佛山地區不良妊娠結局與MTHFR基因C677T位點多態性相關性研究

楊 康，周少雄，歐陽佩雯，莊錫偉，彭健橋

佛山復星禪誠醫院檢驗病理診斷部，廣東佛山 528000

不良妊娠結局指除正常妊娠以外的病理妊娠及分娩期并發癥，包括胚胎停育、早產、足月低質量新生兒、出生缺陷、自然流產、死胎等，其發生給患者帶來巨大的心理及經濟負擔，已成為嚴重的社會公共衛生問題之一[1-3]。造成不良妊娠結局的病因迄今尚不明確，多數研究者認為其與遺傳因素及環境因素有關[4-5]。伴隨分子生物學飛速發展，近幾年遺傳因素的研究成為熱點之一，尤以亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T位點多態性與不良妊娠結局的關系研究最為突出。但目前國內外研究表明，MTHFR基因C677T位點多態性存在人群和地區差異[6-8]，且鮮見佛山地區的相關研究報道。本研究通過了解佛山地區不良妊娠結局女性和正常妊娠女性的MTHFR C677T基因型及基因頻率，探討佛山地區不良妊娠結局與MTHFR基因C677T位點多態性的關系，為臨床醫生預防不良妊娠及不良妊娠結局患者的治療提供科學依據，以期減少不良妊娠結局的發生。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2019年6月至2021年5月于本院行MTHFR C677T基因多態性檢測的不良妊娠結局女性(病例組)454例和同期正常妊娠女性(對照組)265例。納入的研究對象均為漢族，籍貫為本市且無血緣關系，本研究獲得了研究對象知情同意，且符合醫學倫理程序。病例組年齡19～47歲，平均(29.3±5.1)歲；包括不明原因復發性流產、稽留流產、自然流產、胚胎停育、不良孕產史患者。對照組年齡19～56歲，平均(30.8±5.0)歲；納入標準為無不良生育史且至少一次正常生育史，無家族性遺傳病史，生殖系統正常。兩組女性的年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 XO-01漩渦振蕩器(北京泰普聯合科技開發有限公司)，5424R型高速離心機(德國Eppendorf公司)，TL988型熒光定量PCR儀(西安天隆科技有限公司)。地高辛染色液、樣本萃取液、細胞保存液(濟南廣音醫療科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1MTHFR C677T基因多態性檢測 采集研究對象外周血2 mL于乙二胺四乙酸二鉀抗凝劑保存，提取白細胞。應用熒光染色原位雜交技術測定白細胞中MTHFR C677T基因位點。經過95 ℃變性解鏈10 min，60 ℃恒溫特異性雜交并實現非酶級聯熒光信號放大90 min。經雙通道熒光定量PCR儀進行測定結果，MTHFR C677T基因多態性測定結果共計3種，分別為野生型(CC型)、突變雜合型(CT型)、突變純合型(TT型)，其中CT型和TT型合稱突變型。

1.3.2觀察指標 通過檢測研究對象的MTHFR C677T基因多態性，分析病例組與對照組MTHFR C677T基因型和基因頻率的分布差異，各基因型發生不良妊娠結局的差異并作統計分析。

1.4統計學處理 采用SPSS26.0統計學軟件進行數據處理及統計分析。使用χ2檢驗分析基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg(HWE)遺傳平衡定律，以P>0.05為符合。計數資料采用頻數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以95%置信區間(CI)計算優勢比(OR)評估基因型與不良妊娠之間的關系。檢驗水準α=0.05，以P<0.05(雙側)為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HWE遺傳平衡定律檢驗 使用χ2檢驗對對照組女性MTHFR C677T基因型頻率進行HWE平衡檢驗，基因型分布符合HWE檢驗平衡(χ2=0.20，P>0.05),說明入組的佛山地區正常妊娠女性具有區域群體代表性。

2.2MTHFR C677T 基因型和等位基因頻率在病例組和對照組分布差異 病例組CC型255例(56.18%)、CT型147例(32.37%)、TT型52例(11.45%)、CT+TT型199例(41.4%)，C等位基因頻率72.35%、T等位基因頻率27.64%。對照組CC型166例(62.64%)、CT型89例(33.58%)、TT型10例(3.77%)、CT+TT型99例(37.35%)，C等位基因頻率79.4%、T等位基因頻率20.60%。兩組基因型頻率和等位基因頻率比較差異有統計學意義(χ2=12.72、8.93，P<0.05)。兩組CC型頻率比較差異無統計學意義(χ2=0.19，P=0.665)，兩組CT型頻率比較差異無統計學意義(χ2=1.58，P=0.424),兩組TT型頻率比較差異有統計學意義(χ2=10.31，P<0.05)。兩組女性等位基因頻率比較，差異有統計學意義(χ2=8.93，P<0.05)。見表1。

表1 不良妊娠結局女性與正常妊娠女性MTHFR C677T基因型、等位基因頻率比較[n(%)]

2.3MTHFR C677T 各基因型發生不良妊娠結局情況比較 以入組所有研究對象中MTHFR 677 CC型女性發生不良妊娠結局的風險為對照(設定數值為1.000)，結果顯示，CT型女性發生不良妊娠結局的風險與CC型女性比較差異無統計學意義(χ2=0.19，P=0.665)；TT型女性發生不良妊娠結局的風險為CC型女性的3.385倍(95%CI：1.674～6.847，χ2=12.67，P<0.01)；(CT+TT)型女性發生不良妊娠結局的風險與CC型女性比較差異無統計學意義(χ2=2.89，P=0.089)。

3 討 論

不良妊娠結局的發生率在臨床呈逐年遞增趨勢，其發生與母體遺傳因素的關系已成為當前研究熱點[9]。MTHFR基因編碼的MTHFR是葉酸代謝通路中的關鍵酶，酶活性的下降會降低體內葉酸的利用率，并引起血液同型半胱氨酸水平的升高，從而影響機體纖溶系統和凝血系統，使機體血液處于高凝狀態，進一步升高胎兒生長受限、流產、神經管畸形等不良妊娠結局的發生率[8,10-13]。至今，已發現MTHFR基因有多種突變，最常見的是C677T位點的突變，此類突變具有明顯的病理意義，其中CC型女性葉酸代謝酶活性正常，CT型葉酸代謝酶活性較低，TT型葉酸代謝酶活性最低。因此，有學者認為，MTHFR C677T基因多態性與不良妊娠結局的發生相關[2]。

筆者通過對MTHFR C677T基因型和等位基因頻率在病例組和對照組中的分布進行比較發現，其中病例組的TT型頻率(11.45%)明顯高于對照組(3.77%)，同時MTHFR C677T等位基因頻率在病例組和對照組中差異有統計學意義(P<0.05)，病例組的等位基因T頻率(27.64%)明顯高于對照組(20.60%)，與其他文獻報道一致[2,14-15]，提示MTHFR 677位點TT型女性及發生等位基因T突變的女性發生不良妊娠結局的風險可能更高。但也有研究報道，MTHFR C677T基因多態性與不良妊娠結局無相關性[16]，這可能與MTHFR C677T基因多態性存在地區和種族差異相關。另外，本研究對MTHFR C677T各基因型女性發生不良妊娠結局情況進行分析，結果顯示MTHFR 677位點TT型女性發生不良妊娠結局的風險為CC型女性的3.385倍，提示TT型女性不良妊娠結局發生率可能更高。

綜上所述，MTHFR C677T基因存在多態性，在不同地區人群中存在差異。研究結果表明，MTHFR C677T基因多態性與女性妊娠不良結局的發生具有一定關系，其中MTHFR 677位點TT型女性發生不良妊娠結局的風險較高。因此，女性妊娠前應行MTHFR C677T基因多態性檢測，臨床可依據女性基因型的不同，在其妊娠前、妊娠期采取個性化預防措施，以期降低不良妊娠結局的發生率。本研究存在的局限有：(1)納入的樣本量較小；(2)未對不同基因型女性進行不同用藥劑量設計及藥物治療效果的監測。未來可進行大樣本量、多中心研究以明確MTHFR C677T基因多態性與女性發生不良妊娠結局的關系。