生活飲用水水質微生物檢驗結果分析

文安敏

（貴州省遵義市播州區疾病預防控制中心，貴州遵義 563100）

現階段，飲用水最迫切的安全問題是微生物污染問題，這也是世界范圍的難題。消除安全問題最有效的方法為生活飲用水微生物檢查。符合國家規定的飲用水都是經由相關處理，水中微生物達到一定標準，且人們能夠安全飲用的水[1]。世界衛生組織調查發現，水污染導致世界上約12億人發生了腸道傳染性疾病，其中大約有400萬人因為水污染疾病死亡，所以生活飲用水質量把控工作十分重要[2]。近幾年，我國加強了生活飲用水質量監測工作，以確保生活飲用水中所含有的微生物含量符合國家標準；但是在輸送等過程中也可能出現二次污染的問題，導致水中微生物含量超標，因此微生物檢驗是檢驗生活飲用水質量的重要方式，能夠保證飲用水質量安全[3-4]。 濾膜法是一種行之有效的微生物檢測方式，該方法操作極為便利，在檢測前會對水質當中的雜質進行判別，但是檢測結果的準確性較差[5]。為此，本次研究主要采用濾膜法與多管發酵法兩種微生物檢測技術對生活飲用水中微生物進行檢測，并觀察結果。

1 材料與方法

1.1 材料

研究抽取180份生活飲用水（枯水期90份，豐水期90份），時間段為2020年4月到2021年4月，樣本檢測遵循《生活飲用水標準檢驗方法水樣收集和保存》[6]中記載的流程實施采集及保存，兩組基線資料差異無統計學意義（P＞0.05）。將枯水期與豐水期的飲用水標本分別進行濾膜法實驗（即對照組）與多管發酵法（即觀察組）。

1.2 試劑與儀器

生物顯微鏡，型號XSP-12CA，上海光學儀器一廠；生物安全柜，型號BSC-1500IIB2-X，濟南鑫貝西生物技術有限公司；高壓蒸汽滅菌消毒器，型號BKQ-B50II，濟南泰醫生物技術有限公司；電熱鼓風干燥箱，型號DHG-9240A，武漢若瑞德科技有限公司；電熱恒溫培養箱，型號DHP-9012，上海燈晟儀器制造有限公司；紫外光燈，型號BOT-IIA，北京士博瑞科技有限公司。

乳糖蛋白胨培養液（PB95789-250 g）、伊紅美蘭瓊脂培養基（PA95908-250 g）、EC-MUG培養基（PC 95790-250 g）、革蘭氏染色液（PB231292-100 mL×4）， 均為廣東翁江化學試劑有限公司生產。

1.3 實驗方法

1.3.1 濾膜法實驗

在燒杯中放入濾膜，加入蒸餾水，將其煮至沸騰，循環沸騰3次之后，將其實施15 min的常規殺菌措施，再對燒杯實施清潔，保證無殘留物后再次煮沸。將濾膜粗糙面向上，使用無菌鑷子取出，再放在無菌濾床上。取出水樣100 mL。開啟閥門實施抽濾，過濾完成后實施5 s抽氣，再關閉濾器閥門，使用滅菌鑷子除去濾膜，放入品紅硫酸鈉培養基上，確保有細菌殘留面朝上，在使用電熱恒溫培養箱進行 培養。

1.3.2 多管發酵法

把10 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養液中，取1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養液中，另取1 mL水樣加入到9 mL滅菌生理鹽水中稀釋10倍，即0.1 mL水樣與10 mL單料乳糖蛋白胨培養液混合，每一稀釋度接種5管。從自來水廠出來的水，應當時常檢測，或每天檢測1次，可以與5份容積為10 mL水樣品雙料培養基相混合，每份與10 mL水樣品相混。若檢測水源發現嚴重污染，則要擴大稀釋度，可以與1 mL、0.1 mL、0.01 mL，甚至0.1 mL、0.01 mL、0.001 mL相混，每稀釋度對接5管，每種水樣品共對接15管。與低于1 mL水樣品對接時，稀釋時，必須遵守逐步增加的原則，可進行10倍遞增的稀釋，再與1 mL對接，每上升 1次，更換1次1 mL滅菌刻度吸管。完成接種之后，將接種管置恒溫培養箱，36 ℃培養24 h。在培養后，觀察試管中是否有產酸產氣，如所有乳糖蛋白胨培養管都不產酸產氣，則報告大腸菌群陰性，若是陽性則將產酸產氣管轉種紅美蘭瓊脂平板中，再使用培養箱36 ℃培養18～24 h，在完成培養后，密切觀察菌落形態，如果發現紫黑色且有金屬光澤、淡紫色且無金屬光澤的菌落，則必須染色后鏡檢，在染色工作完成之后，鏡檢結果凸顯革蘭氏陰性無芽孢桿菌，同時接種乳糖蛋白胨培養液進行證實試驗，置恒溫培養箱36 ℃培養24 h，有產酸產氣者，即證實有總大腸菌群存在。再進行耐熱大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測。

1.3.3 統計學方法

使用SPSS19.0統計軟件處理數據。計數資料用（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 枯水期檢出率比較

枯水期一般為每年12月至次年4月全年流水量最少的時期，此時間段的降雨量較為稀少、地表水流枯竭，主要依靠地下水補給水源。相對而言，水中菌群的活躍度降低、水中微生物不易繁殖。如表1所示，采用濾膜法與多管發酵法在檢測枯水期飲用水樣本時發現，兩種方法對大腸菌群、雜菌的檢出數量之間的差異較小（P＞0.05），與濾膜法（對照組）相比，多管發酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出率偏高（P＜0.05）。

表1 枯水期檢出率比較

2.2 豐水期檢出率比較

豐水期一般為5月—9月，此時間段氣溫持續升高且多為雨水充沛或高山溶雪補給的時期，因此水中菌群異常活躍、導致微生物的大量繁殖，若未能徹底消毒，在飲用后可引起感染。如表2所示，在豐水期分別采用濾膜法與多管發酵法檢測后，兩種方法在大腸菌群、雜菌的檢出數量之間無顯著性差異 （P＞0.05），與濾膜法（對照組）相比，多管發酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出數量較高（P＜0.05）。

表2 豐水期檢出率比較

3 結論與討論

水是一切生命活動的起源，是人類及動植物生命過程中不可缺少的一項重要資源，也是生物體重要的組成部分。社會的可持續發展離不開工業、農業及城市建設，就目前的情況來看，工業生產時排放未處理的廢水、農業生產過程中大量使用農藥和肥料，及城市垃圾、廢氣與污水等是造成水污染的主要原因，水質污染的情況也越發嚴重。水污染直接影響到飲用水源的水質，同時飲用水源中的微生物總含量超標也對人們的健康造成嚴重影響，水污染已成為威脅人類生命安全的重要問題。因此，有關部門還需加強對水源的保護，切實提高對飲用水質的檢測技術，已保障生活飲用水的水質質量。

微生物檢測是評價水源、生活飲用水水質情況的一項重要指標，加強對水質的監測、提高檢測合格率，是保障居民用水安全，預防水源性疾病的重要手 段[7-8]。在日常飲水的微生物檢測方法中，多管發酵法是研究水樣大腸菌類的一種使用率較高的方法，能夠有效檢測水中的總大腸菌群。總大腸菌群的主要種類是革蘭氏陰性菌，它是無芽孢桿菌，在36 ℃培養24 h的條件下，此類菌種會產生發酵乳糖并產酸產氣，而其自身具有需氧、厭氧的屬性，可利用培養基以及其他試劑實施培養及檢測[9]。本實驗中采用濾膜法及多管發酵法均能檢出水源中大腸菌群和雜菌，且兩種方法檢出的數量之間存在顯著差異性，但對于大腸埃希菌和耐熱大腸菌群而言，多管發酵法檢出的數量更高（P＜0.05）。

綜上所述，在對飲用水質量進行控制的過程中采用合理的措施，可以促進飲用水的質量得到提升，保證人們的身體健康，使人們可以飲用質量合格的生活飲用水。