非腺毛為單細胞，表面光滑；螺紋導管成束稍彎曲，有的與網紋細胞相伴；偶可見果柄處含具緣紋孔導管；草酸鈣方晶多見于內果皮細胞并排列成行；纖維成束較長，可見不規則縱列紋；內果皮石細胞呈類多角形，棕色至黃棕色，表面觀聚成一群，垂周壁深波狀或微波狀彎曲，壁厚約2 μm，細胞層紋較清晰，孔溝明顯，亦可見尖梭形或長卵圓形石細胞，胞腔內呈深棕色，層紋明顯；外果皮細胞呈多角形，棕紅色，細胞壁較厚突起；內果皮柵狀細胞側面觀長柱形，黃色，長12～15 μm，直徑1 μm；細胞內可見多個方晶排列；種皮細胞橫斷面觀呈類多角形，垂周壁細點狀增厚，胞內具細密交錯的網狀紋理。子葉細胞含油滴和糊粉粒。

圖8 山胡椒果實粉末特征Fig.8 Powder traits of the fruits of L.glauca

圖9 顯示，狹葉山胡椒粉末棕黑色；草酸鈣方晶呈類方形，內果皮中常含數個結晶；石細胞呈類圓形、類多角形，暗棕色，直徑約為3～5 μm，細胞壁較薄但明顯，胞腔內呈黃棕色，單個或數個成群散于果皮薄壁組織；內果皮石細胞類多角形，黃棕色，垂周壁深波狀彎曲，壁厚約2 μm，細胞層紋清晰，孔溝明顯，表面觀石細胞成片鑲嵌緊密；內果皮細胞柵狀細胞斷面觀具光輝帶，長為4 μm，寬為2 μm；其他結構外果皮細胞、種皮細胞、纖維、螺紋導管，油細胞形態與山胡椒果實粉末相近；全藥材粉碎樣品中不易觀察兩者子葉細胞，可能由于該組織容易粉碎而被破壞。

圖9 狹葉山胡椒果實粉末特征Fig.9 Powder traits of the fruits of L.angustifolia

3 結論

通過對山胡椒、狹葉山胡椒果實系統的中藥鑒定研究，比較兩者在外果皮表面特征。結果，2 種藥材在掃描電鏡下外果皮紋飾、細胞形態、果柄部紋飾，顯微鑒定中內果皮柵狀細胞、石細胞、子葉細胞等方面存在差異。微性狀鑒別、掃描電鏡補充完善了山胡椒、狹葉山胡椒果實的鑒別依據，可為其鑒定及后期質量控制提供參考依據。