中醫(yī)藥防治血脂異常的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

耿秀超，王 梓，蔡紫赟，尹艷紫，張曉蕾，孫坤舉，張雨豪，李 強(qiáng)，

血脂異常與脂肪肝、高血壓、糖尿病及多種心腦血管疾病發(fā)生都密切相關(guān)，我國成人血脂異常患病率超過40%，且發(fā)病呈低齡化趨勢[1]。中醫(yī)學(xué)通常不采用“血脂”或“血脂異常”表述，而常將其引起的諸多癥狀歸于各種內(nèi)傷雜病。他汀類藥物是臨床調(diào)節(jié)血脂異常的一線用藥，但不良反應(yīng)限制了臨床治療效果[2-3]。中醫(yī)藥具有多靶點(diǎn)的作用優(yōu)勢，為其在安全性和有效性方面奠定了基礎(chǔ)。但中藥成分復(fù)雜，配伍方式多樣，研究多停留在處方總結(jié)、療效觀察的層面。因此，如何選擇和制備合適的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停e極探索中醫(yī)藥在細(xì)胞、分子水平的研究，發(fā)揮中醫(yī)藥特色優(yōu)勢就顯得尤為重要。本研究檢索和整理了國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，從實(shí)驗(yàn)研究的角度出發(fā)，對中藥有效成分、中藥復(fù)方治療血脂異常實(shí)驗(yàn)研究及常見實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行比較分析，以期為中醫(yī)藥防治血脂異常提供新思路。

1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)常見模型

1.1 斑馬魚 斑馬魚是一種原產(chǎn)于南非地區(qū)的熱帶硬骨魚，體積小，胚胎透明，易于大規(guī)模飼養(yǎng)，繁殖能力強(qiáng)且實(shí)驗(yàn)周期短，因其與人類同為脊椎動物，基因組序列與人類有著87%的高度相似性，被廣泛作為高通量篩選藥物的經(jīng)典模型[4]。血脂構(gòu)成、脂質(zhì)吸收代謝、器官組織與人類基本一致，被大量應(yīng)用于血脂異常的研究中。缺點(diǎn)是不能采血進(jìn)行脂質(zhì)分析，如采用活體熒光探針技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求較高。

1.2 大鼠 大鼠具有成本低、抗病力強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)操作簡單且穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，已成為研究血脂異常使用率最高的一種動物[5]。大鼠血液豐富，一次采血可滿足多項指標(biāo)的檢測要求。缺點(diǎn)是飼喂高膽固醇食物，易出現(xiàn)“厭食”，與人脂質(zhì)代謝機(jī)制存在較大的差異，不宜作為抗動脈粥樣硬化(AS)藥物的篩選。

1.3 小鼠 小鼠血脂穩(wěn)定，造模實(shí)驗(yàn)操作相對簡單且成本低廉，具有很大優(yōu)勢，但由于小鼠可取血量少，使部分實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測受限[6]。小鼠血漿缺乏血漿膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)，對飲食中的血清總膽固醇(TC)和高糖無反應(yīng)，建立動脈粥樣硬化模型成功率低。

1.4 豚鼠 豚鼠的血漿脂蛋白構(gòu)成、TC代謝和對藥物治療的反應(yīng)與人類相似，主要體現(xiàn)在低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)/高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)比值高、肝中游離膽固醇濃度高于酯化膽固醇等方面[7]。性情溫和，可取血量大，對高脂飼料尤為敏感，容易飼養(yǎng)。切除卵巢的豚鼠還可以較好地模擬絕經(jīng)后女性的脂蛋白代謝。缺點(diǎn)是造模時間較長。

1.5 家兔 家兔脂蛋白代謝與人類相似，血漿中含有豐富的血漿膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白，對外源TC吸收率高，造模速度快，重復(fù)性好，是研究血脂異常和動脈粥樣硬化最早的一種動物模型[8]。因家兔屬于食草動物，與人類TC代謝機(jī)制并不完全一致，長期高脂飲食易出現(xiàn)腹瀉、皮膚病等副作用。

2 體外實(shí)驗(yàn)常見模型

2.1 HepG2細(xì)胞模型 HepG2來源于人胚胎肝癌細(xì)胞，造模周期短、成本低，具有高分化性、穩(wěn)定性、永生化和可反復(fù)凍存等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于抗氧化、降脂保肝、抗肝癌和抗脂肪變性等研究[9]。又因其保留了完整的與人類生物代謝相關(guān)的酶，可正常表達(dá)與脂質(zhì)代謝相關(guān)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平，目前也被廣泛用于評價中藥的調(diào)節(jié)血脂活性。

2.2 L-02細(xì)胞模型 L-02細(xì)胞是來自正常人胚胎肝組織且能夠貼壁生長的細(xì)胞，能完全模擬人類脂質(zhì)代謝過程[10]。HepG2 細(xì)胞來源于人肝胚胎腫瘤細(xì)胞，與正常人肝細(xì)胞有一定的差異，且病變僅僅為單純脂肪變性，脂質(zhì)氧化不明顯，因此，L-02細(xì)胞更具可行性和說服性，已廣泛用于肝藥理活性、肝毒性和肝細(xì)胞脂代謝等研究[11]。但L-02細(xì)胞用油酸和脂肪乳誘導(dǎo)TC升高不明顯，如果濃度過高，會加劇脂質(zhì)積累和細(xì)胞代謝紊亂，轉(zhuǎn)氨酶升高，造成細(xì)胞損傷[12]。

2.3 Changliver細(xì)胞模型 Changliver細(xì)胞是人永生化正常肝細(xì)胞株，具有人類肝細(xì)胞的特征，具有L-02細(xì)胞所沒有的無限傳代特點(diǎn)，培養(yǎng)方法與原代細(xì)胞相比簡單，且不屬于腫瘤細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更接近于由正常肝細(xì)胞發(fā)展而來的非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型特點(diǎn)，是體外研究非酒精性脂肪性肝較為理想的細(xì)胞模型[13]。

2.4 3T3-L1細(xì)胞模型 3T3-L1前脂肪細(xì)胞是G.J.Todaro從Swiss系小鼠胚胎里3T3細(xì)胞中分離得到，需利用適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑對其進(jìn)行刺激，使其定向分化成充滿脂滴的脂肪細(xì)胞才能進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)探索。誘導(dǎo)分化前，3T3-L前脂肪細(xì)胞間質(zhì)稀少，體積小，呈梭形，包漿中不含有三酰甘油(TG)的脂滴[14]。誘導(dǎo)分化后則變成成熟的脂肪細(xì)胞，貼壁完好，棱角分明，大量的TG脂滴積聚于細(xì)胞核的周圍。3T3-L1脂肪細(xì)胞是目前國際上公認(rèn)的可用于研究血脂異常、肥胖以及篩選降脂中藥和抗肥胖藥物的細(xì)胞模型[15]。

3 中醫(yī)藥治療血脂異常的實(shí)驗(yàn)研究總結(jié)

3.1 單體 中藥調(diào)節(jié)血脂在長期的臨床實(shí)踐中已被證實(shí)，隨著現(xiàn)代藥理學(xué)研究的不斷深入，目前已知約130多種中草藥具有調(diào)節(jié)血脂的作用，其中有效成分包含皂苷類、多酚類、多糖類、黃酮類、植物甾醇類、不飽和脂肪酸類、蒽醌類、生物堿類、蛋白質(zhì)類共9大類，詳見表1。其中證明對治療血脂異常有效的定性實(shí)驗(yàn)占了絕大部分，尚缺乏定量實(shí)驗(yàn)和調(diào)節(jié)血脂中藥之間的對比實(shí)驗(yàn)[16]。

表1 中藥單體治療血脂異常實(shí)驗(yàn)研究總結(jié)

3.2 復(fù)方 辨證論治、復(fù)方施藥是中醫(yī)診療特色。中藥復(fù)方治療具有多途徑、多層次和多靶點(diǎn)的作用，當(dāng)前中藥復(fù)方治療多以經(jīng)典古方化裁和中成藥為主。當(dāng)代醫(yī)家通過實(shí)驗(yàn)研究評價中藥對血脂異常的干預(yù)效應(yīng)，彌補(bǔ)了經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的短板，使中醫(yī)藥研究得到完善，為臨床應(yīng)用提供了新思路和新證據(jù)。詳見表2。

4 小 結(jié)

選擇理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯ふ曳乐窝惓５闹兴幨株P(guān)鍵。血脂異常的動物模型可通過TC判斷造模是否理想，尤其是斑馬魚模型進(jìn)行高通量篩選，但動物模型多基于臨床的主要癥狀構(gòu)建，比如通過改善飲食而復(fù)制的動物模型，從形成時間和“飲食不節(jié)”“膏粱之疾”等病因病機(jī)角度與人類血脂異常形成相似，但忽視了其他因素對疾病的影響，中醫(yī)很多臨床癥狀(胸悶、心悸以及肢體麻木沉重等)在動物模型上都不能觀察到。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)雖然周期短，方便快捷，價格相對低廉，但生物體終究是一個有機(jī)整體，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不能充分證明藥物在體內(nèi)的效果。中醫(yī)診療注重辨證施治，中藥復(fù)方組成及劑量呈現(xiàn)很大的區(qū)別，藥物有效成分作用部位、作用靶點(diǎn)研究不夠深入，在今后的研究中要注重規(guī)范使用現(xiàn)代醫(yī)療檢測方法，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)分析，形成一個權(quán)威、統(tǒng)一的診斷和療效評定標(biāo)準(zhǔn)。