上海地區成人網織紅細胞相關參數參考區間的建立

徐倩倩， 姜王慶， 沈林杰， 陸英杰， 陳 健， 蔣浩琴

（復旦大學附屬華山醫院檢驗醫學科，上海 200040）

網織紅細胞（reticulocyte，RET）是晚幼紅細胞脫核后但尚未完全成熟的紅細胞，是反映骨髓紅系造血功能以及判斷貧血和相關疾病療效的重要指標，臨床上常用RET絕對計數和百分比來反映紅細胞增生活性[1]。隨著血細胞分析儀的不斷改進，許多新參數被發現，儀器不僅可計數骨髓釋放的RET數量，還可檢測網織紅細胞血紅蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RETHe），并可通過校正公式計算外周血中網織紅細胞生成指數（reticulocyte production index，RPI）。RET-He含量是指RET細胞質中的血紅蛋白含量，與機體內貯存鐵數量密切相關，可反映體內鐵蛋白代謝最新狀態，用于缺鐵性貧血、鐵利用障礙等慢性功能性貧血的診斷和鑒別診斷，其相關參數對貧血的診斷和鑒別診斷及療效觀察有重要的參考價值[2]。目前，儀器法檢測RET相關參數參考區間的報道不多，臨床上難以有效利用這些新的、有價值的檢測參數。本研究通過采用全自動血液分析儀對2 080名體檢健康者外周血RET及其相關參數進行檢測，建立上海地區成人網織紅細胞相關參數的參考區間，以提高RET在臨床血液、腎臟等疾病中的應用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2019年1月—2020年5月復旦大學附屬華山醫院體檢健康者2 237名，其中男1 095名、女1 142名，年齡18～88歲。納入標準：無明顯感染癥狀和貧血表現，無血液系統相關疾病，白細胞計數為（3.5～9.5）×109/L，C反應蛋白<10 mg/L，男性血紅蛋白為130～175 g/L、女性血紅蛋白為115～150 g/L。排除標準：空腹血糖>6.1 mmol/L或糖化血紅蛋白異常，三酰甘油>3.0 mmol/L，膽固醇>8.0 mmol/L，天門冬氨酸氨基轉移酶>75 U/L，肌酐>120 μmol/L，尿素>12 mmol/L，尿液紅細胞計數>10個/高倍鏡視野或尿液白細胞計數>5個/高倍鏡視野；近期服用鐵劑；3個月之內獻血；處于哺乳期及妊娠期。

1.2 方法

用真空采血管（紫色蓋，美國BD公司）采集所有研究對象靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采用日本Sysmex公司XN-9000全自動血液分析儀及配套試劑、質控品檢測RET及相關參數：網織紅細胞百分比（the percentage of reticulocyte，RET%）、網織紅細胞絕對值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、未成熟網織紅細胞百分比（immature reticulocyte fraction percentage，IRF%）、低熒光強度網織紅細胞百分比（low fluorescence intensity reticulocyte percentage，LFR%）、中熒光強度網織紅細胞百分比（medium fluorescence intensity reticulocyte percentage，MFR%）、高熒光強度網織紅細胞百分比（high fluorescence intensity reticulocyte percentage，HFR%）、RET-He、RPI。所有樣本均在采集4 h內完成檢測。檢測前已進行儀器校準和性能驗證，確保當日質控在控。

1.3 統計學方法

采用SPSS 24.0軟件進行統計分析。采用Dixon法剔除離群值。采用Kolomogrow-Smirnov正態性檢驗分析RET相關參數的數據分布情況。呈非正態分布的計量資料以中位數（M）[四分位數（P25，P75）]表示，2個組之間比較采用Mann-Whitney檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，采用百分位數法（P2.5～P97.5）建立參考區間。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RET相關參數的數據分布

共剔除157個離群值，最終納入2 080名體檢健康者，其中男1 059名，年齡（41.9±12.1）歲；女1 021名，年齡（40.4±11.8）歲。Kolomogrow-Smirnov檢驗結果顯示，RET相關參數均呈偏態分布（P<0.05）。見表1。

表1 RET相關參數的數據分布

2.2 不同性別之間RET相關參數檢測結果比較

男、女性之間各項RET參數差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同性別之間RET相關參數檢測結果比較

2.3 不同年齡之間RET相關參數檢測結果比較

將所有研究對象按年齡分為18～40歲組、41～60歲組和61～80歲組。RET%、RET#、RPI各年齡組之間差異均無統計學意義（P>0.05）。41～60歲組、61～80歲組IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He與18～40歲組比較差異均有統計學意義（P<0.05），而41～60歲組與61～80歲組之間差異均無統計學意義（P>0.05）。見表3。

表3 不同年齡之間RET相關參數檢測結果比較

2.4 各年齡組不同性別之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He的比較

18～40歲組中，男、女性之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差異均有統計學意義（P<0.05）。見表4。

表4 18～40歲組不同性別之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He比較

將4 1～6 0歲組和6 1～8 0歲組合并為41～80歲組，男、女性之間除RET-He差異有統計學意義（P<0.0 5）外，其他項目差異均無統計學意義（P>0.0 5）。見表5。

表5 41～80歲組不同性別之間RET參數比較

2.5 上海地區成人RET相關參數參考區間

對差異無統計學意義的不同年齡、性別各組進行合并，采用百分位數法建立參考區間。見表6、表7。

表6 上海地區成人RET%、RET#、RPI參考區間

表7 上海地區成人IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He參考區間

2.6 參考區間的驗證

另收集2020年6月15日—6月25日復旦大學附屬華山醫院體檢健康者血常規檢測標本40份，其中男、女性樣本各20份。對建立的RET相關參數的參考區間進行驗證，結果顯示，40份樣本的RET相關參數檢測結果均在建立的參考區間內，驗證通過。

3 討論

RET是晚幼紅粒細胞和成熟紅細胞之間的過渡細胞，可用于精確診斷貧血，評估貧血治療后的再生性，監測接受重組紅細胞生成素治療、化療或骨髓移植患者愈后狀況[3]。RET可分為高熒光強度網織紅細胞（high fluorescence intensity reticulocyte，HFR）、中熒光強度網織紅細胞（medium fluorescence intensity reticulocyte，MFR）、低熒光強度網織紅細胞（low fluorescence intensity reticulocyte，LFR），HFR和MFR的總和是未成熟網織紅細胞（immature reticulocyte fraction，IRF），IRF、HFR、MFR、LFR、RPI是反映造血功能的新參數。其中，HFR、MFR和LFR變化比RET#或RET%變化更敏感，因此可用來鑒別診斷慢性溶血性貧血和化療引起的骨髓抑制性貧血，以及血液透析所致的貧血[4-6]。

RPI可客觀反映RET的生成情況。RET%或RET#會受RET在外周血帶網時間影響而偏高或偏低，如RET在外周血帶網時間延長，RET就會偏高；帶網時間減少，則會假性偏低。RPI通過RET成熟時間校正貧血造成的RET提前釋放因素，可更真實地反映骨髓增生情況，因此臨床上一般采用RPI來消除RET帶網時間影響[7]。有研究發現，RPI水平可敏感地反映骨髓紅細胞增生狀態，輔助鑒別貧血類型，包括進一步鑒別溶血性貧血和非溶血性貧血[8]，這也是后續本研究擬結合更多貧血指標進行聯合分析的內容。健康人群RET-He在RET完整生命周期中是恒定的，RET-He是RET細胞質中的血紅蛋白含量，可反映體內鐵蛋白代謝的最新狀態。

本研究建立的RET相關參數參考區間與目前采用的參考區間相比，范圍更寬，且相關參數數據基本呈偏態分布，其中RPI參考區間[0.90～2.40（男）、0.60～1.80（女）]與標準理論值1相比差異明顯，原因可能是RPI敏感性比較高，更易受飲食、運動、應激狀態等各種因素影響，而本研究未排除體檢人群近期是否運動、服用補品、處于生理期前后或壓力過大等影響因素，導致離散值較大。IRF和HFR均為幼稚RET，在正常人外周血中含量較少，機體大量失血或處于應激狀態時才會代償性增加，是反映造血功能最敏感的指標[9]。本研究結果顯示，男性、女性RET相關參數差異均有統計學意義（P<0.001），男性RET%略高于女性，LFR%略低于女性，提示男性紅細胞更新速度快于女性，與男性紅細胞計數高于女性相符，與其他地區結果[10]一致。

本研究結果顯示，不同年齡組之間RET#、RET%、RPI差異均無統計學意義（P>0.05），IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差異均有統計學意義（P<0.001）；隨著年齡的增長，RET%、RET#、IRF%、RPI均先上升，再逐漸下降，而LFR%隨著年齡的增長逐漸升高，提示隨著年齡的增長，紅細胞的生成能力會逐漸減弱，這與李小龍等[10]報道的情況類似。本研究RET-He參考區間（男30.4～35.6 pg、女27.8～34.6 pg）低于趙麗娟等[11]的研究（男30.2～36.0 pg、女29.1～35.4 pg），可能因為本研究的研究對象為上海地區人群，而后者的研究對象為長春地區人群，提示不同人群由于地理環境、生活方式以及生理結構等因素影響，機體內鐵含量會不同，從而導致不同地區人群RET-He含量有所差異。因此，各臨床實驗室均應建立各自的參考區間。

綜上所述，本研究初步建立了上海地區健康成人外周血RET相關參數的參考區間，進一步提高了RET相關參數的臨床應用價值，有利于貧血類疾病、腎性貧血等疾病的診斷、鑒別診斷和療效觀察。