基蛋Getein 1600干式免疫熒光法檢測降鈣素原的性能驗證

余錦旗 何偉 林倩倩 陳穎婷 歐財文 宋麗婷

1廣州中醫藥大學第二附屬醫院檢驗醫學部，廣州 510120；2廣州中醫藥大學第二附屬醫院皮膚科，廣州 510120；3 廣州醫科大學附屬中醫醫院同德分院急診科，廣州 510130

通信作者：歐財文，Email：ervin_163@163.com

降鈣素原（procalcitonin，PCT）由神經內分泌細胞表達，經酶切分解為（未成熟）降鈣素、羧基端肽和氨基端肽。健康人中PCT 含量很低，受細菌感染后明顯升高。PCT 的檢測在各臨床實驗室已經普遍開展。按照ISO 15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》和《醫療機構臨床試驗室管理方法》的要求［1-2］，臨床實驗室所開展的項目應當進行分析并作出相應評價。本研究參考《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》（WS/T 420-2013）［3］，設計試驗，對基蛋Getein 1600 測定PCT 進行相關的性能驗證，為臨床提供可靠的依據，現報道如下。

材料與方法

1、材料

1.1、儀器與試劑 南京新產業基蛋Getein 1600 熒光免疫定量分析儀（以下簡稱“基蛋1600”）、配套PCT試劑、原裝高低質控品；德國羅氏診斷公司e602 電化學發光檢測系統（以下簡稱“羅氏e602”）、配套PCT試劑。

1.2、樣本 選取廣州中醫藥大學第二附屬醫院檢驗科2019年8月檢驗后的34例無脂血、無黃疸、無溶血的肝素鋰抗凝標本，離心后取血漿檢測。

2、方法

2.1、精密度驗證 參考 WS/T 420-2013［3］，根據基蛋1600 配套PCT 試劑說明書，選取正常值和病理值2 個濃度水平標本，每個水平每天檢測1批，每批重復檢測3次，一共連續檢測5 d。計算重復標準差Sr、期間標準差Sl，分別與廠家聲稱值σr和σl作比較。若Sr≤σr且Sl≤σl，則驗證廠家聲稱的精密度可靠；若Sr>σr或Sl>σl，可能存在無統計學意義的差異，需進一步驗證。

2.2、正確度評價 廠家聲稱可溯源至羅氏全自動化學發光分析儀及配套試劑盒（電化學發光法）。參考WS/T 420-2013［3］，選取30例濃度均勻分布在測量區間的標本，于基蛋1600 和羅氏e602 同時檢測。計算每個標本測量結果在兩個方法間的相對偏移brel和兩個方法間的相對偏移ˉbrel，并以為brel縱軸，羅氏e602 檢測結果為橫軸作偏移圖。若偏移圖中brel分布基本均勻，且ˉbrel≤20%，則正確度評價通過；若偏移圖中brel分布不均勻，考慮進行多節段的ˉbrel以進一步比較。

2.3、線性范圍驗證 參考WS/T 420-2013［3］，選擇高值和低值標本濃度各1份，選擇高值標本（H）濃度的要求盡量接近線性范圍的上限，同時要求低值標本（L）濃度的要求盡量接近線性范圍的下限。按照5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H（分別對應的稀釋度為1、2、3、4、5、6）的比例關系配置系列評價樣品，每份樣品連續測定3 次。以稀釋度為橫軸，每個稀釋度的測量均值為縱軸，求出線性回歸方程y=b0+b1x 和相關系數R2，如果R2大于等于廠家聲稱的0.980則驗證通過。

結 果

1、精密度驗證

基蛋1600 PCT 檢測系統的正常值濃度Sr為0.01、Sl為0.01，病理值濃度Sr為0.59、Sl為0.57。結果均小于廠家聲稱值，見表1所示。

表1 基蛋1600精密度驗證結果

2、正確度評價

基蛋1600 與羅氏e602 PCT 檢測結果偏移圖見圖1，偏移分布基本均勻。ˉbrel為19.01%，小于廠家聲稱的20%。

圖1 基蛋1600與比較方法檢測偏移

3、線性范圍驗證

以稀釋度為橫軸，每個稀釋度的測量均值為縱軸，在0.10～36.81 μg/L內，線性回歸方程為Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9，線性回歸方程可見圖2。R2大于廠家聲稱的0.980，線性范圍與說明書接近，驗證通過。

圖2 基蛋1600線性回歸分析

討 論

PCT是可靠的感染性指標之一。細菌性感染時，PCT升高且與炎性反應的嚴重程度有關，病毒性感染時PCT 不升高或輕度升高［4-5］。目前PCT 檢測方法主要有酶聯免疫法、膠體金法、免疫熒光法、化學發光法、放免法等［6］。本次所驗證的PCT 試劑盒為干式免疫熒光法。干式免疫熒光法既有定量測定，又有快速測定的特點，但目前自動化程度不高，較適合標本量少或者基層單位，也適用于急診標本［7］。

按照《醫學實驗室質量和能力認可準則》和《醫療機構臨床試驗室管理方法》的要求，臨床實驗室所用的檢驗方法應保證檢驗結果的可靠性，對試劑盒分析性能應進行驗證。美國臨床和實驗室標準協會系列文件對試劑盒分析性能的要求較為全面［8-9］，但須消耗大量人力物力。對本次驗證參考WS/T 420-2013［3］對基蛋1600檢測PCT進行性能驗證，其精密度（Sr正常值0.01，病理值0.59；Sl正常值0.01，病理值0.57）、正確度（ˉbrel為19.01%）、線性（Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9）符合廠家說明書的聲稱。

綜上所述，儀器基蛋1600 干式免疫熒光法檢測PCT 的主要性能符合要求，可用于臨床標本檢測。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突