8味中藥對腹瀉仔豬大腸桿菌抑制試驗研究

林松泉

（廈門惠盈動物科技有限公司，福建 廈門 361023）

從腹瀉仔豬體內分離出1株大腸桿菌[1]，通過試驗發現，該病菌致病性較強，且對大多數的抗生素具有耐藥性。隨著國家替抗、減抗政策的實施，尋求抗生素替代品具有重要意義。

中草藥以天然植物為主，其具有對環境無污染、對機體不產生耐藥性及毒副作用低等優點，因而逐漸引起人們的關注[2]。本試驗選取市場上較為常見、常用的8味中藥，先進行體外抑菌試驗，測試其抑菌活性，再通過小鼠體內試驗，驗證其抑菌活性。同時選取市場上銷售的5種復合中藥產品進行體外抑菌試驗，通過對比試驗，分析這8味中藥的抑菌效果，并為中藥方劑的研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗指示菌。大腸桿菌[1]（Escherichia coli）分離自腹瀉仔豬。

1.1.2 試驗用中藥及市場上的中藥產品。純中藥魚腥草、蒲公英、金銀花、姜黃、板藍根、白頭翁、黃柏和黃連皆由藥店采購。

產品A：黃芪、姜黃、甘草；產品B：黃柏、黃芪、黃連、板藍根；產品C：杜仲、蒲公英、金銀花；產品D：黃芩、黃柏、大青葉；產品E：白頭翁、黃連、黃柏。該5種中藥產品皆從市場上采購。

1.2 試驗方法

1.2.1 中藥前處理。將8味純中藥分別稱取100 g，加入500 mL自來水于高壓蒸汽滅菌鍋中110℃滅菌2 h。過濾，收集濾液后再次進行煮沸濃縮，最終定容至100 mL（此時1 mL中藥液相當于1 g原中藥），4℃保存備用[3-4]。

將8味純中藥及5種中藥產品分別稱取100 g，加入500 mL自來水于37℃恒溫搖床內180 r/min振蕩 2 h。過濾，收集濾液后再次進行煮沸濃縮，最終定容至100 mL（此時1 mL中藥液相當于1 g原中藥），4℃保存備用。

1.2.2 中藥體外抑菌試驗。挑取活化后的大腸桿菌菌泥，稀釋至活菌數約108CFU/mL，吸取2 mL菌懸液加入50℃保溫的200 mL營養瓊脂培養基中搖勻，傾倒平板，冷卻凝固后將滅菌后的牛津杯置于平板上。向牛津杯中各自加入中藥濃縮液0.1 mL，于37℃環境中培養24 h。觀察有無抑菌圈產生，并用游標卡尺測量抑菌圈直徑大小。

1.2.3 小鼠致病性及治療試驗。選取100只健康小鼠隨機分成10組，每組10只，采用選取的8味中藥進行小鼠體內抑菌試驗。給病菌感染組及8味中藥試驗組的小鼠腹腔注射菌濃約為106CFU/mL的病菌懸液0.5 mL/只，對照組注射0.5 mL/只的0.85%無菌生理鹽水。將8組中藥試驗組各自按10 mL/kg用藥量加入蒸煮炮制的中藥濃縮液至日糧及飲水中，10組日常喂食管理一致，飲水自由。連續觀察7 d，計算小鼠死亡只數，并剖檢死亡小鼠，取臟器進行病菌分離。

2 結果與分析

2.1 中藥體外抑菌試驗

將8味中藥經過2種不同處理后獲得的濃縮液，對大腸桿菌進行抑制試驗。試驗結果表明，進行簡單溶水、浸泡的中藥中，魚腥草、蒲公英、金銀花、板藍根及白頭翁對大腸桿菌無抑制效果；姜黃、黃柏和黃連抑制效果較差，表現為低敏感。對中藥進行蒸煮處理后，蒲公英、金銀花、姜黃、白頭翁、黃柏和黃連對大腸桿菌的抑制效果明顯提升，多數表現為中敏感；魚腥草、板藍根則對該大腸桿菌無抑制效果；而市場上的5種復合中藥產品經過浸泡處理，對該大腸桿菌的抑制效果較差或無效果。具體試驗結果見表1。

表1 中藥體外抑菌效果

通過浸泡、蒸煮2種方式炮制中藥，在大腸桿菌的抑制試驗中發現，經過蒸煮處理的中藥，其抑制大腸桿菌的效果優于浸泡處理方式。說明蒸煮炮制中藥能將中藥材的有效成分提取出來，使其發揮藥性。

2.2 小鼠致病性及治療試驗

采用本試驗所選取的8味中藥進行小鼠體內抑制大腸桿菌試驗，結果見表2。在小鼠體內注射大腸桿菌后的1周，病菌感染組小鼠全部死亡，死亡率達100%。說明該大腸桿菌具有較強的致病性及致死率。采用中藥進行治療的8組中，魚腥草、板藍根組小鼠死亡率達100%，其他6組中藥組小鼠死亡率為50%～80%。與病菌感染組小鼠死亡率100%相比，對該大腸桿菌具有一定抑制效果的中藥為蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏。

表2 小鼠致病性試驗結果

3 討論

將8味中藥經過簡單浸泡與高溫蒸煮2種不同方式處理后獲得的濃縮液，對大腸桿菌進行抑制試驗的結果表明，同種中藥經過蒸煮處理，其抑制大腸桿菌效果優于浸泡處理方式。說明蒸煮炮制中藥能將中藥材的有效成分提取出來，使其更好地發揮藥性。有研究表明[6]，中藥炮制的方法及工藝不同，直接影響臨床治療效果。本研究采用2種不同方式處理中藥，其表現出的結果也不同。關于魚腥草[7]、板藍根[8]的抑菌活性研究報道結果不一，本研究發現，這2味中藥無抑菌效果。另外，本研究中其他中藥抑菌活性與別的學者[9-11]的研究結果也不盡相同。綜合分析，原因可能為不同來源的大腸桿菌對中藥的敏感性不一樣[12]，且中藥炮制溫度及時間不同對藥效也有影響[13]。

在小鼠致病性及治療試驗中，魚腥草、板藍根組的致死率與病菌感染組一致，達100%，說明魚腥草、板藍根無法治療因大腸桿菌所引起的疾病，該結果與魚腥草、板藍根對大腸桿菌無抑制效果的結論相一致。而小鼠死亡率較低的蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏中藥組，其在體外試驗中對大腸桿菌抑制效果較好，與該結果也一致。但是黃連在體外試驗中對大腸桿菌的抑制效果優于蒲公英、金銀花、黃柏，而在小鼠的治療試驗中反而死亡率比蒲公英、金銀花和黃柏組高，針對該現象，后續需進一步研究探討。

通過上述試驗研究發現，選取的8味中藥對治療小鼠大腸桿菌的效果較差，效果最優組死亡率僅降低至50%，總體來說治療效果較差。而于市場上購買的中藥產品在抑菌殺菌功效上也相對較低。通常市場上流通的復合中藥產品，主要是將常規的中藥材進行粉碎后復配而形成，故其藥材的有效成分難以溶解出來，加之使用者多直接拌料使用，未做進一步處理，故抑菌殺菌效果較差，甚至無效果。

4 結論

通過對所選取的8味中藥進行體外抑制大腸桿菌及體內治療小鼠試驗發現，蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏能降低小鼠約50%的死亡率，通過高溫蒸煮方式處理的中藥能有效提高其抑菌活性。在對市場上5種復合中藥的體外抑菌試驗中發現，它們抑菌效果較差或無效果。綜上分析，經過簡單處理的中藥制劑，其抑制該大腸桿菌的效果較差。后續將繼續深入研究，優化中藥炮制方式，提高抑菌活性。