重度抑郁癥患者血清谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)、NR1亞基mRNA水平表達(dá)及意義

湯繼聰

黑龍江省大慶市第三醫(yī)院成人心理一病區(qū) 163000

抑郁癥是一種情感性精神障礙疾病，患者以顯著而持久的情緒低落、思維遲緩為臨床特征[1]。近年來，隨著工作及生活壓力的不斷增加，抑郁癥發(fā)病率呈逐年上升趨勢，給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。有研究指出，抑郁癥患者及動(dòng)物模型體內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸及其受體表達(dá)水平呈狀態(tài)性變化，提示谷氨酸水平及其傳遞功能異常可能在抑郁癥發(fā)病過程中起重要作用[2-3]。谷氨酸能神經(jīng)傳遞功能主要通過離子通道型受體介導(dǎo)，其主要受體：M-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA)由NR1等7個(gè)不同亞基組成。早期研究發(fā)現(xiàn)，顳葉頂部NMDA受體結(jié)合率下降，NR1亞基免疫活性也明顯下降[4]。由此可見，外周血谷氨酸及其受體表達(dá)水平能反映中樞情況。目前，臨床關(guān)于抑郁癥患者血清谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)及NR1亞基mRNA表達(dá)水平的研究鮮有報(bào)道。因此，本文比較了重度抑郁癥患者及健康體檢者血清谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)及NR1亞基mRNA表達(dá)水平，并分析其與患者臨床特征的關(guān)系，為臨床治療抑郁癥提供新靶點(diǎn),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2020年1月—2021年6月本院收治的重度抑郁癥患者89例作為抑郁癥組。抑郁癥組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合《中國抑郁障礙防治指南(第二版)》[5]中診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)HAMD評(píng)分>24分。抑郁癥組排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)器質(zhì)性疾病引起的抑郁、焦慮；(2)入組前1個(gè)月接受長效抗抑郁癥藥物治療；(3)妊娠期婦女；(4)自身原因中途退出研究者。選取同期在本院接受健康體檢者50例作為對(duì)照組。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)體檢各項(xiàng)指標(biāo)正常，且無抑郁癥任一臨床表現(xiàn)；(2)HAMD評(píng)分<7分。對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)精神障礙史；(2)既往服用過鎮(zhèn)靜或精神活性藥物；(3)妊娠期婦女；(4)自身原因中途退出研究者。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》[6]相關(guān)要求，受試者均知情同意。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 血液標(biāo)本采集及mRNA表達(dá)量測定。(1)血液標(biāo)本：抽取兩組受試者空腹靜脈血5ml，抗凝處理后，以3 000r/min，離心10min，取上清液，置于-80℃冰箱保存待測；采用ELISA法及配套試劑盒檢測兩組谷氨酸水平，試劑盒購自Abcam公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。(2)總mRNA標(biāo)本：取以上血清標(biāo)本2ml分裝于10個(gè)EP管內(nèi)，分別加入600μl紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫靜置5min，離心處理后棄上清液，取沉淀(白細(xì)胞)，加入1ml Trizo試劑混勻后，置于-80℃冰箱保存；采用RNA提取試劑盒(購自Abcam公司)抽取總RNA，按照TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自武漢默沙克生物科技有限公司)說明將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫序列，設(shè)計(jì)引物序列：NR1亞基上游引物：5’-CCTCAAGGGGTCGCAGG-3’，下游引物：5’-CCTGGATACCGCAGCTAGGA-3’；18srRNA下游引物：5’-TCAAAAGTAAGGGTCGCAGG-3’，上游引物：5’-GCGGCGCAATACGAATGCCCC-3’。采用ABI 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國Applied Biosystems公司)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定中mRNA表達(dá)量。RT-PCR反應(yīng)體系：cDNA(1∶20)5μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，2×SYBR Green qPCR SupeiMix(Invitrogen)10μl，dH2O 4μl。反應(yīng)流程：95℃預(yù)變性2min；95℃變性5s，60℃退火34s，68℃延伸30s，40個(gè)循環(huán)。之后進(jìn)行PCR擴(kuò)增(qRT-PCR試劑盒及PCR儀均購自德國 Eppendorf 公司)，采用熒光定量PCR(qRT-PCR)數(shù)據(jù)分析(2-ΔΔCt法)檢測結(jié)果，每個(gè)樣本重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。采用(2-ΔΔCt)法計(jì)算mRNA水平。

1.2.2 心理狀態(tài)評(píng)估。采用漢密爾頓抑郁量表(HAMD-17)進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括：抑郁心境、工作與興趣、有罪感、阻滯、精神性焦慮、全身癥狀6個(gè)條目，采用5級(jí)評(píng)分法，無抑郁(<7分)、可能抑郁(7～17分)、肯定抑郁(18～24分)、嚴(yán)重抑郁(>24分)。

1.2.3 斯特魯(Stroop)色詞測試。采用3張實(shí)驗(yàn)刺激卡片進(jìn)行字色干擾測試，每張卡片印有紅、黃、藍(lán)、綠4種顏色，要求抑郁癥患者分三步完成字色干擾測試。卡片1：使用印有(紅、黃、藍(lán)、綠)4種顏色的圓點(diǎn)卡片；卡片2：用(紅、黃、藍(lán)、綠)4種顏色的彩色筆寫以上4種顏色的名稱，要求字體顏色與色名一致；卡片3：用(紅、黃、藍(lán)、綠)4種顏色的彩色筆寫以上4種顏色的名稱，要求字體顏色與色名不一致；測試過程中根據(jù)以上3種卡片，要求患者最短時(shí)間內(nèi)說出醫(yī)生所指圓點(diǎn)、漢字顏色。記錄患者測試準(zhǔn)確率、錯(cuò)誤率以及反應(yīng)時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平比較 抑郁癥組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平比較

2.2 抑郁癥組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與臨床特征相關(guān)性 血清谷氨酸水平與HAMD-17總分呈正相關(guān)(P<0.05)，與年齡、病程均無明顯相關(guān)性(均P>0.05)；血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與病程呈正相關(guān)(P<0.05)，與HAMD-17總分、年齡均無明顯相關(guān)性(均P>0.05)。見表3。

表3 抑郁癥組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與臨床特征相關(guān)性

2.3 抑郁癥組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與Stroop色詞測試相關(guān)性 血清谷氨酸水平與Stroop色詞測試各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯相關(guān)性(均P>0.05)；血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與Stroop色詞測試正確率、錯(cuò)誤率及反應(yīng)時(shí)間均呈正相關(guān)(均P<0.05)。見表4。

表4 抑郁癥組血清谷氨酸及血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與Stroop色詞測試相關(guān)性

3 討論

谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)含量最多、作用最廣的氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，其可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)揮調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)記憶、誘導(dǎo)突觸形態(tài)功能變化及神經(jīng)可塑性等重要作用，但過量表達(dá)的谷氨酸具有神經(jīng)毒性，可加速神經(jīng)元及細(xì)胞凋亡。另外，中樞神經(jīng)系統(tǒng)可與外周血液系統(tǒng)中多種免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞通過特定雙向交流途徑，維持機(jī)體谷氨酸水平穩(wěn)定，同時(shí)可表達(dá)谷氨酸受體[7-8]。因此，通過檢測外周血谷氨酸水平可以反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)情況。本文結(jié)果顯示，抑郁癥組血清谷氨酸水平高于對(duì)照組(P<0.05)。廖繼武等[9]研究表明，抑郁癥患者血清谷氨酸水平明顯高于健康對(duì)照組，且重度抑郁癥組血清谷氨酸水平明顯高于首發(fā)組及中度抑郁癥組。本文結(jié)果與上述報(bào)道一致，提示抑郁癥患者谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)興奮性增強(qiáng)，且與抑郁癥狀嚴(yán)重程度相關(guān)。

谷氨酸通過離子型和代謝型細(xì)胞膜受體發(fā)揮作用，其中離子通道型谷氨酸受體：NMDA受體具有高Ca2+滲透性，可介導(dǎo)緩慢興奮效應(yīng)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中起重要調(diào)節(jié)作用。NR1亞基是NMDA受體的基本亞基，也是實(shí)現(xiàn)離子通道功能完整性的必要元件。因此，通過檢測NR1亞基mRNA表達(dá)水平可反映NMDA受體表達(dá)情況[4，10]。早期研究表明，離子通道型NMDA受體與抑郁癥病理及治療機(jī)制有關(guān)[11]。本文結(jié)果顯示，抑郁癥組血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，提示抑郁癥患者NMDA受體NR1亞基mRNA呈異常表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)，抑郁癥患者存在谷氨酸能神經(jīng)傳遞功能異常。在相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者血清谷氨酸水平與HAMD-17總分呈正相關(guān)(P<0.05)，提示抑郁癥患者癥狀越嚴(yán)重，血清谷氨酸水平升高越明顯，與既往研究結(jié)果一致。同時(shí)，本文結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與病程及Stroop色詞測試正確率、錯(cuò)誤率、反應(yīng)時(shí)間均呈正相關(guān)(均P<0.05)，提示抑郁癥患者病程越長，谷氨酸能神經(jīng)傳遞功能紊亂越明顯，且血液NR1亞基mRNA表達(dá)水平與患者認(rèn)知障礙存在一定相關(guān)性。

綜上所述，重度抑郁癥患者存在血清谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)水平紊亂及NR1亞基mRNA表達(dá)異常。本研究存在一定局限性：(1)僅對(duì)重度抑郁癥患者血清谷氨酸水平及NMDA受體NR1亞基mRNA表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，未能就抑郁癥全病程進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察；(2)谷氨酸受體包括代謝型和離子通道型兩大類，本研究僅檢測NMDA受體NR1亞基mRNA表達(dá)情況，未對(duì)代謝型谷氨酸受體mRNA進(jìn)行檢測。今后應(yīng)擴(kuò)大樣本量，動(dòng)態(tài)觀察谷氨酸系統(tǒng)的變化進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論。