老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表達及其與預后的關系

李露 陳璇 錢俊峰

(麗水市人民醫院呼吸內科，浙江 麗水 323000)

隨著老齡化加劇，老年肺癌發病率不斷上升，且病死率較高〔1，2〕。肺癌早期癥狀較為隱匿，通常確診時已屬中晚期，錯失最佳根治時機，且我國晚期肺癌患者5年生存率低于15%〔3～5〕。因此，采取及時有效的診治老年肺癌患者方法對改善患者預后尤為關鍵。近年來，分子靶向治療肺癌成為新的突破方向和熱點。多項研究證實，長鏈非編碼RNA(lncRNA)和微小RNA(miR)在各種腫瘤中發揮重要作用，且通過與靶向mRNA3′端非翻譯區結合，以此干擾靶基因表達，從而發揮功能〔6，7〕。本研究旨在探討老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表達及其與預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇麗水市人民醫院2016年3月至2020年3月收治的老年肺癌患者120例為研究組，其中男73例，女47例；年齡65～79歲，平均(72.13±4.25)歲；體重指數17～29 kg/m2，平均(23.16±1.89)kg/m2；分化程度：低分化68例，中、高分化52例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期74例；淋巴結轉移72例。2017年3月至2020年3月老年健康體檢者102例為對照組，其中男62例，女40例；年齡65～78歲，平均(71.42±4.19)歲；體重指數18～27 kg/m2，平均(23.02±1.92)kg/m2。兩組一般資料無統計學差異(P>0.05)。納入標準：(1)經病理組織學證實為肺癌，且均為非小細胞肺癌；(2)年齡≥65歲；(3)具有完整臨床資料和隨訪資料；(4)簽署知情同意書。排除標準：(1)其他類型肺癌；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)存在其他嚴重臟器疾病者；(4)嚴重精神疾病者。

1.2方法 采用實時熒光定量PCR法(qRT-PCR)測定外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達，抽取受試者外周靜脈血5 ml，分離提取血清，將其置于-80℃冰箱內保存備用，采用TRIzol試劑(美國Invitrogen公司)提取血清總RNA，取5 μl總RNA進行瓊脂糖凝膠電泳并檢測總RNA的純度和完整度。按照逆轉錄試劑盒(美國Biomiga公司)使用說明書將其逆轉錄為cDNA，以U6作為內參基因，檢測外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達。取cDNA進行qRT-PCR，總反應體系20 μl：SYBER GREEN 6.8 μl、PCR上游引物0.4 μl、DYE Ⅰ 0.4 μl、PCR下游引物0.4 μl、cDNA 2.0 μl、RNase-free H2O 10 μl，混勻，置于實時熒光定量PCR儀擴增。反應條件：95℃預變性10 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，共完成40個循環，每個樣品設置3個復孔。采用2-ΔΔCt法分析結果，ΔCt=Ct目的基因-CTU6；ΔΔCt=ΔCt實驗組-ΔCt對照組。

1.3預后評價 隨訪至2021年12月，記錄老年肺癌患者總生存期(OS)，OS指從診斷日起至任何原因的死亡或至隨訪末。主要采取門診復診、電話、微信、上門隨訪等多種方式隨訪。

1.4觀察指標 (1)比較研究組與對照組Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達；(2)不同病理特征Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達；(3)觀察預后與Gm31083 mRNA、miR-450b-5p mRNA表達關系；(4)分析影響老年肺癌患者預后危險因素。

1.5統計學處理 采用SPSS25.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、Kaplan-Meier法、Log-rank檢驗及Logistic回歸分析。

2 結 果

2.1研究組與對照組Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達比較 研究組Gm31083 mRNA表達(1.87±0.35)高于對照組(0.97±0.03)，而miR-450b-5p mRNA表達(0.46±0.13)低于對照組(1.01±0.02)，差異有統計學意義(t=36.126、42.21，均P<0.05)。

2.2不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達比較 不同性別、年齡、體重指數、腫瘤直徑和分化程度Gm31083 mRNA表達比較無明顯差異(P>0.05)；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表達高于Ⅰ～Ⅱ期，miR-4506-5p mRNA表達低于Ⅰ～Ⅱ期；淋巴結轉移Gm31083 mRNA表達高于無淋巴結轉移，miR-4506-5p mRNA表達低于無淋巴結轉移，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達比較

2.3預后與Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達關系 低表達Gm31083患者OS(31個月)長于高表達Gm31083(17個月)；高表達miR-450b-5p患者OS(33個月)長于低表達miR-450b-5p(16個月)，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1，圖2。

圖1 Gm31083 mRNA表達與預后關系

圖2 miR-450b-5p mRNA表達與預后關系

2.4影響老年肺癌預后危險因素 TNM分期、淋巴結轉移、Gm31083和miR-450b-5p為影響老年肺癌患者危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響老年肺癌預后危險因素

3 討 論

肺癌是威脅人類健康的一種重大疾病，且是全球范圍發病率最高的一種惡性腫瘤，其死亡率和患病率位居惡性腫瘤第一位〔8，9〕。肺癌常見病因與職業因素(如煤焦油、石棉等)、電離輻射、家族史、大氣污染、肺部慢性疾病(如肺結核、慢性阻塞性肺疾病等)及人體內在因素有關〔10，11〕。肺癌通常無自身典型臨床表現，且很容易發生區域淋巴結轉移及遠處轉移。由于肺癌早期臨床表現無明顯特異性，早期診斷尚有困難，大部分患者發現時已屬Ⅲb～Ⅳ期，已伴區域淋巴結轉移及遠處轉移，故而整體5年生存率較低，預后較差〔12，13〕。

LncRNA是基因表達的一種重要調控因子，現已證實，LncRNA在多種生物學過程中均發揮重要作用，成為惡性腫瘤研究的熱點〔14，15〕。LncRNA在腫瘤細胞中的異常表達可作為促癌基因或抑癌基因，參與腫瘤細胞分化、增殖、凋亡、侵襲等過程中〔16,17〕。本研究表明，老年肺癌患者Gm31083高表達；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表達高于Ⅰ～Ⅱ期，且淋巴結轉移Gm31083 mRNA表達高于無淋巴結轉移，由此可見老年肺癌患者Gm31083高表達與Ⅲ～Ⅳ期和淋巴結轉移呈正相關；老年肺癌患者表達越高預后越差。

miR主要是在線粒體內發現的具有高度進化保守性的一種非編碼小RNA，具有復雜的生物學功能。近年來多項研究證實，在腫瘤發生、發展中一些miRNA家族起重要作用，故而通過對miR的調控提高抗腫瘤療效及改善預后是當前在治療肺癌領域中新的突破方向〔17～19〕。miR-450b-5p是miRNAs中的一員，其在多種惡性腫瘤中異常表達，但在肺癌中研究較少。張雷等〔20〕研究表明，miR-450b-5p在肝細胞癌組織和細胞系中表達均明顯降低，且其表達水平與腫瘤大小、靜脈侵犯、TNM分期及預后相關，為影響肝細胞癌患者獨立預后因素之一。本研究表明，老年肺癌患者miR-450b-5p低表達；miR-450b-5p高表達與Ⅲ～Ⅳ期和淋巴結轉移呈負相關；且老年肺癌患者miR-450b-5p表達越低預后越差。

綜上，老年肺癌患者外周血Gm31083高表達，而miR-450b-5p低表達，且與TNM分期、淋巴結和預后密切相關，且Gm31083和miR-450b-5p為影響老年肺癌患者危險因素。