CT灌注成像參數與肺腺癌組織中SIX2、MVD的關系

曾海燕

肺腫物的術前診斷主要依靠CT，而CT灌注成像對明確病變性質有重要價值[1]。CT灌注參數中血流量（BF）、血容量（BV）和強化峰值（PH）是重要指標，近年研究顯示其與腫瘤間質微血管密度可能相關[2]。同源異型蛋白SIX2（SIX2）是近年關注的與腫瘤形成和腫瘤間質微血管生成相關的因子[3]。CD31是臨床標記腫瘤間質血管新生的重要指標，能客觀評估間質的微血管密度（MVD）[4]。本研究基于肺腺癌進行觀察，應用CT灌注成像技術，探討其相關參數BF、BV和PH與腫瘤組織中SIX2和MVD的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月-2022年1月松滋市人民醫院確診為肺腺癌并行手術根治的79例患者作為研究對象。納入標準：術前均行CT灌注成像掃描；檢查后1個月內行腫物切除術，術后均行病理學檢查，且符合WHO中肺腺癌的診斷標準，并經兩名病理主治醫師復閱切片后證實。排除標準：呼吸系統先天畸形；雙原發癌或多原發癌；合并較為嚴重的內科系統疾病。其中男33例，女46例；年齡41～85歲，平均（59.8±6.2）歲。本研究經醫院倫理委員會批準通過，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 CT掃描方法 應用本院飛利浦CT進行評估。患者取仰臥位，掃描范圍為肺尖至上腹部，掃描時間共為 30 s，層厚 3 mm，層距 3 mm，行標準的重建。注入碘海醇（3.5 ml/s）50 ml，延遲時間 7 s。分析灌注成像參數，距結節周邊3 mm內繪制ROI，分析灌注相關參數，記錄BF、BV和PH。

1.2.2 SIX2和MVD檢測 基于術后肺腺癌的石蠟包埋組織檢測，應用免疫組化二步法完成。SIX2和CD31試劑均購自上海碧云天生物公司，均為濃縮液。以預試驗中觀察到的最理想顯色濃度進行正式實驗（SIX2為1∶150，CD31為1∶200），DAB顯色，嚴格按說明書操作，設陽性對照，做好質控。SIX2的陽性部位是腫瘤細胞的細胞漿，以染成黃色或棕黃色為陽性，先在100倍鏡下選擇3個染色密集的上皮細胞分布區，然后在200倍鏡下觀察，計算陽性率。CD31以血管內皮的細胞漿和細胞膜染成黃色或棕黃色為陽性，以連續細胞簇或分支狀連續內皮細胞判定為微血管，共選擇3個區域（200倍）進行MVD的計數，取平均值進行分析。

1.3 觀察指標

比較不同病變類型（原位腺癌、微浸潤性腺癌、浸潤性腺癌）及浸潤性腺癌不同病理情況（有無胸膜累犯、有無淋巴結轉移、分化程度）患者BF、BV和PH，SIX2陽性率及MVD。分析浸潤性腺癌BF、BV和PH與MVD的關系。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較

原位腺癌、微浸潤性腺癌和浸潤性腺癌患者BF、BV和PH值有增高趨勢，即浸潤性腺癌中BF、BV和PH的值最高（P＜0.05），見表1。

表1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較（±s）

表1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較（±s）

*與原位腺癌比較，P＜0.05；#與微浸潤性腺癌比較，P＜0.05。

病變類型 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU）原位腺癌（n=21） 84.87±13.04 8.10±1.70 297.45±27.51微浸潤性腺癌（n=15） 96.52±11.17* 9.13±2.32* 324.43±17.30*浸潤性腺癌（n=43） 132.26±18.69*# 13.36±2.21*# 352.15±43.14*#F值 70.26 57.17 16.91 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 不同病變類型患者SIX2陽性率及MVD比較

原位腺癌、微浸潤性腺癌和浸潤性腺癌患者SIX2的陽性率、MVD值有增高趨勢，即浸潤性腺癌中SIX2的陽性率、MVD值最高（P＜0.05），見表2。

表2 不同病變類型患者SIX2陽性率及MVD比較

2.3 不同病理情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較

有淋巴結轉移肺浸潤性腺癌患者BF、PH和MVD均明顯高于無淋巴結轉移患者，有胸膜累犯肺浸潤性腺癌患者MVD明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05），見表3、表4、表5。

表3 不同胸腺累犯情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表3 不同胸腺累犯情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

胸腺累犯情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個）無胸膜累犯（n=24） 131.80±16.55 13.23±2.25 350.87±19.13 23.95±3.36有胸膜累犯（n=19） 136.65±13.35 13.56±2.34 359.45±29.25 31.99±3.02 t值 1.04 0.47 1.16 8.14 P值 0.305 0.641 0.056 ＜0.001

表4 不同淋巴結轉移情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表4 不同淋巴結轉移情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

淋巴結轉移情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個）無淋巴結轉移（n=32） 126.53±16.25 13.06±2.52 340.32±19.04 24.26±4.45有淋巴結轉移（n=11） 151.56±33.32 14.15±3.32 383.28±13.42 33.30±5.90 t值 3.23 1.15 6.89 5.34 P值 0.002 0.258 ＜0.001 ＜0.001

表5 不同分化情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表5 不同分化情況浸潤性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

分化情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個）高-中分化（n=25） 129.12±23.82 13.19±3.08 349.96±33.35 27.06±4.47低分化（n=18） 136.12±23.03 14.24±3.11 357.55±32.35 28.52±4.49 t值 0.96 1.10 0.75 1.06 P值 0.341 0.279 0.460 0.297

2.4 浸潤性腺癌不同病理情況患者SIX2陽性率比較

有胸膜累犯肺浸潤性腺癌患者SIX2陽性率明顯高于無胸膜累犯患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表 6。

表6 不同病理情況浸潤性腺癌患者SIX2陽性率比較[例（%）]

2.5 浸潤性腺癌BF、BV、PH和MVD值的相關性

在肺浸潤性腺癌中，Pearson相關性分析顯示PH和MVD值具有正相關性（r=0.461，P=0.034）。其他各指標間未見相關性（P＞0.05）。

3 討論

肺CT灌注成像能在術前反映腫瘤間質的血管形成情況，能較好地觀察局部腫瘤組織的血液灌注狀態，是無創性操作，具有可重復性的特征[5]。其參數中以BF和BV更客觀，對術前評價腫瘤的病理特征有一定價值[6-7]。肺腺癌在形成和進展過程中伴隨著間質血管的增生，為富于血管的腫瘤，這不僅為腫瘤的生長提供支持結構和營養基礎，也為腫瘤轉移提供了直接途徑[8-9]。血管生成的研究中離不開血管內皮生長因子（VEGF），在VEGF大量分泌后，可以引起間質中CD31陽性的血管內皮細胞分裂繁殖，細胞呈枝芽狀生長，在血流的沖擊下，形成具有功能的血管。因此CD31陽性的細胞的表達程度可在一定程度上代表著新生的血管。影響血管生成的因素較多[10-11]。近年學者對SIX1、SIX2和SIX6關注較多，其表達與組織的發育和部分幼稚細胞成熟有關[12]。機體中SIX2的表達較少，尤其在成熟的正常上皮細胞中罕見表達，當細胞惡性轉變后其表達明顯升高，尤其在高增殖性腫瘤中，SIX2的升高程度更明顯。SIX2高表達時能對多種促癌基因進行調控，如對CyclinAl、CyclinDl等。也有研究認為SIX2能使E-cadherin的表達異常，調控細胞的遷移和黏附[13-14]。SIX2是VEGF的上游因子，活化后通過其受體VEGFR2促進間質的血管新生[15]。

本研究結果顯示原位腺癌、微浸潤性腺癌和浸潤性腺癌患者BF、BV、PH值、SIX2的陽性率、MVD值有增高趨勢，即浸潤性腺癌中BF、BV、PH、SIX2的陽性率、MVD值最高（P＜0.05），提示BF、BV、PH、MVD值和SIX2陽性率在原位腺癌、微浸潤性腺癌和浸潤性腺癌中有逐漸增高趨勢，因此臨床術前應用CT灌注技術檢測BF、BV、PH的值可能有更重要的意義。結果顯示肺浸潤性腺癌中BF、PH、MVD在有淋巴結轉移患者中的值明顯高于無淋巴結轉移的患者（P＜0.05），提示BF與PH、MVD可能與腫瘤細胞淋巴結播散有關。結果顯示有胸膜累犯肺浸潤性腺癌患者SIX2陽性率明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05）。提示SIX2高表達可能對促進病變直接蔓延或向周圍組織和器官侵襲有一定意義。結果顯示有胸膜累犯肺浸潤性腺癌患者MVD明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05）。提示組織中MVD值可在一定程度上能判斷是否有胸膜累犯及有無淋巴結轉移。Pearson相關性分析顯示在肺浸潤性腺癌中，PH和MVD值具有正相關性（r=0.461，P=0.034）。提示術前積極檢測PH可能在一定程度上提示微血管分布程度。肺癌的形成與上皮細胞的不典型增生相關，腫瘤對間質侵襲形成浸潤性腫瘤，呈蟹足樣向周圍組織浸潤，對局部組織形成明顯破壞，易于侵犯胸膜和心包等[16-17]。SIX2的作用具有多向性，主要作為上游基因，調控VEGF、MMP-9等相關因子，促進腫瘤進展[18-19]。本研究將術前的BF、BV、PH的結果與術后組織中MVD聯系在一起，發現的術前指標與術后組織相關指標的關系可以為術前綜合評估提供幫助。

綜上所述，CT灌注成像參數中BF、BV和PH與肺腺癌的病變類型相關，BF、PH均與淋巴結轉移相關，PH與腫瘤組織中MVD具有相關性，這為術前判斷腫瘤的生物學行為提供了參考指標。腫瘤組織中SIX2的表達升高可能對間質的血管生成有一定促進作用。