曲安奈德益康唑乳膏處方及微觀結構特性評價的比較研究

沈丹丹 吳群 沈川 姜學美,*

(1 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；2 重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121；3 重慶綦江區人民醫院，重慶 401420)

經皮給藥制劑已成為除口服制劑、注射給藥制劑外臨床最常用制劑，包括透皮制劑和皮膚局部外用制劑，皮膚局部外用制劑旨在作用于皮膚或皮膚組織產生局部治療作用的藥物，其中常用的多為半固體制劑，如軟膏、乳膏、凝膠等。2018年7月11日，藥品審評中心(CDE)發布了《新注冊分類的皮膚外用仿制藥的技術評價要求(征求意見稿)》[1]，與FDA的多個局部外用制劑生物等效性評價指南草案[2-3]及Shah博士[4]提出的局部藥物分類系統(topical drug classification system,TCS)的評價思路基本一致，即處方(Q1)、處方用量(Q2)和微觀結構特性(Q3)與參比制劑(reference listed drug,RLD)均相同時可采用體外研究替代體內研究，對尚未啟動一致性評價的皮膚局部外用制劑提出了研究方向，也是該類制劑未來一致性評價的趨勢。

曲安奈德益康唑乳膏(triamcinolone acetonide and econazole nitrate cream)是由Janssen公司開發的復方乳膏劑，商品名為Pevaryl?/Pevisone?，上市國家為英國和法國，規格為含硝酸益康唑10mg/g與曲安奈德1mg/g，主要用于治療皮炎、濕疹等，原研未進口銷售。本品國內有16家生產企業，已由廠家A地產化(商品名：派瑞松?，國藥準字H20000454)，根據說明書[5]，其處方組成與原研產品在歐洲上市(Pevaryl?/Pevisone?)[6-7]的處方組成(Q1)相同。目前雖然我國尚未專門發布皮膚局部外用制劑RLD的選擇規定，但按照我國發布的《普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定指導原則》，RLD首選國內上市的原研藥品。因此，本研究以地產化產品派瑞松?為參比制劑，逆向解析處方組成(Q1)及關鍵功能性輔料苯甲酸(防腐劑)和依地酸二鈉(金屬離子螯合劑)的用量(Q2)，考察微觀結構特性(Q3)，并與國產仿制藥的代表產品邦力?比較差異，為國內生產企業開展該品種一致性評價提供研究思路，從而達到與參比制劑的Q1、Q2及Q3等同，實現以體外研究替代以臨床為終點的復雜的生物等效性研究。

1 儀器與試驗材料

Waters e2695 高效液相色譜儀(Waters corporation)；K51502653型電子天平(Sartorius AG)；光學顯微鏡(Olympus corporation)；AQUALAB 4TE高精度溫控型水活度測定儀(美國Decagon)；S220-K酸度計(Mettler Toledo)；苯甲酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100419-201703，含量99.9%)；依地酸二鈉(杭州利人藥業有限公司，批號20190207，含量101.0%)；曲安奈德益康唑乳膏(商品名：派瑞松?，廠家A，批號JKJOD80)；曲安奈德益康唑乳膏(商品名：邦力?，廠家B，批號：2019010)；己烷磺酸鈉、磷酸、四氫呋喃、四丁基氫氧化銨均為分析純，乙腈、異丙醇、甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 Q1分析

根據派瑞松?說明書[5]、邦力?說明書[8]、Pevisone?[7]、Pevaryl?[6]，由表可見(表1)，國內仿制藥邦力?與派瑞松?、Pevisone?及Pevaryl?Q1均不一致，派瑞松?與Pevisone?Q1一致。

表1 Q1比較Tab.1 Comparison of Q1

2.2 Q2分析

2.2.1 依地酸二鈉的含量測定

(1)色譜條件

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX SB-C18，250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.66%四丁基氫氧化銨溶液(pH6.5)-乙腈(8.5:1.5)為流動相A，以甲醇-水(9:1)為流動相B，先以流動相A等度洗脫，待EDTA-Cu絡合物峰洗脫完畢后立即按表2梯度洗脫；檢測波長254 nm；柱溫30℃；流速1.0 mL/min；進樣量50 μL。

(2) 溶液的配制

供試品溶液的配制：取本品約1.25 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇5 mL，超聲1 min使曲安奈德與硝酸益康唑溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加入0.1%硫酸銅溶液1 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液的配制：取依地酸二鈉約25 mg，精密稱定，置20 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加入0.1%硫酸銅溶液1 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

(3) 測定結果

結果表明(圖1)O，w派瑞松?中金屬螯合劑依地酸二鈉的含量為0.142%(W/W)，即含依地酸二鈉1.42 mg/g。邦力?未檢出依地酸二鈉。

2.2.2 苯甲酸的含量測定

(1) 色譜條件

辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Luna C8，250 mm×4.6 mm，5 μm)，取己烷磺酸鈉0.94 g，加乙腈-異丙醇-水-85%磷酸(140:140:720:1)溶解并稀釋至1000 mL為流動相A，取己烷磺酸鈉0.94 g，加甲醇-水-85%磷酸(900:100:1)溶解并稀釋至1000 mL為流動相B，按表3梯度洗脫；檢測波長227 nm；柱溫40℃；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL。

表3 苯甲酸測定法的洗脫梯度Tab.3 Gradient elution for the determination of benzoic acid

(2) 溶液的配制

供試品溶液的配制：取本品1.25 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加四氫呋喃2 mL，超聲1 min使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

對照品溶液的配制：取苯甲酸對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

(3) 測定結果

結果表明(圖2)，派瑞松?中防腐劑苯甲酸其處方用量為0.18%(W/W)，即含苯甲酸1.8 mg/g。邦力?未檢出苯甲酸。

2.3 Q3分析

2.3.1 藥用活性成分的晶型及粒度測定

取本品適量，置于載玻片上涂成薄層，覆以蓋玻片，注意防止氣泡進入，立即采用光學顯微鏡在10×40倍下觀察活性成分的晶型與粒度，見圖3～4。結果表明，派瑞松?中活性成分為柱狀晶體，粒度為14.28 μm(D90)，而邦力?中活性成分為粗大柱狀晶體和針狀結晶的混合，粒度約為52.43 μm(D90)，說明兩種產品的活性成分均混懸于乳膏基質中，但是粒度差異較大，派瑞松?中活性成分為粒度明顯小于邦力?。

2.3.2 乳滴粒度的測定

取本品適量，置于載玻片上涂成薄層，覆以蓋玻片，注意防止氣泡進入，立即采用光學顯微鏡在10×40倍下觀察乳滴粒度(圖5～6)。結果表明，派瑞松?中乳滴粒度為5.71 μm(D90)，邦力?中乳滴粒度為2.55 μm(D90)，說明派瑞松?中乳滴粒度明顯大于邦力?。

2.3.3 水活度的測定

根據藥品審評中心郭滌亮等[9]的研究，皮膚局部外用制劑的微觀結構特性還應考察水活度指標，以評價產品中游離水的含量。取本品各適量，置于密閉容器中，采用冷鏡露點法在25℃下測定，派瑞松?與邦力?水活度值分別為1.0062和0.9698。

2.3.4 pH的測定

取本品各適量，依法操作。派瑞松?與邦力?pH值分別為2.95和3.15，派瑞松?pH值更高。

3 討論

3.1 Q1與Q2的差異

根據《新注冊分類的皮膚外用仿制藥的技術評價要求(征求意見稿)》[1]，仿制藥與參比制劑的輔料在定性(Q1)和定量(Q2)上應相同，輔料的濃度差異不應超過±5%。本研究逆向解析派瑞松?與國產仿制藥邦力?Q1及Q2差異，結果表明兩者產品Q1和Q2均不一致。根據Pevaryl?英國說明書[6]公開的結果，Pevaryl?中苯甲酸的處方用量為2 g/kg(0.2%，g/g)，與Pevisone?法國說明書[7]公開的結果一致，本研究測得派瑞松?防腐劑苯甲酸處方用量為1.8 g/kg(0.18%，g/g)，而聶鶴云等[10]對派瑞松?中苯甲酸的含量測定結果為1.5 g/kg(0.15%，g/g)，由此可見，地產化產品派瑞松?與原研產品Pevaryl?及Pevisone?中苯甲酸的含量差異均超過±5%，說明Q2不同；根據Niazi[11]和Janssen公司申請的專利WO9619186[12]，依地酸二鈉的優選處方用量為1 g/kg(0.1%，g/g)，本研究測得派瑞松?金屬螯合劑依地酸二鈉的處方用量1.4 g/kg(0.14%，g/g)，說明地產化產品派瑞松?與原研產品Pevaryl?的依地酸二鈉含量差異也超過±5%，說明Q2存在較大差異。根據藥品審評中心郭滌亮等[13]對皮膚局部外用仿制藥RLD選擇的考慮，其中指出對于皮膚局部外用制劑不同產地的原研產品在Q1和Q2存在差異，則可能導致產品Q3和產品安全性、有效性的差異。地產化產品派瑞松?與原研產品Q1相同但Q2不相同，說明派瑞松?不適宜作為本品一致性評價的RLD。

3.2 Q3的差異

根據顯微鏡觀察結果，地產化產品派瑞松?基質內藥用活性成分的晶體為柱狀晶體，而國內仿制藥邦力?中為粗大柱狀晶體和針狀結晶的混合，派瑞松?中活性成分為粒度明顯小于邦力?，說明二者的微觀結構不同，提示可能影響體外釋放行為，進而影響藥物的生物等效性；派瑞松?中乳滴的粒徑明顯大于邦力?，說明使用的基質性質存在較大的差異；水活度測定結果表明，派瑞松?產品中水活度值高于邦力?，說明派瑞松?游離水更高。綜上表明，兩者產品Q3的差異可能是由于Q1和Q2不同引起的。

3.3 參比制劑的選擇

按照國家藥監局關于發布化學仿制藥參比制劑遴選與確定程序的公告(2019年第25號)，RLD遴選的順序依次為：國內上市的原研藥品、經審核確定的國外原研企業在中國境內生產或經技術轉移生產的藥品、未進口原研藥品。但是對于皮膚局部外用制劑，尤其是半固體制劑的處方工藝很大程度上決定了藥物在皮膚上的釋藥性能，進而影響藥物的安全性與有效性，因而皮膚局部外用制劑RLD的選擇尤為重要，通過科學有效的逆向工程手段確定RLD輔料的用量范圍和多個RLD之間的質量對比，保證RLD的準確性和唯一性，將有助于獲得微觀結構特性的等同性，實現用體外研究替代體內生物等效性研究的目的。本研究通過對地產化產品派瑞松?的Q1及Q2分析，說明不適宜作為曲安奈德益康唑乳膏一致性評價的RLD。原研公司Johnson&Johnson Consumer Inc.在全球范圍內采用Pevaryl?(英國等)/Pevisone?(法國等)商品名上市曲安奈德益康唑乳膏，Q1比較發現，法國上市產品Pevisone?與國內地產化產品派瑞松?(派瑞松?是Pevisone?的音譯中文名)的輔料種類完全相同，而英國上市產品Pevaryl?中加入了花香水作為香精。因此建議國內生產企業采用Janssen-Cilag Limited在法國上市的Pevisone?作為本品一致性評價的RLD。

3.4 小結

國產仿制藥邦力?與地產化產品派瑞松?Q1和Q2明顯不一致，因而Q3也存在顯著性差異，進一步推測邦力?與原研產品Pevisone?Q3差異可能更大，關于Q3如何影響本品體外釋放及體外透皮行為的差異還有待進一步研究。