高效液相色譜法同時測定食品中5種添加劑

唐 奕

（邵陽市食品藥品檢驗所，湖南邵陽 422000）

食品企業在產品中添加甜味劑（安賽蜜、糖精鈉）和防腐劑（苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸），以改善食品的口感、延長保質期[1]。《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）對適用范圍和限量要求都作出了明確規定[2]。目前這5種食品添加劑使用多個方法標準進行檢測，同時測定的報道甚少，造成檢驗效率低，實驗成本高[3]。本試驗在GB 5009.28—2016[4]、GB 5009.121—2016[5]、GB/T 5009.140—2003[6]的基礎上，優化試驗條件，同時測定以上5種食品添加劑，以科學高效保障食品質量安全。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器、配自動進樣器）；mini UV超純水機。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸，國家標準物質，1000 μg/mL，北京海岸鴻蒙標準物質技術有限公司；甲醇，色譜純；乙酸銨、亞鐵氰化 鉀、乙酸鋅、硫酸鋅和氫氧化鈉，分析純。

試驗樣品為碳酸飲料、含乳飲料、辣椒醬，市售。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液（7∶93）；流速：1 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

1.2.2 標準溶液配制

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準中間溶液（250 μg/mL）：分別準確吸取 12.5 mL安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標準儲備溶液（均為1000 μg/mL）于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準系列工作溶液：分別準確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準中間溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL于10 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成質量濃度分別為25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL和125 μg/mL的混合標準系列工作溶液。

1.2.3 流動相比例

試驗選用甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動相，分別采用5∶95、7∶93、10∶90這3種不同的比例進行混合標準溶液的測定。

1.2.4 樣品預處理

稱取約2 g碳酸飲料于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，超聲20 min，加水定容至刻度，過0.22 μm濾膜，待測[3]。

稱取約2 g含乳飲料、辣椒醬于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，超聲20 min，冷卻至室溫，加沉淀劑以沉淀蛋白質，混勻，加水定容至刻度，于8000 r/min離心，取適量上清液過0.22 μm 濾膜，待測。本次試驗選用兩種沉淀劑進行比較測定：沉淀劑1為亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）+乙酸鋅溶液（220 g/L）各2 mL；沉淀劑2為硫酸鋅（120 g/L）+ 氫氧化鈉（20g/L）各2 mL。

2 結果與分析

2.1 流動相比例的確定

流動相比例的變化直接影響分離效果、出峰時間和順序，結果顯示甲醇∶乙酸銨溶液比例為5∶95時30 min全部分離，分離效果好，具體情況見圖1；比例為7∶93時25 min全部分離，分離效果好，具體情況見圖2；比例為10∶90時20 min全部分離，分離效果欠佳，出峰順序略有改變，糖精鈉在山梨酸前面出峰，兩個峰略有重疊，當樣品基質復雜時，容易出現雜質與目標物質分離不開，影響測定結果，具體情況見圖3。綜合考慮，本試驗選擇甲醇與乙酸銨的比例7∶93進行檢測。

圖1 甲醇∶乙酸銨=5∶95時色譜圖

圖2 甲醇∶乙酸銨=7∶93時色譜圖

圖3 甲醇∶乙酸銨=10∶90時色譜圖

2.2 混合標準曲線的線性關系

按1.2.1條件進行混合標準系列工作溶液的測定，以保留時間和峰面積對濃度分別進行線性回歸，5種添加劑在25～125 μg/mL范圍內呈現良好的線性關系，安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙 酸相關系數分別為0.9999、1.0000、1.0000、0.9999和0.9999。

2.3 加標回收率的測定結果

按本方法進行樣品制備，分別在試樣中加入5.0 mL 安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸 （50 μg/mL）混合標液（理論加標量為0.25 mg），根據樣品類別分別預處理后按1.2.1條件進行測定，做2個平行樣。其中，含乳飲料和辣椒醬采用2種沉淀劑進行前處理，然后測定。同時做樣品空白。

表1～表3結果顯示，5種添加劑的平均回收率為82.6%～104.4%，相對標準偏差為1.3%～4.6%。表2、表3結果顯示，2種沉淀劑回收率、精密度均達到理想效果。

表1 回收率測定結果及精密度（碳酸飲料）

表2 回收率測定結果及精密度（含乳飲料）

表3 回收率測定結果及精密度（辣椒醬）

3 結論

本文建立了同時測定食品中5種添加劑的高效液相色譜法，該方法簡單快速，分離效果好，回收率高，精密度好，提高了檢測效率，降低了檢驗成本。選用的2種沉淀劑（亞鐵氰化鉀溶液+乙酸鋅溶液、硫酸鋅+氫氧化鈉）回收效果好，均適用于樣品中蛋白質的沉淀處理。