新型冠狀病毒抗體的臨床應(yīng)用及假陽性分析

倪濤 李文杰 張瑩 張尊哲

作者單位：310003 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院

2019年年底，新型冠狀病毒肺炎（novel coronavirus pneumonia，NCP）在湖北武漢爆發(fā)并迅速播散［1］，國際病毒分類學(xué)委員會命名其為新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）［2］，該病毒被歸為乙類傳染病同時(shí)按甲類傳染病管理［3-4］。SARSCoV-2核酸目前是確診新型冠狀病毒肺炎的主要標(biāo)準(zhǔn)，然而檢測耗時(shí)長，步驟繁瑣，對醫(yī)護(hù)有暴露風(fēng)險(xiǎn)，且會導(dǎo)致假陰性出現(xiàn)［5］。血清學(xué)特異性抗體檢測目前是輔助診斷病毒性疾病的重要手段，“新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）”將SARS-CoV-2抗體IgG和IgM抗體作為臨床確診標(biāo)準(zhǔn)之一［6］。然而有研究指出SARS-CoV-2 抗體檢測試劑在使用過程中存在一定的假陰性和假陽性［7］，本研究聚焦分析SARS-CoV-2抗體的假陽性結(jié)果，旨在為新型冠狀肺炎感染篩查及診斷提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2020年3月至2021年2月期間于本院住院，且未接種過任何新冠疫苗的3,114例患者，包括1,868例男性和1,276例女性，年齡從1歲至96歲。平均年齡41歲，中位年齡43歲，腫瘤疾病484例，血液病521例，呼吸系統(tǒng)疾病637例，風(fēng)濕免疫性疾病132例，泌尿系統(tǒng)疾病278例，其他疾病1,062例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集 肝素抗凝管采集3 mL靜脈全血，離心機(jī)3,000 rpm/min離心10 min，排除不合格標(biāo)本例如血脂和溶血。核酸標(biāo)本由采樣人員采集咽拭子或鼻拭子標(biāo)本，放置在裝有1.5 mL保存液的保存管中，由專用的轉(zhuǎn)運(yùn)箱移送至PCR實(shí)驗(yàn)室。

1.3 儀器與試劑 SARA-CoV2-2抗體IgM/IgG檢測使用安圖A2,000PLUS化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑，復(fù)查采用SARA-CoV2-2抗體 IgM/IgG金標(biāo)法試劑盒（北京英諾特生物技術(shù)公司），新冠核酸檢測采用中山達(dá)安DA3,200核酸提取儀及配套核酸提取試劑，賽默飛ABI7,500熒光定量PCR儀。所有操作均嚴(yán)格按照SOP執(zhí)行，每日操作前確保質(zhì)控通過。

1.4 核酸RNA檢測 待測標(biāo)本通過56 ℃，30 min滅活，根據(jù)操作SOP，用磁珠法通過DA3,200核酸提取儀提取核酸。再通過熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸，對可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，必要時(shí)重新采集送檢。

1.5 特異性抗體檢測 采用化學(xué)發(fā)光免疫捕獲法檢測IgM抗體，采用化學(xué)發(fā)光免疫間接法檢測IgG抗體，根據(jù)SOP操作流程，取患者血清于安圖A2,000PLUS化學(xué)發(fā)光儀上機(jī)，檢測結(jié)果＞1.0 S/CO為陽性，對陽性或異常結(jié)果采用膠體金法進(jìn)行復(fù)檢，兩種檢測方法結(jié)果均為陽性時(shí)判定為陽性結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以［n（%）］表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新型冠狀病毒特異性IgM/IgG抗體及核酸檢測結(jié)果 共計(jì)84例患者新型冠狀病毒IgG陽性，29例患者新型冠狀病毒陽性，這些患者均無疫情地旅居史，無確診患者密切接觸史，無胸悶、胸痛發(fā)熱及呼吸道感染等異常癥狀，影像學(xué)檢測也未見明顯異常改變，新型冠狀病毒核酸檢測均為陰性，所以可以判斷抗體檢測結(jié)果均為假陽性。新型冠狀病毒抗體檢測結(jié)果，見表1。

表1 SARA-CoV-2特異抗體檢測結(jié)果

2.2 不同性別新型冠狀病毒抗體IgG/IgM假陽性結(jié)果比較 786例樣本中，新型冠狀病毒抗體IgG檢測假陽性結(jié)果中男51例，女33例；新型冠狀病毒抗體IgM男16例，女13例，男女假陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 新型冠狀病毒抗體IgG/IgM不同年齡段假陽性結(jié)果比較 新型冠狀病毒抗體IgG的假陽性主要分布在46歲及以上，其中46～60歲假陽性率最高，占3.36%，≤30歲假陽性率最低，占1.23%。新型冠狀病毒抗體IgM的假陽性率相比IgG明顯減低（P＜0.05），主要分布在46歲及以上，其中46～60歲假陽性率最高，占1.48%，≤30歲及＞90歲未發(fā)現(xiàn)假陽性，見表2。

表2 SARA-CoV-2特異抗體假陽性標(biāo)本的年齡分布［n（%）］

2.4 不同疾病SARA-CoV-2特異抗體IgG/IgM陽性結(jié)果比較 SARA-CoV-2特異抗體IgG一共假陽性84例，其中腫瘤38例，約占45.24%，包括肺癌14例、肝癌5例、前列腺癌4例、乳腺癌4例、胃腸癌5例、甲狀腺癌5例、腎癌1例；血液病26例，占30.95%，包括再生性障礙貧血8例、急性白血病6例、骨髓增生異常綜合征7例、慢性淋巴細(xì)胞白血病3例，慢性粒細(xì)胞白血病2例；風(fēng)濕性疾病7例，占8.33%，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡2例、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎5例；呼吸系統(tǒng)疾病3例，均為感染性肺炎，占3.57%；泌尿系統(tǒng)疾病4例，占4.76%，其中尿路感染1例，腎功能衰竭3例；其他疾病6例，占30.95%。IgM一共假陽性29例，其中腫瘤15例，占51.72%，包括肺癌6例，胃腸癌4例，乳腺癌3例，甲狀腺癌2例；風(fēng)濕性疾病4例，占13.79%，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡2例，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎2例。血液病5例，占17.24%，包括急性白血病2例。髓增生異常綜合征3例。呼吸系統(tǒng)疾病2例，均為感染性肺炎，占6.90%。其他疾病3例，占10.34%。各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

目前SARA-CoV-2肺炎的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)主要包括病毒核酸熒光定量PCR檢測、全基因組序列同源性分析、IgG及IgM抗體檢測SARA-CoV-2屬于β家族的冠狀病毒，為有包膜、非節(jié)段的RNA病毒，它存在的多種蛋白比如N蛋白、P蛋白、S蛋白在氨基酸排列上與多種非典型性肺炎病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV）有近92%的相似度［8］，同時(shí)與其他多種其他不致病或致病力較弱的冠狀病毒存在序列上的相似，這類病毒也會誘使人體產(chǎn)生類似的抗體，對結(jié)果造成一定的干擾。同時(shí)由于存在交叉抗體、高濃度弱親和力的抗體或蛋白干擾、基質(zhì)干擾、勾狀效應(yīng)以及方法學(xué)的差異，均會造成新型冠狀病毒特異性抗體的假陽性［9］。

本研究納入3,114例未接種過新冠疫苗的患者，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清中SARA-CoV-2抗體IgG/IgM，并使用金標(biāo)法驗(yàn)證，以兩者結(jié)果同時(shí)陽性判斷為陽性，以RT-PCR法檢測的SARA-CoV-2核酸RNA為金標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)IgG假陽性84例，IgM假陽性29例，假陽性率分別為2.69%及0.93%。不同性別SARA-CoV-2抗體IgG/IgM之間假陽性率接近，顯示假陽率與性別無明顯相關(guān)。從年齡上看＞45歲年齡SARACoV-2抗體假陽性率更高，推測＞45歲的患者由于基礎(chǔ)疾病增多，血液中存在多種干擾物質(zhì)比如溶酶體、自身抗體、免疫因子，從而造成假陽性結(jié)果。SARA-CoV-2抗體IgG/IgM假陽性疾病構(gòu)成比中，主要分布于腫瘤及血液病患者，推測腫瘤及血液病病人自身抵抗力較弱，體內(nèi)免疫機(jī)制異常，加上治療藥物的影響，會對結(jié)果造成干擾。本研究中有3例患者IgG及IgM抗體均為假陽性，2例為系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者，1例為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，年齡均在70歲以上，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查，他們的類風(fēng)濕因子、抗Sm抗體、抗核蛋白等免疫指標(biāo)均陽性，推測是由于自身抗體的影響，對結(jié)果造成假性干擾，由于研究所限諸多假陽性原因需進(jìn)一步確證。

綜上所述，目前新型冠狀病毒肺炎的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)為SARS-CoV-2核酸檢測以及全基因組序列同源性分析，SARA-CoV-2抗體檢測作為一個(gè)具有臨床應(yīng)用價(jià)值的輔助手段不能單獨(dú)作為新型冠狀病毒肺炎的確診及排除依據(jù)。