血管細胞粘附分子-1、白細胞介素-2、白細胞介素-6 在多發性骨髓瘤中表達及意義

張麗紅， 董 雯， 趙 丹， 尹婉宜， 沈 揚， 劉清池， 馬 兵

河北醫科大學第一醫院 血液內科，河北 石家莊 050031

多發性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種惡性單克隆漿細胞異常增生的惡性疾病，主要臨床表現為高鈣血癥、腎功能損害、貧血等[1]。 MM 約占所有血液系統惡性腫瘤的10%[2]，盡管近年來通過引入新型藥物，MM 患者的治療效果得到了顯著改善，但該病患者預后仍不樂觀[3]。 MM 患者報告時表現出的癥狀通常是非特異性的，多數患者就診時往往病程已較長，不利于疾病的早期診斷和治療[4]。 白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)是白細胞分泌的重要炎癥介質，IL-6 導致炎癥細胞浸潤、聚集，進而導致炎癥損傷。 有研究報道，MM 患者外周血IL-6 等促炎因子及趨化因子表達異常[5]。 同時，也有研究報道，當MM 病情發展時患者炎癥因子活化可導致細胞炎癥損傷，導致病情惡化[6]。 而血管細胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)是一種重要的細胞粘附分子[7]。 有研究報道，MM 患者VCAM-1 表達異常，且與患者疾病分期有關[8]。 本研究旨在探討VCAM-1、白細胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、IL-6 在MM 中的表達及其意義。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2020 年1 月至2021 年12 月河北醫科大學第一醫院收治的68 例MM 患者為觀察組。 納入標準:符合MM 的診斷標準[9]；年齡>18 歲；預期生存期>3 個月。排除標準:合并其他血液病者；合并主要器官功能損害者，合并外傷和手術史者，合并其他惡性腫瘤者；近期有感染者。 另選取同一時間于本院體檢的30 例健康體檢者為常規組。 觀察組中，男性36 例，女性32 例；年齡35 ~76 歲，平均年齡(61.26 ± 9.31)歲；國際系統分期(international staging system，ISS):Ⅰ期9 例，Ⅱ期24 例，Ⅲ期35 例；初診64 例，復發4 例；病情穩定期23 例，活動期45 例。 常規組中，男性14 例，女性16 例；年齡35 ~ 71 歲，平均年齡(60.24 ±8.69)歲。兩組患者的性別比例及年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。 本研究經醫院倫理委員會批準。所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 所有研究對象均采集外周靜脈血2 ~3 ml，3 500 r/min 離心10 min，分離血清，上清液收集到EP 管中，在－80℃下保存待測。 用酶聯免疫法測定VCAM-1、IL-2 和IL-6 的水平，檢測試劑盒從ZYscience 獲得。 檢測過程嚴格按照試劑盒的說明和實驗室慣例進行。 設置空白孔、標準孔和待測樣品孔，將樣品稀釋液、標準稀釋液和待測血清依次加入孔板中，充分混合，靜置120 min。 加入底物工作液，加入終止液并充分混合，然后用酶標儀測定吸光度值。

1.3 觀察指標 比較觀察組與常規組研究對象，以及不同疾病分期、不同疾病狀態MM 患者的VCAM-1、IL-6、IL-2 水平。 繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評估各指標診斷MM 的效能。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0 統計學軟件對數據進行處理。 符合正態分布的計量資料用均數±標準差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較用LSD-t 檢驗。 計數資料用例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗。 偏態計量資料采用中位數(p25，p75)表示，多組間比較采用man-Whitney U 檢驗、Kruskal Walls H(K)檢驗，進一步雙向比較采用Dunn-Bonferroni 檢驗。 評估指標的診斷效果采用ROC 圖，指標間的相關性分析采用Spearman 相關分析。 以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較 觀察組患者的IL-2水平低于常規組，VCAM-1、IL-6 水平均高于常規組，組間比較，差異有統計學意義(P<0.05)。 見表1。

2.2 不同疾病分期MM患者VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較 MM Ⅲ期患者的VCAM-1、IL-6 水平高于Ⅰ期和Ⅱ期，且MM Ⅱ期患者的IL-6 水平高于Ⅰ期，差異均有統計學(P <0.05)。 MM 不同疾病分期患者的IL-2 水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。 見表2。

表1 兩組VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較(±s)

表1 兩組VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較(±s)

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-2/pg·ml-1IL-6/pg·ml-1常規組(n ＝30) 207.55(121.83，329.56) 452.07(274.32，548.19) 38.70 ±9.60觀察組(n ＝68) 1 053.64(555.76，1 475.94) 229.63(163.23，316.87) 112.64 ±35.02 Z/t 值 －6.806 －4.717 11.348 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

表2 不同疾病分期MM 患者VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較(±s)

表2 不同疾病分期MM 患者VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較(±s)

注，與Ⅰ期比較，①P<0.05；與Ⅱ期比較，②P<0.05

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-6/pg·ml-1IL-2/pg·ml-1Ⅰ期(n ＝9) 589.48(221.65，684.91) 35.66 ±5.12 256.29(207.11，305.60)Ⅱ期(n ＝24) 608.58(405.89，1 035.23) 119.47 ±9.75①234.68(161.71，298.23)Ⅲ期(n ＝35) 1 463.44(1 138.41，1 901.99)①②182.79 ±16.09①②217.43(193.26，266.87)Z/F 值 29.823 156.043 1.348 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

2.3 不同疾病狀態MM 患者VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較 MM 活動期患者的VCAM-1、IL-6 水平均高于穩定期，IL-2水平低于穩定期，差異有統計學意義(P<0.05)。 見表3。

2.4 VCAM-1、IL-2、IL-6 診斷MM 的效能 ROC 曲線顯示，VCAM-1、IL-2、IL-6 均是診斷MM 的有效指標(P <0.05)。見表4 及圖1、2。

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-2/pg·ml-1IL-6/pg·ml-1活動期(n ＝45) 1 203.62(730.74，1 592.12) 208.68(182.07，262.15) 141.39 ±30.07穩定期(n ＝23) 639.10(427.24，887.99) 265.29(199.92，353.89) 83.89 ±24.05 Z/t 值 －3.571 －2.184 7.953 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

表4 VCAM-1、IL-2、IL-6 診斷MM 的效能

圖1 VCAM-1、IL-6 診斷MM 的ROC 曲線

圖2 IL-2 診斷MM 的ROC 曲線

2.5 MM 患者VACM-1 與IL-2、IL-6 的相關性 Spearman相關分析顯示，VACM-1 水平與IL-2 呈負相關(r ＝－0.379，P<0.05)，與IL-6 呈正相關(r ＝0.605，P<0.05)。

3 討論

MM 的腫瘤細胞高度依賴骨髓微環境，而VCAM-1 作為一種血管粘附分子，可以通過調節VCAM-1 軸引發骨髓基質細胞的變化，進而引起骨髓微環境的顯著改變，導致MM 疾病的發生和發展[10]。 然而，關于VCAM-1 水平及其在MM患者中意義的研究有限，VCAM-1 可應用于MM 診斷的實際切點仍未明確。 近年來，隨著研究的不斷深入，全身性炎癥反應與MM 發病之間的聯系被不斷探索，持續的炎癥狀態為惡性腫瘤的發展建立了微環境，而惡性腫瘤則促進了炎癥反應的發生[11]。 王碧薇等[12]研究表明，MM 患者的IL-6 水平與患者分期和預后相關。 Matthes 等[13]研究表明，IL-6 是一種旁分泌因子，由微環境產生，主要由骨髓系細胞產生。 因此，IL-6 是MM 疾病發生發展過程中的一個重要血清指標。而IL-2 在多種惡性血液病中發揮著重要作用，相關研究表明，MM 患者外周血單個細胞核中IL-2 的產生存在障礙，且MM 患者的IL-2 低于健康人群[14]。 因此，本研究選擇上述指標進行分析，以期為MM 的臨床診斷和治療提供參考。

以往臨床上對MM 的診斷主要是根據臨床表現和細胞組織等形態學檢查，但隨著檢測手段的進步，近年來流式細胞儀、細胞遺傳學和血液遺傳學方法已逐漸應用于MM 的診斷[15]。 但上述檢查方法仍受可行性和資源的限制，難以在三級預防中應用。 本研究結果顯示，觀察組MM 患者的VCAM-1 和IL-6 水平明顯高于常規組，IL-2 水平明顯低于常規組，提示了通過各項指標診斷MM 的可能性。 本研究還發現，VCAM-1、IL-2 和IL-6 是診斷MM 的有效指標，其中，IL-6的療效最高。 VCAM-1 診斷MM 的臨界點為398.19 ng/ml，可供臨床參考。 但本研究只是一個單中心研究，納入的樣本量相對較少，預計大樣本量的多中心研究將進一步驗證研究結果。

本研究結果還顯示，不同疾病狀態和不同疾病分期的MM 患者之間的VCAM-1 水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，Ⅲ期及活動期MM 患者的VCAM 和IL-6 水平更高，進一步表明了VCAM-1 和IL-6 在MM 疾病進展中的作用。 VCAM-1 是一種細胞粘附分子，由血管內皮細胞產生，其高表達表明機體的血管內皮細胞被激活。 VCAM-1 表達水平的升高參與了白細胞和血管內皮功能受損之間的相互作用，可以促進炎癥因子的釋放和T 細胞亞群的變化，影響疾病的進展[16]。 而且，機體的炎癥微環境和免疫功能的改變都是影響惡性腫瘤發展的重要因素。 在MM 患者的骨髓微環境中，可以觀察到輔助性Th1/Th2 平衡紊亂，調節性T 細胞增加，導致MM 細胞的免疫逃逸，以及Th17 等分泌的細胞因子介導的促腫瘤作用[17]，所以，進展期MM 患者的VCAM-1 水平更高。 本研究結果還發現，MM 患者的VCAM-1 水平和IL-6 水平呈正相關，這也支持上述結論。 同時，惡性腫瘤的生長、發展和轉移均與新生血管有關[18]。 有研究報道，VCAM-1 可以促進血管生成，具有血管內皮細胞的趨化性[19]，這也可能是VCAM-1 參與MM 疾病進展的機制之一。本研究數據顯示，不同疾病階段的MM 患者IL-2 水平相似，但IL-2 水平在活動期較低，并與VCAM-1 水平呈負相關。考慮到所有Ⅰ~Ⅲ期的MM 患者的外周血單核細胞中IL-2的產生都有障礙，而且，患者的IL-2 功能障礙水平相似，因此出現了這種結果。

綜上所述，VCAM-1、IL-2 和IL-6 水平在MM 患者中變化明顯，有助于MM 的診斷。